PCR线性杂交酶显色法与BD960液体法在耐多药结核杆菌药敏结果的对比分析

目的评价PCR-线性杂交酶显色法(以下称"显色法")与BD960液体法检测结核杆菌对INH及RFP耐多药结核杆菌药敏试验结果的对比分析。方法随机选取疑似结核病患者痰标本680例中得到的涂片阳性标本180例,其中结核分枝杆菌耐药分离株88例(分离株),以BD960液体法为金标准,采用显色法与BD960液体法对INH及RFP耐药性检测,比较两种方法的药敏结果的相符性。结果分离得到耐药结核杆菌菌株88例,显色法测得单耐INH79株、单耐RFP68株,同时耐INH和RFP61株。BD960液体法测得单耐INH80株、单耐RFP67株,同时耐INH和RFP61株;单耐INH两法测定相符74例,相符率为84.09%(74/88);单耐RFP两法测定相符65例,相符率为73.9%(65/88)(P<0.05),因而两种方法之间差异有统计学意义。结论显色法与BD960法,两者具有很好的一致性。前者为耐多药患者对INH和RFP药敏检测提供更为快速有效的诊断方法。

地高辛标记引物酶显色法检测HBV基因多态性及应用

目的 建立地高辛标记引物酶显色法 ,用于DNA芯片检测HBV基因多态性 ,并对实验条件进行优化。方法 用地高辛标记引物进行HBVDNA前C/C区和P区双重PCR ,制备含地高辛标记的DNA样品目的片段 ,并将目的片段杂交于含HBVDNA核苷酸序列野生型及突变型探针的DNA芯片上 ,用抗地高辛抗体 碱性磷酸酶进行显色 ,并转印于尼龙膜上 ,最后用光学扫描仪读取结果。结果 通过一次杂交反应同时获取HBVDNA前C/C区 (1896、1814 )、BCP区 (176 2、176 4 )和P区 (5 5 2 )位点的信息。杂交温度与时间为 4 2℃ 1h、酶作用和显色时间分别为 30min和 4 5min时结果较理想 ,采用高盐浓度洗涤获满意杂交信号 ,批内CV均在 15 %左右 ,敏感度为 2 .0× 10 3 拷贝 /ml。 5 0例乙型肝炎患者突变率 5 2 .0 % (2 6 / 5 0 ) ,以上各位点突变率分别为 34.0 %、2 2 .0 %、38.0 %、38.0 %、4 .0 %。结论 地高辛标记引物酶显色法用于芯片检测HBV基因常见位点多态性 ,简便易行 ,试剂成本显著降低 ,不需特殊设备 ,易于临床推广应用。

PCR-线性杂交酶显色法检测结核分枝杆菌耐药性效果分析

目的探讨PCR-线性杂交酶显色法(以下称显色法)检测结核分枝杆菌对异烟肼及利福平耐药性的临床价值。方法选择结核病患者的临床痰标本471份,其中结核分枝杆菌分离株120株(分离株)、痰涂阳性标本351份(痰涂标本)。采用显色法对两种标本行异烟肼及利福平耐药性检测,以传统的比例法药敏试验作为金标准,比较两种方法所用的检测时间,分析显色法检测的灵敏性、特异性、阳性预测值及阴性预测值。结果显色法对分离株及痰涂标本耐药性的检测时间均少于比例法(P<0.01)。显色法检测分离株中异烟肼耐药的灵敏性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别为93.33%、100%、100%及97.83%,利福平分别为90.91%、100%、100%及98%;痰涂阳性标本中异烟肼耐药的灵敏性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别为83.33%、97.97%、88.24%及97%,利福平分别为89.66%、97.27%、86.67及97.94。结论显色法检测结核分枝杆菌对异烟肼、利福平耐药的灵敏性和特异性均较高,可在24 h内获得检测结果,是一种快速、可靠检测结核分枝杆菌耐药的方法。

