DL-苯丙氨酸的酶法拆分研究

利用氨基酰化酶能立体专一地水解氨基酰化物的特点,选择性地水解N-乙酰-L-苯丙氨酸得到L-苯丙氨酸,经分离后再水解N-乙酰-D-苯丙氨酸得到D-苯丙氨酸。研究中分别考察了pH值、温度、酶用量、底物浓度和钴离子对反应的影响。在优选条件下(底物浓度为0.1mol·L-1,pH7.0,温度37℃,酶用量为w(酶)/w(底物)=1∶41.4,加入浓度为1×10-3mol/L的Co2+,将N-乙酰-D-苯丙氨酸用有机溶剂结晶和盐酸水解10h)得到光学纯度OP=98.8%的L-苯丙氨酸,收率70.3%;OP=96%的D-苯丙氨酸,收率63%。

酶法拆分DL-β-乙酰硫基α-甲基丙酸

研究了胰酶和脂肪酶对DL 加成酸的拆分效果和各种影响因素 ,结果表明 ,脂肪酶Ⅰ的拆分效果优于胰酶和脂肪酶Ⅱ。脂肪酶Ⅰ酶促反应的最优条件为 :底物 4.0 g ,酶用量 1.5 g ,反应时间 12h ,反应体系pH7.0。拆分结果得到D 加成酸。

利用色氨酸酶酶法拆分D,L-丝氨酸制备D-丝氨酸

以D,L-丝氨酸为底物,采用色氨酸酶将L-丝氨酸转化为L-色氨酸,并进一步分离纯化拆分得到D-丝氨酸。该文对色氨酸酶酶法拆分条件进行了响应面优化,酶促反应最佳条件为:温度45℃,pH=8.0,反应时间18 h,底物D,L-丝氨酸质量浓度30 g/L,色氨酸酶用量为6 g/L,经过两次转化,L-丝氨酸的总转化率可达95.4%。酶促反应液经NKA-Ⅱ型大孔吸附树脂与001×7强酸性阳离子交换树脂纯化,重结晶后得到D-丝氨酸,化学纯度99.4%,α2D0=-15.3°(ρ=0.1 kg/L,2 mol/L HCl),总回收率为66.6%。

R-丁酸缩水甘油酯的酶法拆分研究

研究了猪胰脂肪酶催化拆分丁酸缩水甘油酯的对映选择性水解反应,以拆分得到的酯对映体过量值(ee%)为指标,对有机溶剂与磷酸缓冲液体系中酶催化水解进行了比较研究,并考察了磷酸缓冲液体系中各因素对酶促水解反应中对映选择性拆分效果的影响。结果表明,磷酸缓冲液体系较有机介质转化率高,在磷酸缓冲液体系中缓冲液pH=7.5,底物浓度为0.4mol/L,酶用量为30mg/g(底物),反应时间为4.0h,反应温度为30℃,振荡频率为150r/min的条件下酶促水解的拆分效果最好,对映体过量值达84.65%,此时的转化率为51.78%。

微水-有机溶剂两相体系中消旋萘普生的酶法拆分

研究了微水有机溶剂两相体系中固定化脂肪酶催化的萘普生甲酯的立体选择性水解反应。固定化酶活性受载体极性、水含量、有机溶剂的logP值、产物抑制的影响,据此构建了一种可以连续拆分产生(S)(+)萘普生的微水有机溶剂两相体系。反应在一个具有回路的连续流搅拌反应器中进行,反应器中添加有采用吸附法固定化的脂肪酶,载体为一种弱极性的合成载体,水相连同固定化酶颗粒一起永久保持在反应器中,有机流动相带入底物,带出产物。固定化酶在该50mL反应器中30℃连续操作60d,仅损失活性25%,产生(S)(+)萘普生900mg,产物对映体过量值(eep)为95%。

