SHV型β内酰胺酶抑酶效应的研究

目的 :采用分光光度法研究革兰阴性菌产生的 4种SHV型 β内酰胺酶的抑酶效应。方法 :分别以L B作图法求取米氏常数 (Km)和最大反应速度 (Vmax) ,以Dixon作图法求取抑制常数 (Ki)。结果 :SHV 2 ,4 ,5对头孢噻肟有水解作用 ,Km 分别为5,4 ,8μmol·L- 1,相对最大水解速度分别为 4 .9% ,8.4 % ,7.8%。表明头孢噻肟对SHV 2 ,SHV 4 ,SHV 5有较高的亲和力 (低Km) ,它对SHV 2 ,SHV 4 ,SHV 5有抑制作用 ,Ki 分别为 0 .94 ,1.0 9,1.4 7μmol·L- 1。结论 :β内酰胺酶抑制剂舒巴坦对SHV 1,2 ,4 ,5均有抑制作用 ,Ki 分别为 1.68,0 .2 ,2 .33,0 .15μmol·L- 1。

肺炎克雷伯氏菌AmpC β-内酰胺酶动力学及抑酶效应的研究

对肺炎克雷伯氏菌 99- 799株产生的 Amp C型β-内酰胺酶利用分光光度法进行了酶动力学及酶抑制剂抑酶效应的研究。分别以 L - B作图法求取米氏常数 (Km)和最大反应速度 (Vmax) ,以 Dixon作图法求取抑制常数 Ki,以半对数作图法求取酶活性被抑制 5 0 %时的抑制剂浓度 IC50 。结果表明 ,Amp C酶对头孢噻啶、头孢噻吩和头孢哌酮的 Km 及 Vmax/ Km 值较苯唑西林、头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁和氨曲南的值大 ,说明Amp C酶对头孢噻啶、头孢噻吩和头孢哌酮具有较低的亲和力和较高的水解效率。此外 ,克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦 3种β-内酰胺酶抑制剂对 Amp C酶的抑制效力均很差 ,尤其是克拉维酸作用很弱。

铁基纳米材料类酶效应与急性髓系白血病诊疗技术国家重点研发项目简介

纳米酶是一类具有类似天然酶催化活性的纳米材料,自2007年氧化铁基纳米酶被中国科学家发现并首次报道以来,迄今已有超过50种不同纳米酶被发现,并用于生物、医学、农业、环境治理、国防安全等多个领域的研究.近年来,纳米酶的应用研究已从体外检测发展到体内治疗,展示出其对现代生物医学技术的重要影响及广阔的应用潜力.

禽类Mx基因GTP酶效应区(GED)序列适应性进化分析

为进一步了解禽类Mx基因进化历程及结构与功能变异,测定了4种经济类型11个地方鸡品种:肉用型(惠阳胡须鸡、清远麻鸡、文昌鸡)、兼用型(藏鸡、狼山鸡、寿光鸡、北京油鸡、萧山鸡、鹿苑鸡)、蛋用型(白耳鸡)、药用和观赏型(丝羽乌骨鸡)Mx基因GTP酶效应区(GTPase effector domain,GED)序列,并结合已报道的原鸡及部分其他鸡形目和雁形目禽类相关序列,采用mrModeltest和MrBayes筛查最适核苷酸替代模型、构建贝叶斯进化树,并采用Datamonkey和PAML4b检测位点选择压力。结果:获得了中国地方鸡种Mx基因GED区核苷酸序列,全长231 bp,编码77个氨基酸。序列联配结果表明家鸡Mx基因GED区高度保守,仅发现3个突变位点,分别位于2 032 bp、2 075 bp和2 139 bp处。AIC信息量准则表明禽类Mx基因GED区的最优核苷酸替代模型为GTR+G。基于最优模型重建的禽类Mx基因GED区贝叶斯进化树具有较高的后验概率,揭示的系统发育关系和禽类物种进化基本一致。Datamonkey的单一断裂点扫描和遗传算法扫描均未发现禽类Mx基因GED区序列数据集有重组事件,位点选择压力检测结果表明禽类Mx基因GED区在进化过程中并未受到正选择作用。

