酶法制备玉米七肽糖基化产物及其对乙醇脱氢酶激活活性的影响研究

目的对玉米七肽(Ser-Ser-Asn-Cys-Gln-Pro-Phe,SSNCQPF)进行糖基化制备和分离纯化,并对其进行乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)激活活性验证。方法通过谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase)介导,以玉米七肽作为酰基供体,D-氨基葡萄糖(D-glucosamine,GlcN)为酰基受体合成玉米糖肽的糖基化反应,并分离纯化玉米糖肽单体[SSNCQ(GlcN)PF]。使用超高效液相色谱-静电场轨道阱质谱仪(ultra performance liquid chromatography-quadrupole exactive orbitrap mass spectrometry,UPLC-QE Orbitrap MS)进行面积归一化法测定糖肽纯度,采用核磁共振波谱仪(nuclear magnetic resonance,NMR)测定糖肽的氢谱(1 H NMR)和碳谱(^(13)C NMR),并结合二级质谱进行结构定性分析。最后用酶标仪(microplate reader spectrometry,MRS)对比测定玉米七肽及其糖肽的ADH激活活性,以验证玉米七肽糖基化修饰对其ADH激活活性的影响。结果玉米糖肽经过分离、纯化和冻干后,其纯度达到99.11%,并且通过二级质谱、核磁氢谱和碳谱的分析,确定氨基葡萄糖连接在玉米七肽谷氨酰胺残基的氨基上。在摩尔浓度为2.5 mmol/L时,糖肽的ADH激活率比玉米七肽高9.89%。结论与玉米肽相比,采用TGase酶介导玉米七肽和氨基葡萄糖合成的糖肽,具有更高的ADH激活活性,为玉米肽糖基化在食品工业中的应用提供参考。

非小细胞肺癌组织中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2的表达及临床意义

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2(G3BP2)的表达情况,分析G3BP2对NSCLC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法收集NSCLC患者120例,腺癌47例,鳞状细胞癌73例。免疫组织化学检测腺癌、鳞状细胞癌组织中G3BP2的表达情况,分析G3BP2表达与患者临床病理特征的关系。蛋白免疫印迹实验和qRT-PCR检测SPC-A-1、16HBE细胞中G3BP2的表达。对NCI-H226、SPC-A-1细胞转染si-NC、si-G3BP2质粒,检测敲低G3BP2对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果腺癌组织和鳞状细胞癌组织中G3BP2的阳性表达率无统计学差异(P>0.05),G3BP2阳性与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。NCI-H226和SPC-A-1细胞中G3BP2蛋白及mRNA的表达高于16HBE细胞。敲低G3BP2可明显抑制NCI-H226、SPC-A-1细胞的增殖和侵袭并增强细胞凋亡。结论G3BP2在NSCLC组织中的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移有关,敲低G3BP2的表达可显著抑制NSCLC的进展。

基于X连锁凋亡抑制蛋白/第二种线粒体衍生半胱天冬酶激活剂通路探讨尼莫地平对脑梗死大鼠神经功能的影响

目的基于X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)/第二种线粒体衍生半胱天冬酶激活剂(Smac)通路探讨尼莫地平对脑梗死大鼠神经功能的影响。方法以线栓法闭塞大鼠大脑中动脉诱导建立大鼠脑梗死模型,随机分为模型组、尼莫地平组(10 mg/kg)、AT-406组(XIAP抑制剂,7 mg/kg)、联合组(尼莫地平联合AT-406),每组12只,另取12只大鼠设定为假手术组,分别给药干预后,以Zea Longa分级法对各组大鼠神经功能缺损进行评分;以Morris水迷宫实验评测各组大鼠学习记忆功能通过比较其跨越原平台次数;以TTC染色检测各组大鼠脑梗死状况;以TUNEL染色评测各组大鼠海马神经元凋亡状况;以试剂盒检测各组大鼠血清促炎因子环氧化酶-2(COX-2)与白细胞介素-18(IL-18)含量;以蛋白免疫印迹法检测各组大鼠脑组织凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]与XIAP/Smac通路相关蛋白(XIAP、Smac)表达状况。结果与假手术组相比,模型组大鼠跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组、联合组分别相比,尼莫地平组大鼠跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平均升高(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平均降低(P<0.05)。与模型组、联合组分别相比,AT-406组大鼠脑组织跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平均降低(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平均升高(P<0.05)。结论尼莫地平可通过上调XIAP表达,下调Smac表达,进而抑制炎症,减轻脑梗死大鼠海马神经元凋亡,提升大鼠学习记忆能力,改善其神经功能。