生物酶法拆分手性药物的研究进展

在现有手性药物的制备过程中,通常使用化学催化、气相或液相色谱分离纯化的方法,而耗能大、花费高、副产物多等是其主要缺点.近年来,生物酶法拆分手性药物的研究逐渐增多,多类生物酶已被报道具有催化手性拆分的能力,其对不同类底物的应用是目前研究的重点之一.在生物酶法拆分手性药物的过程中,反应溶剂与酰基供体是影响对映选择拆分效率的主要因素;另外,合理应用酶的固定化技术能有效的提高拆分效率,使其具有工业应用的可能.生物酶法拆分手性药物因具有副产物少、操作简便、环境友好等优点而备受关注,有望补充或替换化学法在手性药物制备中的作用.随着结构生物学、现代分子生物学的发展与酶法拆分手性药物研究的不断深入,通过对酶分子空间结构与催化机理的分析研究,人工合成具有特定催化功能的酶成为可能,生物酶法拆分手性药物技术的应用有望得到较大的突破.

酶法拆分N-乙酰-D,L-蛋氨酸转化条件优化

重组大肠杆菌BL21/pET22b-argE表达的N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶(NAOase)可用于脂肪族氨基酸的手性拆分,水解N-乙酰-D,L-氨基酸中的L-型底物,N-乙酰-D,L-蛋氨酸为其最合适的底物。为了确定NAOase拆分N-乙酰-D,L-蛋氨酸合适的转化条件,考察了反应温度、pH值、Co^(2+)浓度、转化时间、底物浓度和加酶量对产物的影响。结果表明,合适的反应条件为37℃,pH值7.0,Co^(2+1) mmol/L,转化时间20 min,底物浓度150 mmol/L,菌泥5 g/L。在上述反应条件下,N-乙酰-D,L-蛋氨酸的转化率可达81.4%。

乙酰肉碱的化学合成与酶法拆分

采用化学方法以肉碱为底物,合成了外消旋乙酰肉碱,精制后可获得纯度99%以上的乙酰肉碱,收率为96%.利用蜗牛酶(SnailEnzyme)对其进行不对称酯水解反应,发现蜗牛酶对乙酰肉碱具有高度立体选择性,并且可得到光学纯度为98%的乙酰-L-肉碱.

米曲霉氨基酰化酶酶法拆分制备D型芳香族氨基酸

以DL-苯丙氨酸为起始原料,乙酸酐乙酰化后得到N-乙酰DL-苯丙氨酸,利用米曲霉氨基酰化酶立体结构专一催化水解N-酰基-L-氨基酸的酰胺键的特点,分别得到L-苯丙氨酸和N-乙酰D-苯丙氨酸.通过结晶法分离两者后,N-乙酰D-苯丙氨酸经6mol/LHCl水解得到D-苯丙氨酸.由此拆分DL-苯丙氨酸得到光学纯度分别为98%的L-苯丙氨酸(收率84.8%,以原料N-乙酰-DL-苯丙氨酸的0.5倍摩尔量为理论产率)和92.3%的D-苯丙氨酸(收率89.5%).

DL-苯丙氨酸酶法拆分

ＤＬ－苯丙氨酸的拆分是以Ｎ－乙酰－ＤＬ－苯丙氨酸铵为起始原料，经猪肾酰化酶不对称水解作用，再经离子交换色谱分离，减压浓缩得到Ｌ－苯丙氨酸和Ｎ－乙酰－Ｄ－苯丙氨酸结晶。

酶法拆分丙烯醇研究进展

丙烯醇是丙烯菊酯的重要中间体。本文根据丙烯醇的结构特点和酶工程的技术进展对几种利用酶工程方法拆分丙烯醇的工业桦可行路线进行了评述。

苯丙氨酸光学异构体的酶法拆分

The L phenylalanine was prepared in high optical purity by treating N acetylphenylalanine ethyl ester in water or in water octanol biphase medium using free aminoacylase as a catalyst. The kinetic behavior of the free enzymatic reaction was investigated and the reaction mechanism has been discussed.

