用酶标仪法测定细胞内胆固醇含量的研究

用酶标仪法测定细胞内胆固醇含量的研究万载阳，杨小毅（衡阳医学院心血管病研究所，衡阳，４２１００１）众所周知，高胆固醇血症是动脉粥样硬化的主要危险因素之一，而细胞内胆固醇浓度则具更重要意义。迄今为止，要确定细胞内胆固醇含量，尚缺乏确实简便可行的方法，我...

酶标仪法测定离心泵泵头表面肝素涂层生物活性的研究

目的 建立酶标仪法测定离心泵泵头表面肝素的生物活性。方法 由抗凝血酶(AT)饱和的肝素化表面失活的凝血酶量来量化肝素生物活性:肝素表面与过量的血浆蛋白AT结合,形成AT饱和的肝素化表面(过量的AT通过清洗程序去除),上述肝素化表面又与过量凝血酶Ⅱa结合,残留的凝血酶Ⅱa与显色底物反应,凝血酶肽键H-D-Phe-Pip-Arg-pNa被裂解,释放出生色团,其可以在405 nm下进行测试并定量。结果 应用酶标仪上波长405 nm时的动力学吸光度评估生物活性,生物活性测定表明:对照品(无涂层的离心泵泵头)的结果为-0.01 IU/cm^(2)(≤0.05 IU/cm^(2)),所有3种供试品的结果为0.29 IU/cm^(2)、0.40 IU/cm^(2)和0.32 IU/cm^(2)(均≥0.1 IU/cm^(2)),符合生物活性试验的有效性标准,对照品和供试品的生物活性均被视为通过。结论 通过酶标仪定量测试凝血酶肽键裂解释放生色团的含量,可得到与肝素涂层反应的Ⅱa的量,进一步反推AT的量,最终计算出肝素涂层的生物活性。该方法操作简便,一次可以测定多份样本,检测速度快;具有需要的样本量少、重复性好的特点,适用于对离心泵泵头表面肝素涂层的生物活性定量检测。

微柱离心结合双波长考马斯亮蓝法/酶标仪法测定牛血清白蛋白脂质体的包封率

目的:测定牛血清白蛋白(BSA)脂质体的包封率。方法:采用微柱离心结合双波长考马斯亮蓝法/酶标仪法测定,即先用葡聚糖凝胶DEAE-Sephadex A50微柱离心法将游离药物与脂质体进行分离,再筛选样品与染料体积比及反应时间,确定了双波长(595、450nm)考马斯亮蓝法/酶标仪法的测定条件并进行了方法学考察;考察了微柱对空白脂质体的回收率和微柱的分离效率;对BSA脂质体的包封率进行了测定。结果:确定的测定条件为样品与染料体积比为1∶3、反应时间10min,该法平均回收率为99.56%,RSD小于2.73%;微柱对空白脂质体的平均回收率为97.78%,分离效率大于90%;BSA脂质体的平均包封率为32.91%(n=3)。结论:本法实现了游离蛋白质与脂质体快速有效的分离,方法简单易行,与普通凝胶层析柱分离法相比,本法对样品的稀释倍率大大降低,适用于测定痕量大分子蛋白质脂质体的包封率。

酶标仪法测定氨茶碱血药浓度的研究

目的:通过酶标仪法,建立一种研究氨茶碱在新西兰兔体内的药代动力学参数及房室模型的分析方法。方法:新西兰兔以剂量15 mg/kg静脉注射氨茶碱后,应用酶标仪法,测定在274 nm波长处吸光度值,采用直线相关与回归分析进行数据统计分析氨茶碱在体内的药代动力学参数、回收率实验及房室模型分析。结果:血清茶碱在浓度5~30μg/m L范围内线性关系良好,回归方程为:A=0.0013C+0.0074,r^(2)=0.991。各浓度氨茶碱回收率均大于90%,平均回收率为95.83±3.83,RSD均小于15%,回收效果良好。通过氨茶碱体内房室模型拟合得:二室模型拟合显示:由消除相,得外推线浓度线性回归方程:lg C=-0.1271t+1.0562;由分布相,得残数浓度线性回归方程为:lg Cr=-0.5829t+1.030,综合得其二室模型的药动学方程为:C=22.000e^(-1.342t)+11.381e^(-0.292t)、T_(1/2(α))=0.516 h、T_(1/2(β))=2.369 h。一室模型拟合显示:一室模型药动学方程为:lg C=-0.2131t+1.315,其药时方程为:C=20.649e^(-0.491t)、T_(1/2)=1.412 h;结论:可以用酶标仪法测定氨茶碱体内药代动力学相关参数,其回收率良好,体内代谢符合二室模型,消除半衰期较长。