纤溶酶激活物抑制物1和三磷酸腺苷结合盒转运体B1(C3435T)基因多态性对使用糖皮质激素药物患者股骨头坏死的诊断价值

目的:分析纤溶酶激活物抑制物1(PAI-1)和三磷酸腺苷结合盒转运体B1(ABCB1)(C3435T)基因多态性对使用糖皮质激素药物患者股骨头坏死(ONFH)的诊断价值。方法:选取2019年9月—2022年1月于茂名市人民医院使用糖皮质激素药物治疗的系统性红斑狼疮(SLE)患者61例作为研究对象,将继发ONFH的30例患者作为ONFH组,将同期行基因检测且未发生ONFH的31例患者作为非ONFH组。检测两组患者的PAI-1(4G/5G)和ABCB1(C3435T)的基因多态性。结果:非ONFH组和ONFH组患者的性别、年龄、身体质量指数、受教育程度、居住地、激素起始量、激素使用累积量>10 g、激素冲击以及合并LN等情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ONFH组PAI-1中4G4G型患者占比高于非ONFH组,5G4G型/5G5G型占比低于非ONFH组,差异有统计学意义(P=0.024);ONFH组ABCB1(C3435T)中CC型患者占比高于非ONFH组,CT型/TT型患者占比低于非ONFH组,差异有统计学意义(P=0.028)。结论:PAI-1和ABCB1(C3435T)分型与使用糖皮质激素药物治疗的SLE患者发生ONFH密切相关。

急性胰腺炎胰酶激活机制的研究进展

急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）是由于多种病因引起胰酶激活,以胰腺局部炎症反应为主要特征,伴或不伴有其它脏器功能改变的疾病,是临床上常见的急腹症之一,死亡率一直居高不下。AP的发病机制非常复杂,其发生发展受多种因素影响,其中胰酶的激活起着极为重要的作用[1],

α-熊果苷对酪氨酸酶二酚酶激活动力学的研究

采用酶动力学方法,以L-多巴为底物,通过酪氨酸酶二酚酶催化反应体系,研究α-熊果苷对二酚酶活性的影响。实验结果表明:α-熊果苷对酪氨酸酶的二酚酶催化反应产生激活效应,反应过程没有迟滞时间;由Lineweaver-Burk双倒数作图得知,在一定范围内,随着催化反应系统中α-熊果苷浓度的增大,动力学参数Km逐渐减小,而最大反应速率Vmax逐渐增大,表明α-熊果苷对酪氨酸酶二酚酶的激活作用为竞争及非竞争混合型;并且从酶的构象变化及减少酶的自杀性失活的角度,阐述了α-熊果苷对酪氨酸酶二酚酶的激活机制。

钙激活酶激活蛋白基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化

构建钙激活酶激活蛋白基因(UK114)的原核表达载体并优化其表达条件,为其高效表达提供试验依据。以UK114 cDNA为模板,通过PCR方法扩增钙激活酶激活蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,在保持菌种不改变的前提下,分别改变IPTG的浓度、培养时间、菌体浓度、培养温度等来优化表达条件。结果显示,原核表达载体pGEX-4T-3-UK114成功构建,可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约40 kD的GST-UK114融合蛋白。在IPTG浓度为0.3 mmol/L,诱导温度为32℃,诱导时间为4 h,菌体密度OD600为0.6的条件下,目的蛋白表达量最高。试验成功构建原核表达载体pGEX-4T-3-UK114且获高效表达,为研究UK114生物学活性及产品开发提供了试验基础。