丝氨酸脱氨酶酶法拆分DL-丝氨酸

利用pET28a为载体在宿主细胞BL21(DE3)中重组表达了大肠杆菌丝氨酸脱氨酶,以L-丝氨酸为底物,研究了其酶学性质,考察了温度、起始pH、底物质量浓度等因素对酶促反应的影响,并利用丝氨酸脱氨酶酶法拆分了DL-丝氨酸。结果表明,丝氨酸脱氨酶重组表达成功;丝氨酸脱氨酶最佳反应条件为37℃,pH=9.0,底物质量浓度40 g/L;0.3 g菌体细胞酶法拆分100 mLρ(DL-丝氨酸)=80 g/L反应液需8 h,其中,L-丝氨酸摩尔转化率达98%。

酶法拆分手性化合物HPBE

R HPBE(2 羟基 4 苯基丁酸乙酯 )是一种重要的医药中间体 ,可以通过脂肪酶催化水解外消旋体得到。介绍了此催化过程的机理、工艺、产物检测等 ,并通过酶在疏水载体上的界面吸附对酶进行固定化 ,以提高酶活及对映选择性。

固定化酶法拆分制备L-苯丙氨酸的工艺研究

苯丙氨酸是人体必需的八种氨基酸之一,在人体内有生理作用的是L-型的,故合成制得D L-苯丙氨酸必须进行拆分。六十年代末,日、美等国用固定化氨基酰化酶拆分制备L-氨基酸已应用于工业生产,由于固定化酶法拆分具有高度专一性,可反复使用,反应条件温和,酶不残留在产物中,产物易纯化、收率较高、无三废等优点。

酶法拆分生产光学活性羟基酸及内酯化合物

项目简介 手性小分子羟基酸含有羟基以及羧基活性功能基团，是许多天然产物或医药等手性合成的重要中间体。除了单纯的α-羟基酸之外，β-羟基酸、γ-羟基酸和羟基在末端的ω-羟基酸均可以在酸性条件下脱水闭环形成四元环、五元环或多元环的内酯化合物，

非达司他中间体的酶法拆分

非达司他（fidarestat）化学名为（2S-顺式）-6-氟-2,3-二氢-2＇，5＇-二氧螺（4H-1-苯并吡喃-4，4＇-咪唑烷）-2-酰胺，是由日本Sankyo制药公司和Sanwa化学研究所共同研发的口服醛糖还原酶抑制剂，用于治疗糖尿病并发症之一的神经病变。有关非达司他中间体的制备研究较多的主要是化学合成方法，该法的总收率为30．6％。该方法需要使用昂贵的手性试剂左旋苯乙胺。副反应多，且产物分离纯化较复杂。

酶法动态动力学拆分制备R-(-)-乙酰基邻氯扁桃酸

采用假单胞菌脂肪酶Pseudomonas sp.ECU1011催化乙酰基邻氯扁桃酸进行不对称水解,利用突变后的扁桃酸消旋酶(V29I)对拆分后的产物S-(-)-邻氯扁桃酸进行消旋,消旋后的邻氯扁桃酸经过酰化重新被利用到水解反应中,实现了酶法动态动力学拆分制备R-(-)-乙酰基邻氯扁桃酸。通过对拆分反应、拆分混合物的分离回收以及消旋反应的工艺优化,最终获得光学纯度ee>99.9%的R-(-)-乙酰基邻氯扁桃酸,其收率达80%。本研究建立的R-(-)-乙酰基邻氯扁桃酸的动态动力学拆分工艺,对其工业化应用具有重要的指导意义。

扩展青霉脂肪酶的生产及其在外消旋烯丙醇酮拆分上的应用

试图应用脂肪酶催化拆分法代替化学法拆分外消旋烯丙醇酮(4-羟基-3-甲基-2-(2-烯丙基)-2-环戊烯-1-酮,allethrolone)。以Rodamine B平板筛选法获得了一株脂肪酶高产菌Penicillium expansum PED-03,并对该菌液态发酵产脂肪酶的主要工艺参数进行了优化。确立了0.5%的淀粉和4%的豆饼粉为该菌种的适宜碳源和氮源,最适C/N为0.5。Tween-80对产酶有明显的促进作用,添加0.05%Tween-80后所产酶活力可提高55%。发酵罐产酶试验结果表明,搅拌速度对脂肪酶的产生有明显影响,适宜的搅拌速度为500r·min·1。利用P.expansum PED-03脂肪酶在非水相中对外消旋烯丙醇酮进行手性拆分,反应36h时转化率(C)可达理论值的96%,产物的对映体过量值(eeP)可达99%,显示了该酶在烯丙醇酮的酶法拆分方面具有良好的应用潜力。