紫外分光光度计法与酶标仪微量法测定酚氧化酶蛋白含量及活力的比较

分别采用紫外分光光度计比色法与酶标仪微量法测定菜青虫Pieris rapae(L.)体内酚氧化酶蛋白含量和活力,以水杨醛缩对硝基苯胺为抑制剂,对2种方法的结果进行比较。结果表明,微量法和比色法在检测酚氧化酶(PO)蛋白含量、酶活力和抑制剂对PO抑制作用时结果无显著性差异。因此,微量法可以替代比色法,使用试剂量大大降低,重复性好,操作简单、快捷。

肉制品中总糖含量测定方法的探讨

总糖含量是各种肉制品的一个重要质量指标,本实验对常见紫外分光光度法和酶标仪法测定总糖含量进行了比较,结果表明采用酶标仪法测得的总糖含量和紫外分光光度法相吻合,但酶标仪法试剂消耗少、检测速度快、结果重现性好。

利用酶标仪快速批量测定橡胶草中菊糖的含量

以橡胶草根为研究对象,采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法),利用酶标仪为检测仪器,建立了橡胶草中菊糖的快速测定方法。结果表明,酶标仪检测橡胶草根中总糖和还原糖含量的最佳实验条件:波长为550 nm、DNS显色剂用量为0.8 m L、沸水浴显色时间为8 min。同时,获得此条件下回归方程为A=0.6872C-0.0215(R^2=0.9982),线性范围为0~2.2 mg/m L,加样回收率为96.67%~102.33%。该方法灵敏、稳定、重现性好,可在短时间内完成多个样品同时测定,该方法所得结果略高于分光光度计法。

基于ESR和比色法的美拉德产物抗氧化活性对比研究

运用电子顺磁共振波谱法和比色法(酶标仪法、紫外分光光度计法),以DPPH自由基清除率为指标,探究MRPs抗氧化活性大小。通过DPPH标准曲线的建立可以得出,3种仪器都能很好地反映DPPH浓度的变化。单因素实验结果表明,反应时间以及在酸性和低温条件下测量结果基本保持一致。而料液比以及在碱性条件下测量结果有差异,这主要来源于MRPs样品自身OD值影响以及MRPs与DPPH反应后反应产物OD值的影响,且后者占据主要的干扰作用。通过均匀实验得出3种方法的准确性为:ESR法>紫外法>酶标仪法,且ESR法优化条件更为合理,因此ESR法更适合美拉德反应MR条件的优化。

小麦体内次生物质对麦蚜的抗性作用研究

采用蚜量比值法评价了 7个小麦品种 (系 )对麦长管蚜的抗性 ,并用紫外分光光度法测定了各品种 (系 )旗叶和穗部总酚和吲哚生物碱含量 ,并通过酶标仪法测定了来自不同抗级小麦穗部麦长管蚜体内的羧酸酯酶活性的差异 ,以此研究小麦体内次生物质含量的差异及其抗麦长管蚜的关系和抗性生化机制。结果表明 ,旗叶和穗部总酚和吲哚生物碱含量不同 ,表现出对麦长管蚜种群影响的差异。穗部吲哚生物碱含量与麦长管蚜蚜量比值之间呈极显著的负相关 ,相关指数R =- 0 .9896。而旗叶吲哚生物碱、旗叶总酚和穗部总酚含量与麦长管蚜蚜量比值的相关系数分别为 - 0 .6 82 6、- 0 .4 2 0 8和 - 0 .5 6 2 3,相关性均不显著。取食不同抗蚜品种 (系 )穗部的蚜虫羧酸酯酶活性与穗部吲哚生物碱含量呈显著相关性 (R =0 .96 4 6 ) ,而与穗部总酚含量相关性不显著 (R =0 .4 95 3)。与总酚含量相比 ,小麦穗部吲哚生物碱含量高低与小麦对麦长管蚜抗性关系更密切。