4种常见洗衣粉对酪氨酸酶的酶效应

通过实验定性分析和比较了“金鱼”“云泉”“活力２８”和“洁王”４种洗衣粉对酪氨酸酶的酶效应。探讨了十二烷基苯磺酸钠、三聚磷酸钠及次氯酸钠对该酶的影响。

氟化钠与苯并（a）芘联合的酶效应

氟化钠与苯并（ａ）芘联合的酶效应赵忠良，吴南屏，高文华在金属铝冶炼过程中可同时排放大量的氟和多环芳烃（ＰＡＨ），致癌性ＰＡＨ进入机体后，需经过代谢活化，方可产生生物学效应。氟是许多酶的抑制剂，也是一些酶的激活剂￣［１］。在致癌性ＰＡＨ的代谢活化过程中...

SHV型β-内酰胺酶动力学及抑酶效应的研究

采用分光光度法研究革兰氏阴性菌产生的2种SHV型β-内酰胺酶的动力学。分别以L-B作图法求取Km和Vmax,以Dixon作图法求取Ki。结果表明:除SHV-1对第三代头孢菌素头孢噻肟没有水解作用外,SHV型β-内酰胺酶对青霉素类、第一代、第二代、第三代头孢菌素均有不同程度水解作用。头孢噻肟对SHV-2、有较高的亲和力（低Km）,但Vmax均不超过15％。抑酶实验结果证明头孢噻肟对SHV-2、有抑制作用,β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦对SHV-1,2均有抑制作用。SHV型酶的最适pH值为6.6～7.4;最适反应温度是34℃～40℃。

巴中产栀子对大鼠肝损伤模型保肝降酶药理效应研究

目的研究巴中产栀子对大鼠肝损伤模型保肝降酶药理效应。方法采用大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4)制备肝损伤模型、分别灌胃给予栀子水溶性有效部位、70%醇溶性有效部位,速率法测定天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT),观察巴中、湖北、江西和江津产栀子对CCl4导致的大鼠肝损伤模型降低AST和ALT作用。结果四个产地栀子无论是水溶性有效部位,还是70%醇溶性有效部位均具有非常显著的降低AST和ALT作用(与肝损伤模型组Model比较,分别为P<0.001、P<0.01、P<0.02、P<0.01);栀子水溶性有效部位比70%醇溶性有效部位降低AST、ALT的效果更好,但是无显著性差异(P>0.05)。巴中产栀子提取物降低AST、ALT效果比江西、湖北、江津产栀子更好(尤其水溶性有效部位),巴中产栀子水溶性有效部位对肝损伤大鼠AST活性降低作用显著优于江津产栀子水溶性有效部位(P<0.05),非常显著优于湖北产栀子水溶性有效部位(P<0.01),极显著优于江西产栀子水溶性有效部位(P<0.001);巴中产栀子水溶性有效部位降低ALT作用与湖北、江西、江津产栀子比较有进一步降低的趋势,但是无显著的差异(P>0.05);巴中产栀子70%醇溶性有效部位降低AST、ALT作用比江西、湖北、江津产栀子更有优势,但是无显著性差异(P>0.05)。结论根据栀子对大鼠CCl4肝损伤模型保肝降酶效应研究结果证明巴中产栀子的品质更优、疗效更佳。巴中产栀子作为川产道地药材的开发研究值得各级政府和社会各界的广泛关注。

乳酸脱氢酶同工酶“非脱氢酶”效应的鉴定

一组体外循环下行心脏直视手术的患者,在开胸前后的不同时间,分别取静脉血测定乳酸脱氢酶LDH总活性及其同工酶,观察到LDH同工酶电泳谱带的LDH阳极端有一快速移动的新区带,随着手术的进行逐渐消失。经过稳定性试验、改变基质成份试验、双氧水氧化试验、异常带的定位试验及红细胞的溶血试验等,最终证实此异常带为静脉注射大剂量还原性物质VitC(200mg/kg体重)所致的“非脱氢酶”效应。并且进一步做了VitC的体内、外试验以及还原NAD和NBT反应的荧光扫描,认为用荧光扫描方法可在一定程度上防止LDH同工酶测定过程中异常的干扰作用,并为LDH同工酶“非脱氢酶”效应的鉴定提供了一套较完整的试验方法。

