两种细胞活性检测实验对羊胎盘免疫调节因子活性的评价

运用两种不同细胞活性检测实验评价羊胎盘免疫调节因子(Goat placenta immune-regulatingfactor,GPIF)活性效果,发现E玫瑰花环实验和5-溴-2’脱氧尿苷掺入酶联免疫吸附实验—BrdU-ELISA均能反映GPIF、阳性药物PHA活性效果,两种评价方法评价结果具有相关性,但传统的E玫瑰花环实验具有灵敏度低、重现性差、影响因素复杂、实验环节多、周期长的缺点,BrdU-ELISA实验则与此相反具有灵敏、易操作、重现性好的特点;实验室研制的GPIF具有增强T细胞活性作用,可能是一种免疫调节剂。鉴于两种实验评价GPIF活性效果的对比分析,推荐对具有细胞免疫调节活性作用的药物活性检测采用BrdU-ELISA法。

尿液抗幽门螺杆菌抗体的检测

目的 :建立检测尿液中抗幽门螺杆菌 (HP)抗体的方法 ,并评价其临床实用性。 方法 :应用酶标记免疫吸附测定技术检测 10 2例患者尿液、唾液和血清抗HPIgG ,根据快速尿素酶试验、HP选择性分离培养和组织切片H E染色确定其HP感染状态。 结果 :尿液、唾液和血清三种标本诊断方法的敏感性、特异性、准确性分别为 96 .7%、87.1%、93.5 % ;93.5 %、83.9%、90 .3%和 95 .2 %、93.5 %、94.6 %。 结论 :以上三种标本诊断方法依据准确性评优排序 ,应是尿液方法 >血清方法 >唾液方法 ;检测尿抗HPIgG方法因其准确、简便、易行 。

重组人粒细胞集落刺激因子宿主蛋白质含量的测定

目的根据重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)的生产工艺 ,建立宿主蛋白质 (HCP)含量的测定方法。方法用不含rhG CSF基因的空质粒转染E .coli宿主 (BL2 1) ,按rhG CSF的生产工艺进行发酵、纯化、制备HCP。常规法免疫家兔 ,制备抗HCP多抗血清 ,经纯化后 ,过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶 (HRP) ,建立双抗夹心酶标记免疫吸附测定 (ELISA)法测定HCP在rhG CSF原液中的含量。结果所建HCP测定方法能够测定 7.8～ 2 5 0ng/ml范围内的HCP。结论重组蛋白质药物宿主蛋白质含量测定应依据不同的工艺 ,制定不同的方法。

从噬菌体展示肽库中筛选与人精子蛋白17结合的短肽序列

目的:随机从噬菌体12肽库中筛选与人精子蛋白17(Sp17)特异性结合的短肽序列,并进行鉴定。方法:以基因工程制备的人Sp17为钓饵蛋白,采用亲和淘筛法对噬菌体肽库进行三轮亲和淘筛。富集Sp17特异结合噬菌体,用ELISA鉴定其结合活性并进行DNA测序分析。结果:随机挑出20个噬菌体克隆进行鉴定,ELISA显示其中5个克隆与Sp17有较强结合活性,其氨基酸序列分别为QLMSNIHRRM II、RKMMNQTKRHLP、NTMKTMR IMMTR、RRRLLLMQRRMKR和SPRPMMRR IRKQ。结论:从噬菌体展示肽库中筛选鉴定出5个与人Sp17结合的12肽序列。

重组人肿瘤坏死因子α突变体11a的I期临床药代动力学

目的 :在肿瘤患者中观察重组人肿瘤坏死因子α突变体rhTNF αD11a的药代动力学。方法 :在单次肌内注射 16 0× 10 4 U和 2 40× 10 4 U及连续肌内注射 16 0× 10 4 U ,qd× 7d后 ,用ELISA法测定其抗原浓度。结果 :方法学检验表明 ,灵敏度、特异性、线性、线性范围、精密度和回收率均符合要求。肌注 0 .5h后血清浓度显著高于内源水平 (P≤ 0 .0 5～ 0 .0 0 1) ,2 4h后多数患者恢复至药前水平。Cmax和AUC随剂量增高 ,平均Cmax分别为 10 .5和 14.7pg eq·mL-1,AUC分别为 5 0 .1和 10 6 .1pg eq·h·mL-1,但无统计学差异。Tmax随剂量有延长趋势。连续注射 7次后浓度明显低于首次注射 (P <0 .0 5 )。蓄积因子 (AUC第 7次/AUC第 1次)为 0 .6 5。结论 :在研究剂量范围内单次肌内注射药代动力学近似线性 ,连续注射后药物浓度呈降低趋势。