一些野生果树鲜叶提取物清除自由基活性研究

本研究用二苯基苦基苯肼自由基酶标仪法,对亚热带常见的70余种果树鲜叶的自由基清除活性进行了比较,发现石榴、板栗、尖嘴林檎和黄山栎鲜叶的80％甲醇提取物有很强的自由基清除活性,其次是杨梅、麻栎、茅栗、短柄苞栎、木瓜、湖北海棠、南酸枣、三花悬钩子和黄山花楸,它们在相当于鲜叶浓度为0.5mp·mL^(-1) ,在37℃下孵育20min时的自由基清除率分别可达93.5％、89.3％、85.0％、82.9％、79.1％、77.6％、75.5％、74.3％、70.7、64.5％、63.7％、63.4％和61.3％,显示这些树种有较大的开发潜力。

分光光度法与酶标仪微量法测量菌液浓度的比较

分别采用分光光度法和酶标仪微量法测量发酵菌液浓度,对两种方法测量结果进行比较。结果表明,两种方法测量的结果无显著性差异(t=0.02),但酶标仪微量法比分光光度法测量的准确度和精密度高。

2-羟基-4-甲氧基苯甲醛缩苯胺对菜青虫酚氧化酶的抑制作用

为筛选对十字花科蔬菜害虫菜青虫Pieris rapae(L.)酚氧化酶具有高抑制活性的化合物,为寻找新型害虫控制剂提供线索,采用酶标仪微量法以室内合成、筛选的高活性化合物2-羟基-4-甲氧基苯甲醛缩苯胺为抑制剂,研究了其对菜青虫酚氧化酶的抑制活性及抑制类型。结果表明,供试化合物对菜青虫酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)为0.116 mmol/L;该化合物为典型的可逆非竞争型抑制剂,抑制常数(Ki)为1.96 mmol/L。该化合物直接对靶标酚氧化酶产生作用,而不是通过影响酶结构内的铜离子来产生作用的。

3种单花蜜总黄酮含量测定的比较

采用酶标仪微量法,以芦丁为对照品对市售不同品牌的3种单花蜜(枣花蜜、紫云英蜜、洋槐蜜)总黄酮含量进行测定比较。结果表明,3种单花蜜均含有黄酮类化合物,且不同单花蜜间总黄酮含量存在显著性差异,其中枣花蜜的总黄酮含量最高(1.72 mg/100 g),紫云英蜜次之(1.26 mg/100 g),洋槐蜜含量最低(1.11 mg/100 g);不同品牌瓶装单花蜜间总黄酮含量不同,品牌2的3种单花蜜总黄酮含量均低于品牌1和品牌3。因此,蜂蜜中总黄酮含量可作为不同单花蜜品质评价的标准之一;酶标仪微量法具有简便、准确等优点,可广泛应用于蜂蜜及相关产品的快速检测。

家畜布鲁氏杆菌病凝集试验改进与应用

试验旨在探究比较不同检测方法在布鲁氏杆菌病诊断中的应用价值。在试验条件完全相同的情况下,首先采用虎红平板凝集试验(RBPT)对待检血清进行初筛,初筛阳性的样品再分别进行传统试管凝集试验和微量凝集试验,并分别通过比浊对照法以及酶标仪读数法对检测结果进行判定。结果显示,两种检验方法的稳定性均较好,二者的阳性符合率为96.9%,但微量法操作更简便;同时酶标仪读数法消除判读时的主观因素干扰,精确度更高。研究表明,实际工作中可根据环境条件和样本数量选择相应的检测方法,应用于畜间布鲁氏杆菌病监测和诊断,能够大幅度提高检测的准确率和工作效率。