PCR-线性杂交酶显色法与BD 960液体培养法对结核杆菌的鉴定及药敏结果的分析

目的评价PCR线性杂交酶显色法与BD 960液体培养法对结核分枝杆菌的鉴定及INH和RFP药物敏感结果的分析。方法在254例结核菌培养阳性及76例结核分枝杆菌药敏实验结果中,以BD 960液体培养法为金标准,采用PCR线性杂交酶显色法与BD 960液体培养法对结核菌分枝杆菌的培养及对INH和RFP药物敏感结果的检测,比较两种方法对结核分枝杆菌的鉴定及药物敏感结果的符合性。结果 PCR线性杂交酶显色法测得结核分枝杆菌238例、单敏感INH 65株、单敏感RFP 71株、同时敏感INH和RFP 60株。BD 960液体培养法测得结核分枝杆菌243例、单敏感INH 67株、单敏感RFP 77株、同时敏感INH和RFP 67株。鉴定为结核分枝杆菌两法相符229例,符合率为90.16%(229/254);单敏感INH两法测定相符57例,符合率为75%(57/76);单敏感RFP两法测定相符70例,符合率为92.11%(70/76)。结论通过PCR线性杂交酶显色法与BD 960液体培养法对结核分枝杆菌的鉴定及INH和RFP药物敏感结果的分析,发现两者一致性较好。PCR线性杂交酶显色法为结核病的确诊及INH和RFP药敏检测提供更为快速有效的诊断方法。

PCR-线性杂交酶显色法检测结核分枝杆菌耐药性的效果

分析PCR-线性杂交酶显色法检测结核分枝杆菌耐药性的效果。方法:选取2014年4月~2015年4月来我院诊治的肺结核患者90例100株临床痰标本为研究对象,其中分离株标本为45株,痰涂标本为55株,分别利用线性杂交交酶显色法以及传统比例法来进行检测。结果:显色法对分离株与痰涂标本的检测时间分别为(6.10±1.21)、(6.22±1.30)h,比例法分别为(2.11±0.62)、(4.01±2.12)个月,显色法对耐药性的检测时间少于比例法,差异有统计学意义。结论:线性杂交酶显色法对于结核分枝杆菌耐药性的检测优于比例法检测。

PCR-线性探针杂交酶显色法在结核病诊断与耐药性检测中的应用研究

目的对比PCR-线性探针杂交酶显色法(简称线性探针法)与BACTEC MGIT960液体培养及药敏在结核分枝杆菌检出率的差异,评价两种方法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的应用效果。方法选取医院结核科2013年8月-2015年5月369例确诊及疑似结核病的住院患者送检标本,同时采用线性探针法和BACTEC MGIT960对其进行结核分枝杆菌及利福平和异烟肼耐药性检测,数据采用SPSS 13.0软件进行统计分析。结果线性探针法检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的灵敏度为90.4%、特异度为97.3%、Kappa值为0.872;对异烟肼耐药性检测的灵敏度为86.6%、特异度为96.3%、Kappa值为0.841,两种方法在利福平和异烟肼耐药性检测中具有较好的一致性。结论 PCR-线性探针杂交酶显色法是一种快速、准确的结核分枝杆菌及其对利福平和异烟肼耐药性的诊断方法,对耐多药结核病的快速诊断具有显著的优点。

葡萄糖磷酸异构酶酶显色定量测定方法的建立及性能评估

目的建立葡萄糖磷酸异构酶(GPI)的酶显色定量测定方法。方法 D-果糖-6-磷酸二钠在GPI作用下生成葡萄糖-6-磷酸,葡萄糖-6-磷酸与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)作用下生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH),NADH与水溶性四氮唑盐(WST-3)反应,反应产物在550nm处有最大吸光度值,吸光度值与GPI水平呈正比。利用此原理对39例类风湿关节炎患者、52例其他自身免疫性疾病和32例健康对照者血清中GPI进行检测。同时评价该方法的线性、精密度、准确度、稳定性,并与GPI酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒进行一致性分析。结果该方法线性良好(r2=0.992 3)、精密度批内和批间变异系数均小于10%、准确度t检验显示各水平测试结果偏倚均可接受。试剂稳定性大于12个月,测试结果相对偏差在±20%以内均满足试验要求,且与GPI ELISA试剂盒相关性良好,测定结果偏差无统计学意义(P>0.05)。结论 GPI的酶显色定量测定方法的各项指标均符合临床要求,可用于临床GPI水平检测。