稻菜轮作制下汞胁迫的土壤微生物学和酶学效应

通过盆栽试验研究了稻菜轮作下不同浓度汞污染对土壤微生物和酶活性的影响,从而为稻菜轮作体制下土壤重金属污染防治、诊断提供科学理论依据。结果表明:青菜收获后,不同浓度汞处理后土壤各微生物学指标和酶学指标均表现为在较低浓度汞处理(<2 mg/kg)时有促进作用,在较高浓度汞处理(≥2 mg/kg)时表现出抑制作用。综合比较,土壤代谢商是对汞处理比较敏感的微生物学指标。青紫泥不同浓度汞处理的土壤酶活性大于小粉土。脲酶是对土壤汞胁迫比较敏感的生化监测指标,且汞对小粉土脲酶和脱氢酶活性的生态毒性强于青紫泥。

利用酶反应热效应检测过氧化氢酶活性

为了探索酶活性测定的新方法 ,降低酶活性常规测试中干扰因素的影响 ,提高酶活性测定的准确性 ,利用低电势电位差计及热电偶换能器检测过氧化氢酶活性 .结果表明 ,测定时的 H2 O2 质量分数以 9.6 %为好 ,可以用于酶活性从 0 .5 u至 3.5 u酶活力的检测 ;当 H2 O2 质量分数在 2 .4 %～ 7.2 %时 ,酶反应速率与底物浓度有线性关系 ;当底物质量分数超过 9.6 %时 。

基于负载过氧化氢酶的介孔二氧化硅粒子的酶场效应晶体管生物传感器

制备了基于负载辣根过氧化氢酶（HRP）的介孔二氧化硅（MS）粒子的酶场效应晶体管（ENFET）用来检测过氧化氢浓度的生物传感器。不同孔径的MS粒子被用作固定酶的载体构造ENFET，显著改善了酶的固定量。用负载HRP的MS粒子修饰于离子敏场效应管的栅极制成的过氧化氢敏ENFET灵敏度较传统的直接固定HRP的ENFET有显著的提高。对不同孔径的MS粒子研究发现，扩孔的MS粒子的性能更好，同时还讨论了缓冲液浓度和pH值的影响。另外，由于在MS粒子表面组装了5个复层的聚电解质，生物传感器的稳定性良好。

青霉素敏感的酶场效应晶体管的研究和应用

酶场效应晶体管(ENFET)是近年来发展起来的一类半导体技术和生物技术相结合的新型器件。双管差分输出式ENFET对环境温度变化及总体pH变化等外界因素有自动补偿作用,其输出电压随时间的漂移较之单管输出有很大的改善。此外,还可采用金电极作参比电极以实现探头的小型化。青霉素ENFET在0.01mol/L和0.02mol/L的磷酸缓冲液中的响应灵敏度分别为6.5—7.0mV/mmol/L和3.2—3.6mV/mmol/L,线性范围为0.5—14mmol/L和0.5—25mmol/L。当浸于0.01mol/L磷酸缓冲液、置于4℃下保存时,探头的贮存寿命大于6个月。探头的累计使用次数可超过1000次。本文还论述了青霉素ENFET在青霉素发酵液浓度测定中的应用。

对苯二甲酸废水厌氧反应酶竞争效应及应用

介绍了精对苯二甲酸(PTA)废水生化处理工艺流程、厌氧反应器运行状况及存在问题。研究了PTA废水中易降解脂肪酸浓度对于对苯二甲酸(TA)厌氧降解反应速率的影响,结果表明,乙酸等易降解脂肪酸对TA的厌氧降解反应有酶竞争性抑制作用;建立了废水中有易降解有机物存在时TA厌氧降解反应动力学方程并求得有关特征参数;提出了采取相应措施来解决厌氧反应器故障问题,取得良好效果。