PCR法扩增钙激活酶激活蛋白cDNA

钙激活酶激活蛋白是钙激活酶的激活蛋白, 可以促进钙激活酶活性的发挥, 从而促进肉的嫩化。采用PCR技术, 以山羊肝脏cDNA为模板经扩增得到钙激活酶激活蛋白(calpainactivator) 基因, 并进行了序列测定。该片段长1 017bp, 5′—端非翻译区长39bp, 3′—端非翻译区长567bp。编码区长411bp, 编码一个长137个氨基酸残基的蛋白质, 其理论分子量为14 298Da。与EdonMelloni等(1998) 报道的从牛脑中提取纯化的钙激活酶激活蛋白的氨基酸序列相比发现, 二者仅有五个位点不同。

SN-924酶激活剂在大豆上的应用效果分析

在大豆上应用ＳＮ－９２４酶激活剂，可加快幼苗生长，增加叶片叶绿素含量和光合速率；单株结荚率提高１０％，产量增加１２％。

钙激活酶激活蛋白cDNA的克隆与序列分析

钙激活蛋白酶(calpain)是动物宰后导致肉嫩化的主要蛋白酶。促进calpain活性的发挥,从而提高肉的嫩度,一直是肉类科学研究工作者的重要研究课题。最新的研究表明,钙激活酶激活蛋白(calpainactivator)———钙激活蛋白酶(calpain)系统的一个新成员,是calpain活性的主要调节者。Calpainactivator可以激活calpain,使其活性提高大约400倍。利用分子生物学方法克隆calpainactivator,为生物肉嫩化技术奠定基础,是食品领域应用生物技术提高生产效率的又一新的课题。本文利用PCR方法克隆了calpainactivatorcDNA序列,并对其进行了序列分析。结果表明,该片段长1017bp,5'—端非翻译区长39bp,3'—端非翻译区长567bp。编码区长411bp,编码一个长137个氨基酸残基的蛋白质,其理论分子量为14298Da。与EdonMelloniet.al1998年报道的从牛脑中提取纯化的钙激活酶激活蛋白的氨基酸序列相比发现,二者仅有五个位点不同。

失血性休克-复苏损伤降低小鼠骨骼肌脂肪氧化能力及过氧化物酶激活受体的表达

目的:研究小鼠失血性休克-复苏损伤后骨骼肌脂质氧化及过氧化物酶激活受体表达的变化。方法:将48只小鼠分成六组,即假手术对照组(Sham组)及按小鼠控制性失血休克-复苏损伤后处死时间的不同分为第1天(D1)组、第2天(D2)组、第3天(D3)组、第4天(D4)组和第5天(D5)组。取小鼠比目鱼肌组织,检测脂质氧化相关蛋白及其基因的表达水平。结果:造模后小鼠骨骼肌组织中的肉碱棕榈酸转移酶-1(CPT-1b)、脂肪酸转运蛋白1(FATP-1)、过氧化物酶激活受体(PPAR-α)和PPAR-β蛋白及基因表达水平明显降低。结论:失血休克-复苏后小鼠调节脂质氧化的核受体表达下降,脂肪氧化能力受损。

麻黄汤及拆方对哮喘小鼠5-脂质氧合酶激活蛋白、白介素4基因的表达和白三烯C_4的影响

目的:通过对麻黄汤(Herba Ephedrae decoction,HED)各拆方配伍组对哮喘小鼠5-脂质氧合酶激活蛋白(FLAP)、白介素4(IL-4)基因的表达和白三烯C4(LTC4)的影响来探讨其配伍规律。方法:建立小鼠卵蛋白哮喘模型,除正常对照组和模型组外其余各组分别灌胃给予麻黄汤及拆方(以麻黄生药剂量2 500 mg.kg-1)和阳性药地塞米松(2 mg.kg-1),连续用药7 d后用实时荧光定量PCR方法检测肺组织中5-脂质氧合酶激活蛋白、白介素4mRNA表达的变化,用ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液中LTC4含量。结果:哮喘小鼠肺组织中FLAP,IL-4基因表达水平、支气管肺泡灌洗液(BALF)中LTC4水平均较正常对照组显著升高。麻黄汤及拆方组可以不同程度抑制小鼠肺组织中FLAP,IL-4基因表达水平,BALF中LTC4水平。结论:麻黄汤具有明显抗过敏哮喘的作用,拆方分析显示麻黄汤全方效果最佳,从分子水平验证了麻黄汤组方的科学性和合理性。

