酶水解-阴离子色谱法联用测定婴幼儿配方奶粉中果聚糖的总含量及平均聚合度

目的建立酶水解-阴离子色谱法测定婴幼儿配方奶粉中果聚糖总含量和平均聚合度的分析方法。方法通过酶水解将样品中的果聚糖水解成果糖、葡萄糖,以PA1阴离子交换柱分离,脉冲积分安培检测器检测果聚糖总含量,并以果糖与葡萄糖产生的比例计算平均聚合度。结果果糖、葡萄糖在0.25~25.00 mg/L范围内线性关系良好(r^(2)>0.999),果聚糖的回收率为96.7%~104.1%,方法检出限为195 mg/kg,定量限为650 mg/kg。实际样品测定中,日间的相对标准偏差为1.15%~3.87%(n=6)。结论此方法灵敏度和精密度较好,可用于婴幼儿配方奶粉中果聚糖的总含量及平均聚合度的测定。

酶水解-HPLC法同时测定尿中三唑仑及其代谢物

目的 :用酶水解 HPLC方法同时测定尿中三唑仑及其主要代谢物α 羟基三唑仑。方法 :尿样 2mL ,加 β 葡萄糖醛酸苷酶 0 2 5mL ,5 5℃酶解 2h ,用正己烷 二氯甲烷 (5∶3,v/v) 5mL提取 ,挥干提取溶剂后用 5 0 μL甲醇溶解 ,10 μL进样 ,HPLC检测。结果 :本法对三唑仑和α 羟基三唑仑的最低检测限均为 4ng·mL-1;绝对回收率分别为 93 12 %和 6 7 70 % ;日内、日间RSD分别在 6 0 8%和 11 0 5 %以下 ;线性范围均为 12 5～ 375 0ng·mL-1。结论 :酶水解提高了α 羟基三唑仑的检出率 ,从而使本法能同时测定尿中三唑仑及α 羟基三唑仑 ,此法重现性好、灵敏、可靠 。

蒸汽爆破强度对玉米芯酶水解制备低聚木糖的影响

以玉米芯为底物,采用蒸汽爆破预处理与内切木聚糖酶定向酶水解相结合制取低聚木糖。基于高效阴离子交换色谱法对聚合度为2～6的低聚木糖组分的准确定量分析,研究蒸汽爆破预处理反应强度系数及其主要参数(反应温度和维压时间)对玉米芯定向酶水解制取低聚木糖的组成分布及产品得率的影响规律,确立最佳蒸汽爆破预处理条件。蒸汽爆破-定向酶解效果综合评价的结果表明,玉米芯最佳的蒸汽爆破预处理条件是反应强度系数3.76、反应温度200℃、维压时间390s。此时低聚木糖得率可达到最高值20.8%,且主要组分以木三糖、木四糖和木二糖为主,含量分别占总得率的43.5%、21.3%和18.6%。

高效液相色谱法测定动物性食品中4种β_2-兴奋剂

目的：建立动物性食品中4种β2-兴奋剂：奥西那林、克伦特罗、沙丁胺醇和非诺特罗的高效液相色谱-二级管阵列检测的方法。方法：动物组织样品用缓冲溶液匀浆后，酶水解，高氯酸沉淀蛋白后，滤液调至碱性，用乙酸乙酯：异丙醇（6：4）提取后，旋转蒸发去除溶剂。缓冲液溶解后，过C18-SCX串联固相萃取小柱，甲醇淋洗后分析，对于含蛋白、脂肪少的动物食品样品，酶解并沉淀蛋白，滤液调至pH3后过C18-SCX串联固相萃取小柱，洗脱液用于分析。结果：对含蛋白、脂肪少的样品，样品加标回收率在60．6％～88．0％，精密度在2．72％～7．86％；含蛋白、脂肪多的样品，加标回收率在60．1％～84．9％，精密度在1．26％～6．20％，方法在0．2～50．0μg／ml有良好线性。样品的最低检出浓度：奥西那林为0．07mg／kg；沙丁胺醇为0．10mg／kg；非诺特罗为0．08mg／kg；克伦特罗为0．04mg／kg。结论：本方法操作简便、准确灵敏、重现性好、分析成本较低。

高效阴离子交换色谱法测定依诺肝素钠1,6-脱水衍生物含量

目的建立依诺肝素钠特异性末端结构1，6-脱水衍生物结构的含量测定方法。方法肝素酶混合液将依诺肝素钠水解成二糖或四糖单位，水解得到的寡糖峰经硼氢化钠还原后用-高效阴离子交换色谱法方法进行分析。采用WatersSpherisorbs5SAX（4．0mm×250mm，5μm）色谱柱，以0．28g·L^-1磷酸二氢钠溶液为流动相A含0．28g·L^-1磷酸二氢钠及140g·L^-1高氯酸钠的溶液为流动相B进行梯度洗脱（0～20min，3％～35％B；20～50min，35％～100％B；50～60min，100％B；60～61min，100％～3％B，61～79min，3％B），流速0．8mL·min^-1，柱温为50℃；检测波长为234nm，并用归一化面积百分比法计算摩尔百分含量。结果筛选出了酶解效果达标的国产肝素酶并优化了酶解条件，酶解后1，6-脱水△IS-IS与1，6-脱水△Is峰面积比〈1．15；优化色谱条件后△IA和1，6-脱水△IS的分离度〉1．5；硼氢化钠还原后的溶液色谱图中，△IS和还原△IS的峰面积比均小于0．02；两家国产依诺肝素钠生产企业样品结果均在15％～25％内。结论方法可对依诺肝素钠特征还原末端结构进行分离和定量，作为对低分子肝素进行微观结构分析的首个鉴别项目，已收栽入新修订依诺肝素钠国家标准草案中．

堆肥过程中纤维素酶活与纤维素降解相关研究

采用室内小型堆肥反应器堆肥，测定CMC酶活性和β-葡萄糖苷水解酶活性，测定堆肥物料中纤维素、半纤维素和木质素相对含量，利用高效液相法测定葡萄糖和纤维二糖。结果表明，堆肥过程中，堆体温度前3 d迅速上升至45℃，进入高温期，维持8 d后进入降温期，最后与环境温度变化一致；β-葡萄糖苷水解酶活性第4天达最大值（1.482μmol p-Nitr·g-1DW·min-1），并在降温腐熟期维持在0.429～0.533μmol p-Nitr·g-1 DW·min-1范围内；CMC酶活性变化趋势与β-葡萄糖苷水解酶活性相似，并在第7天达最大值（47.67μg glucose·g-1 DW·min-1）；纤维素和半纤维素降解趋势相似，均在高温期降解明显；木质素相对含量总体变化较小，且在降温腐熟期小幅增加。结果显示，CMC酶活性与纤维素和半纤维素降解呈正相关。