CYP450酶抑制效应常用检测技术的研究进展

目的综述细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶抑制效应常用检测技术。方法查阅国内外近几年相关文献73篇,对CYP450酶抑制效应常用检测技术进行分析和归纳总结。结果检测CYP450酶抑制效应常用体内及体外两种模型,体内模型主要通过临床实验或动物实验联合高效液相色谱质谱联用或其他检测方法,测定给药前后CYP450酶探针底物代谢产物的变化量,反映药物对酶的抑制效应;体外模型中,常用肝微粒体与药物及相应探针底物共孵育后,检测探针代谢产物变化量初步反应药物对酶抑制效应,再利用药物处理原代或转基因细胞,通过相应检测技术测定细胞内CYP450酶相应的基因及蛋白表达量来研究药物对酶抑制机制。结论 CYP450酶抑制效应检测技术已趋于完善,为药物药代动力学和药效学研究提供了良好的保障。

果胶酶对黑加仑果汁的酶解效应

当前在加工黑加仑果酒、果汁过程中多采用进口的果胶酶,一般价格昂贵,给厂家增加加工成本。为了扩大果胶酶的来源和降低成本。

磁性铁纳米材料的细胞学效应和膜转运机制

总结和讨论了针对Fe_3O_4纳米颗粒的生物兼容性、细胞内吞和转运过程及其自身酶活性对自噬和细胞代谢的研究,对于磁性纳米材料在体内抗氧化、自噬调控、疾病和辐射治疗等相关研究具有重要的参考和启发意义。

舒巴坦和硫酸黄连素对禽大肠埃希氏杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的抑制作用

对临床分离产ESBLs的禽源大肠埃希氏杆菌进行了体外抑菌试验,并利用分光光度法进行了酶动力学及酶抑制剂抑酶效应的研究.结果表明,头孢噻呋(CTF)对ESBLs的M IC值>128 mg.L-1,与舒巴坦(SBT)联用(m∶m=2∶1)后平均值降为12.7 mg.L-1,与硫酸黄连素(BBR)联用(m∶m=1∶1 000)后降为16 mg.L-1.SBT和BBR都可以降低ESBLs对CTF的水解;CTF与SBT不同配比(m∶m=2∶1,4∶1)对CTF的抑酶保护率平均值分别为94.4,93.0%,CTF与BBR配比(m∶m=1∶10)抑酶保护率平均值为90.8%;酶动力学方面,SBT,BBR与CTF配比的Km值有明显的升高,即酶与CTF的亲和力变小,Vm ax并没有明显的降低,Vm ax/Km(有效水解率)有明显的降低(P<0.05),CTF与SBT不同配比(m∶m=2∶1,4∶1)的Vm ax/Km(平均值)降为5.6,5.0 s-1,CTF与BBR配比(m∶m=1∶10)降为8.4 s-1,说明CTF与SBT不同配比(m∶m=2∶1,4∶1)间的抑酶效果没有明显差异(P>0.05),但BBR的抑酶效果低于SBT.

产金属β-内酰胺酶嗜麦芽寡养单胞菌的研究

目的探讨嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β-内酰胺酶的酶学特性及分子生物学特征。方法采用纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株;测定产酶株所产β-内酰胺酶对亚胺培南的稳定性和丝氨酸β-内酰胺酶、金属β-内酰胺酶抑制剂的抑酶保护效应;检测金属β-内酰胺酶的等电点;用PCR法检测金属β-内酰胺酶全基因,并测序。结果纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株4株,药敏试验显示对多种抗菌药物耐药。酶稳定性试验显示,4株产酶菌产碳青霉烯水解酶。酶抑制试验表明,克拉维酸对这4株菌所产酶无抑酶保护效应,而金属β-内酰胺酶抑制剂EDTA对4株菌所产酶有抑制作用,且酶活性能被ZnCl2复活。等电聚焦显示,2株菌(710、750)产的碳青霉烯水解酶pI为6.6,1株菌(603)的pI为6.2,EDTA抑制试验证实均为金属β-内酰胺酶。PCR结果显示,以4株细菌基因组DNA为模板,用所设计的金属β-内酰胺酶全基因引物进行PCR扩增,2株(750,710)扩增结果为阳性,进行序列分析,均为867bp。经GeneBank网上同源性比较,发现与金属酶L1的编码基因blaS(注册号AJ291672.1)的核苷酸序列同源性均为99%。结论嗜麦芽寡养单胞菌710和750号产L1型金属β-内酰胺酶;603号可能产非L1型金属β-内酰胺酶。