5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性与中国汉族人群脑卒中遗传相关性研究

目的探讨5-脂氧合酶激活蛋白（ALOX5AP）基因的SG13S114和SG13S32两个SNP位点多态性与中国汉族人群脑卒中的相关性。方法本研究共纳入507例脑卒中患者（动脉粥样硬化性脑梗死158例，腔隙性脑梗死243例，脑出血106例）和513例对照组人群。采用聚合酶链式反应（PCR）和限制性片段长度多态性（RFLP）技术检测基因的多态性。运用SPSS16．0软件进行基因型、等位基因和单倍型等的关联分析。多元素logistic回归方法调整传统危险因素后分析基因多态性与脑卒中发病风险的独立相关性。结果SG13S114和SG13S32位点等位基因频率和基因型频率在病例组与对照组间比较差异无统计学意义。但经传统危险因素高血压分层后，SGl3S114Tr基因型能够显著降低无高血压人群患脑卒中的发病风险（OR=0．54，95％C10．30～0．98）。两位点单倍型构成在脑卒中组及其各亚型组与对照组间比较差异无统计学意义。结论本地区中国汉族人群中ALOX5AP基因SG13S114和SG13S32两个位点多态性与脑卒中无显著关联，而SG13S114TT基因型能显著降低无高血压人群脑卒中的发病风险，提示该基因可能与本地区无高血压人群脑卒中发病相关。

砒石对哮喘小鼠5-脂氧合酶激活蛋白基因表达及白三烯C_4的影响

目的 探讨 5 脂氧合酶激活蛋白 (FLAP)基因表达、小鼠白三烯C4(LTC4)水平在小鼠哮喘发病中的作用 ,以及砒石对哮喘的治疗作用与FLAP基因表达及LTC4水平的关系。方法 建立小鼠卵蛋白哮喘模型 ,灌胃给予砒石等药 ,用逆转录聚合酶链反应方法检测肺组织中FLAPmRNA表达的变化 ;用ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中LTC4含量。结果 哮喘小鼠肺组织FLAP基因表达水平、BALF中LTC4水平均较正常对照组显著升高。 1 2 5、2 5 0及 5 0 0mg/kg剂量的砒石可下调哮喘小鼠FLAPmRNA表达的量 ,抑制哮喘小鼠BALF中LTC4的水平。结论 气道中FLAP基因表达上调和LTC4水平增高在OVA致敏小鼠哮喘发病中起着重要作用。砒石可显著抑制哮喘小鼠肺组织中FLAP基因的表达 ,降低哮喘小鼠BALF中LTC4水平 ,具有抗哮喘活性。

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1和Rac GTP酶激活蛋白1在人乳腺癌组织芯片中的表达及意义

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)及Rac GTP酶激活蛋白1(Rac1)在人乳腺癌组织芯片中的表达及意义。方法:采用组织芯片和免疫组织化学法检测65例乳腺癌组织与癌旁正常乳腺组织中Tiaml和Rac1的表达,并探讨其表达与乳腺癌临床病理特征的关系,以及两分子标志物之间的相互关系。结果:Tiaml、Rac1在乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中阳性表达率分别为73.8%、41.5%和70.8%、32.3%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。Tiaml与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移、TNM分期、ER、PR、Ki-67表达密切相关(P<0.05),与患者的年龄、肿瘤大小、CerbB-2、p53、E-cadherin表达均无关(P>0.05),Rac1与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移、TNM分期、Ki-67表达密切相关(P<0.05),与患者的年龄、肿瘤大小、ER、PR、CerbB-2、p53、E-cadherin表达均无关(P>0.05)。Tiaml和Rac1的表达呈正相关关系(r=0.541,P=0.000)。结论:Tiaml和Rac1在乳腺癌增殖、侵袭和转移中起促进作用,联合检测Tiam1及Rac1的表达有望成为乳腺癌预后和个体化治疗的有效指标。