脂蛋白电泳结合酶显色测定血清各脂蛋白中甘油三酯及临床应用

采用琼脂糖脂蛋白电泳分离脂蛋白结合甘油三酯（Ｔｇ）酶试剂呈色，扫描出各种脂蛋白区带中Ｔｇ所占比例，同血清总Ｔｇ浓度相乘计算各脂蛋白组份中Ｔｇ的含量。结果示本法与参考法比较相关系数：ＨＤＬ－Ｔｇ、ＶＬＤＬ－Ｔｇ、ＬＤＬ－Ｔｇ分别为０．８７３、０．９５５、０．９１２。方法的批内ＣＶ：ＨＤＬ－Ｔｇ、ＶＬＤＬ－Ｔｇ、ＬＤＬ－Ｔｇ分别为８．０％～１０．２％、３．８％～６．５％、４．３％～７．０％；批间ＣＶ分别为９．５％～１６．２％、６．８％～８．５％、４．８％～９．７％。平均回收率：ＨＤＬ－Ｔｇ、ＶＬＤＬ－Ｔｇ和ＬＤＬ－Ｔｇ分别为：８８．８％、９３．４％和９１．７％。冠心病组同相应的对照组比较ＬＤＬ－Ｔｇ（０．５０±０．３２ｖｓ０．２８±０．０９ｍｍｏｌ／Ｌ）及ＬＤＬ－Ｔｇ／ＬＤＬ－Ｃｈ比值（０．２１１±０．３１６ｖｓ０．０９５±０．０３３）均显著升高。该法简便易行，是精密准确定量各脂蛋白中Ｔｇ的理想方法。ＬＤＬ－Ｔｇ及ＬＤＬ－Ｔｇ／ＬＤＬ－Ｃｈ比值为冠心病有价值的诊断指标。

环氧化酶-2在急性胰腺炎大鼠肺组织中的表达

目的探讨环氧化酶2(COX2)在大鼠急性胰腺炎肺损伤中的作用。方法大鼠胰胆管逆行注射3.5%牛磺胆酸钠,制作大鼠重症急性胰腺炎并发肺损伤模型。将实验大鼠分为正常对照组、胰腺炎1、4、8、12、24小时组。分别对胰腺损伤、肺损伤程度进行病理评分,酶显色法测定血清脂肪酶水平,并测定肺组织湿/干比;逆转录聚合酶链反应技术检测各组鼠肺组织COX2的表达。结果造模后1小时,大鼠即出现较明显的胰腺损伤,伴有血清脂肪酶升高,随着时间的延长,胰腺损伤逐渐加重,以12小时为重。造模后1小时,肺损伤评分即有升高,但肺组织湿/干比无明显变化,此后,肺损伤程度逐渐增加,以24小时为重,光镜下主要表现为肺组织炎性细胞浸润、肺泡间隔增宽、肺泡腔内渗出液、肺泡腔塌陷等。正常大鼠肺组织内COX2mRNA呈低水平表达,造模4小时后,大鼠肺组织内COX2mRNA表达明显增加,至24小时达最高水平;大鼠肺组织内COX2mRNA表达与胰腺损伤程度、肺损伤程度成正相关。结论大鼠肺组织内COX2参与了胰腺炎肺损伤的过程,抑制肺组织内COX2的表达可能有助于胰腺炎和胰腺炎肺损伤的治疗。

