木瓜蛋白酶在离子液体双水相中的分配行为

采用离子液体双水相提取木瓜蛋白酶。首先考察不同浓度、p H、温度的离子液体对木瓜蛋白酶活性的影响,其次考察不同离子液体双水相体系、离子液体侧烷基链长度及浓度、酶添加量、p H、温度对木瓜蛋白酶分配行为的影响。结果表明:[C4mim]Cl和[C4mim]Br体系萃取木瓜蛋白酶的效果比[C4mim]BF4体系好;高温(≥60℃)对离子液体双水相体系萃取木瓜蛋白酶不利。离子液体双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳工艺条件:0.25 g·ml-1的[C4mim]Cl,0.35 g·ml-1的K2HPO4,p H 8.0,酶添加量2.0 mg·ml-1,30℃。此条件下木瓜蛋白酶的酶活性回收率达到95.16%,纯化因子达到1.5。为今后进一步研究该体系的放大实验或规模化生产奠定了基础。

PEG/Na_2SO_4双水相萃取木瓜蛋白酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸钠(Na2SO4)双水相体系对木瓜蛋白酶进行分离提取。考察各成相试剂及pH对木瓜蛋白酶活性的影响,研究体系中不同相对分子量PEG、硫酸钠和PEG的质量分数、pH、酶添加量等因素对木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的影响,采用响应面法优化双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件,并进行了实验室规模的放大。结果表明:Na2SO4的质量分数对分配行为的影响极显著,其次是PEG的质量分数,pH对分配行为的影响不显著。当两相体系中PEG的相对分子量为6000,质量分数为16.0%、Na2SO4质量分数为18.0%、pH7.0、酶添加量为1.0mg/g时,木瓜蛋白酶在两相体系中的分配系数最高可达3.1,可获得木瓜蛋白酶活性回收率82.6%。实验证明:响应面法优化双水相萃取木瓜蛋白酶的条件是可行的,可用于实际预测。

羔羊皱胃酶的两种盐析效果比较研究

采用NaCl和(NH4)2SO4两种盐析剂在pH4.6、4℃下对羔羊皱胃进行盐析,盐析时间为14 h,比较两种不同的盐析剂的盐析效果.分析经不同饱和度的盐溶液盐析沉淀得到的皱胃酶蛋白含量、活性回收率和纯化效果.结果表明:酶活性回收率较高的为(NH4)2SO4,其活性回收率为90%,而纯化效果最好的为NaCl,可使皱胃酶纯化2.13倍.

离子液体双水相提取木瓜蛋白酶及条件优化

采用[C4mim]Br/K2HPO4双水相体系提取木瓜蛋白酶。首先考察各成相试剂对木瓜蛋白酶活性的影响,其次考察了离子液体侧烷基链长度、离子液体浓度、酶添加量、pH、温度对木瓜蛋白酶分配行为的影响;并采用响应面法(CCD)优化[C4mim]Br/K2HPO4双水相萃取木瓜蛋白酶的条件。结果表明:离子液体对木瓜蛋白酶的活性影响较小,低浓度时还能促进酶活性,而无机盐对木瓜蛋白酶活性的影响较大;高温不利于离子液体双水相萃取木瓜蛋白酶;各因素对木瓜蛋白酶萃取的影响从大到小依次为K2HPO4的浓度、[C4mim]Br的浓度、酶添加量、pH。响应面优化得到的最佳萃取条件:0.30 g/mL的[C4mim]Br,0.30 g/mL的K2HPO4,pH 6.0,酶添加量3.0 mg/mL,温度30℃。在此条件下木瓜蛋白酶的酶活性回收率达到91.20%,纯化因子可以达到1.73。为该体系的放大实验或规模化生产提供理论指导。