分光光度法与酶标仪微量法测量菌液浓度的比较

目的:比较分析分光光度法与酶标仪微量法测量菌液浓度的效果。方法:2019年10月~2019年11月选取本中心保存的大肠杆菌作为研究对象,分别使用紫外-可见分光光度计、ANTHOS READER 2010酶标仪对大肠杆菌进行检测,对比两种检测方法获得的菌液浓度。结果:以重量法检测结果为准,按照一系列比例稀释后测量吸光度,绘制相应的校准曲线,获得相应的回归方程。回归方程y=0.0095+0.7115x,其中r^(2)=0.9982。从四个样品的菌液浓度检测结果可以看出,分光光度法与酶标仪微量法测出的菌液浓度比较,并无明显差异(P>0.05)。两种检测方法的测量相对标准偏差均比3%小,但相较于分光光度法,酶标仪微量法的相对标准偏差更小(P<0.05)。酶标仪微量法测量菌液浓度的精密度比分光光度法更好(P<0.05)。结论:酶标仪微量法、分光光度法均可有效检测菌液浓度,但酶标仪微量法所测定的菌液浓度结果相对标准偏差更小,精密度更高,更具应用价值。

手工法+酶标仪酶免检测系统和FAME24/20全自动酶免检测系统的比对研究

目的:评价手工法+酶标仪酶免检测系统和FAME24/20全自动酶免检测系统使用相同试剂检测同一项目所得结果的一致性,并对手工法+酶标仪酶免检测系统进行使用前性能确认。方法:手工法+酶标仪酶免检测系统为X系统,FAME24/20全自动酶免检测系统为Y系统;使用X、Y系统及相同的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV及TP四种试剂盒,每天检测四种试剂盒的内部质控品和同一外部质控品,并且连续20天重复实验,分别在同一块微板内进行同一批次检测20孔质控品和50例血液标本,计算批间CV值,进行X2检验和Kappa一致性检验。结果:X和Y系统检测结果批间CV值均<15%,符合率为100%(K=1),X和Y系统经X2检验差异无统计学意义(P>0.05)。结论:两种酶免系统的检测结果具有一致性,X系统完全可以配合Y系统同时应用于血液标本的免疫项目检测。

测定聚乙二醇化天花粉蛋白注射液中氰基硼氢化钠残留量的两种方法比较

目的：建立测定聚乙二醇化天花粉蛋白（PEG-TCS）注射液中氰基硼氢化钠（NaCNBH3）残留量的方法。方法：分别采用加入考马斯亮蓝蛋白分析试剂的分光光度法（595nm波长）和酶标仪法（570衄波长，每孔反应溶液取量120肛1）进行检测。结果：分光光度法和酶标仪法的NaCNBH。检测浓度线性范围分别为0．05～0．30、0．049-0．78mmol／L（r=0．9995、0．9993），检测限分别为0．0125、0．024mmol／L，平均加样回收率分别为97．5％、98．3％（RSD分别为0．53％、0．68％，n=3）。结论：两种方法均可测定NaCNBH。残留量，但酶标仪法因用样量少、快速、操作简便，更适合样品中NaCNBH3残留量的测定。

ELISA法测定混合饲料多种霉菌毒素污染的研究

目的研究ELISA法检测饲料中伏马菌素、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素的可行性,并对深圳市售玉米混合饲料污染状况调查。方法采用竞争ELISA法,检测玉米混合饲料中伏马菌素、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素污染状况。结果伏马菌素浓度为0.25～5.0mg/kg之间的变异系数(CV,%)为1.0～7.0;黄曲霉毒素浓度为1.0～20.0μg/kg之间的变异系数(CV,%)为1.0～7.5;赭曲霉毒素浓度为2.0～40.0μg/kg之间的变异系数(CV,%)为2.0～7.5;脱氧雪腐镰刀菌烯醇浓度为0.25～5.0mg/kg之间的变异系数(CV,%)为1.0～8.0;T-2毒素含量浓度为75.0～500.0μg/kg之间的变异系数(CV,%)为2.0-7。结论ELISA法检测玉米混合饲料中几种毒菌素的污染,显示方法灵敏度高、干扰少、测定步骤简便、快速、操作安全、测定结果准确可靠。建议日常工作中先用ELISA法快速筛选检测,阳性样品再用液相色谱—质谱联用仪分析法、薄层法进行确证实验。