水痘患者血清腺苷脱氨酶的检测

目的探讨血清腺苷脱氨酶(ADA)在水痘病诊断中的临床价值。方法应用酶显色法检测105例水痘患者血清ADA活性,同时检测对照组80例丘疹性荨麻疹患者血清ADA活性,并进行比较和统计学分析。结果水痘组及对照组ADA值分别为42.39±12.26IU/L和19.88±7.25IU/L,两者ADA活性比较,差异有统计学意义(P<0.01)。在本研究的185例样本中,以ADA活性升高诊断水痘的灵敏度为0.93(99/105),特异度为0.98(79/80),Youden指数为0.93,Kappa值为0.92。结论水痘患者血清ADA活性升高,对诊断和鉴别诊断可能有一定的临床价值。

Geno-type MTBDRplus分子线性探针杂交技术在结核病诊断与耐药性检测中的应用价值

目的评价Geno-type MTBDRplus分子线性探针杂交技术显色法(以下简称杂交酶显色法)在结核病快速诊断及检测异烟肼(INH)和利福平(RIF)药物敏感中的应用。方法选取2016年1月~2019年12月的临床确诊结核病患者的临床标本413例,同时采用BD 960液体培养法和杂交酶显色法进行结核分枝杆菌检测,并对其中108株菌株进行异烟肼和利福平药敏检测,比较两种方法的一致性。结果杂交酶显色法测得结核分枝杆菌358例(86.68%),BD 960液体培养法测得结核分枝杆菌376例(91.04%);两种方法结果相符349例(84.50%)。108株菌株中杂交酶显色法和BD 960液体培养法分别检出异烟肼敏感87株(80.56%)和88株(81.48%),检出利福平敏感96株(88.89%)和94株(87.04%)。两种方法对结核分枝杆菌的鉴定及异烟肼、利福平药物敏感检测具有高度一致性。结论与BD 960液体培养法相比,杂交酶显色法检测结核分枝杆菌及异烟肼和利福平药敏更为快速有效。

肝硬化患者血清总胆汁酸和C反应蛋白的变化

目的 探讨肝硬化患者血清总胆汁酸 (TBA)及C反应蛋白 (CRP)检测的临床意义。方法 采用酶显色法和快速透射免疫比浊分析技术检测 5 6例肝硬化 (代偿期和失代偿期 )患者的血清TBA及CRP水平 ,并与正常对照组进行对比分析。结果 肝硬化患者血清TBA和CRP水平明显高于正常对照组 (P均 <0 .0 1) ,且病情越严重 ,TBA和CRP含量越高。结论 联合检测肝硬化患者血清中TBA和CRP含量 ,既有助于发现肝脏合成及代谢功能的早期损害 ,又能了解肝内炎症活动及肝细胞变性坏死的情况 。

两种分子生物学方法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的价值

目的分析南京市结核分枝杆菌(MTB)的耐药情况,评价荧光PCR熔解曲线法和PCR-线性杂交酶显色法检测结核分枝杆菌对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药的应用价值。方法回顾性分析2017年1月-2021年3月南京市公共卫生医疗中心荧光PCR熔解曲线法和PCR-线性杂交酶显色法检测151份结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药突变情况,以表型药敏试验结果为标准,评价以上2种分子生物学方法的诊断效能。结果151份结核分枝杆菌临床分离株中,6份为利福平单耐药株,9份为异烟肼单耐药株,43份为耐多药株。以表型药敏试验检测结果为标准,荧光PCR熔解曲线法检测利福平和异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率以及κ值分别为100.00%和94.23%、96.08%和96.97%、97.35%和96.02%以及0.94和0.91。以表型药敏试验检测结果为标准,PCR-线性杂交酶显色法检测利福平和异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率以及κ值分别为89.79%和86.54%、96.08%和94.12%、94.04%和93.38%以及0.86和0.85。对荧光PCR熔解曲线法和PCR-线性杂交酶显色法检测利福平和异烟肼耐药性结果进行比较,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.182、0.114,P均>0.05)。结论荧光PCR熔解曲线法和PCR-线性杂交酶显色法在检测利福平和异烟肼耐药方面具有同等的诊断效能,与表型药敏试验一致性较好,且弥补了表型药敏试验检测低度耐药菌株突变的局限性,可以用于结核病的早期快速诊断,为临床及时准确进行抗结核治疗提供了依据。