鞘脂酶激活蛋白在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的表达

目的观察鞘脂酶激活蛋白(sphingolipid activatorproteins,Saposins)在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的表达。方法收集20例年龄相关性白内障和10例正常透明晶状体的前囊膜(中央5.5～6.0mm直径区域),采用免疫组织化学染色法检测晶状体上皮细胞中鞘脂酶激活蛋白的表达并计算灰度值。结果两组晶状体上皮细胞中均有鞘脂酶激活蛋白的表达。与正常透明晶状体组相比,Saposin A(145.03±11.96)、Saposin C(139.78±7.99)和Saposin D(144.30±8.22)在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的表达量增加(P均<0.01),SaposinB(132.59±16.91)的表达量无明显增加(P>0.05)。结论鞘脂酶激活蛋白可能在晶状体老化和年龄相关性白内障形成过程中起重要作用。

5-脂氧合酶激活蛋白(ALOX5 AP)基因单倍体型与心肌梗死易感性相关:人类基因组流行病学研究的荟萃分析

目的既往研究提示ALOX5AP基因变异与心肌梗死(Myocardial infarction,MI)相关,但这些研究大多样本较小,结论亦不一致。本文拟系统评价ALOX5AP基因变异与MI易感性的关系。对象与方法系统检索PubMed(1967.1～2009.5)、Embase(1967.1-2009.5)数据库及维普(1989-2009)、CNKI(1979-2009)中文期刊数据库,并通过阅读相关综述及文章的参考文献进一步获取信息。对目前已发表的评估ALOX5AP基因变异与MI关系的候选基因关联研究进行荟萃分析。应用固定效应模型(Fixed-effect models)计算比值比(Odds ratio,OR)及其95%可信限(CI),用以描述ALOX5AP基因变异与MI的关系。结果共有5项探讨ALOX5AP基因HapA单倍体型(SG13S25G-SG13S114T-SG13S89G-SG13S32A)与MI关系的研究(合计MI病例2778人,对照2484人)及4项评估ALOX5AP基因HapB单倍体型(SG13S377A-SG13S1 14A-SG13S41A-SG13S35G)与MI关系的研究(合计MI病例1999人,对照1860人)纳入荟萃分析。5项关于HapA单倍体型的研究间无明显异质性(P=0.111,I^2=46.8%)。与非携带者相比,ALOX5AP基因HapA单倍体型携带者使MI的易感性增加24%(OR:1.24,95%可信限1.06-1.45,P=0.006)。4项关于HapB的研究亦无明显异质性(P=0.148,I^2=43.9%);与非携带者相比,ALOX5AP基因HapB单倍体型携带者使MI的易感性增加31%(OR:1.31,95%可信限1.01-1.70,P=0.04)。结论本研究提示ALOX5AP基因HapA、HapB单倍体型与MI的易感性增加有关。

第二线粒体衍生的半胱天冬酶激活剂在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义

目的检测第二线粒体衍生的半胱天冬酶激活剂(Smac)蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达,探讨其与临床病理因素及预后的关系。方法采用免疫组化方法检测Smac蛋白在175例宫颈鳞癌组织和49例正常宫颈组织中的表达情况。结果Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期宫颈鳞癌患者的5年生存率分别为68.9%、56.4%和36.5%。Smac蛋白主要定位于癌细胞浆,在正常宫颈组织中不表达。在175例宫颈鳞癌组织中87例表达阳性。临床分期Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期宫颈癌的阳性率分别为70.2%、47.2%和35.7%,其差异均具有统计学意义(P<0.01)。Smac蛋白在有淋巴结转移和无淋巴结转移的表达分别为23.8%和57.9%,二者比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Smac蛋白在宫颈鳞癌组织中表达下调,预示肿瘤有较高的侵袭性和患者预后不良。

5脂氧合酶激活蛋白介导人脐静脉内皮细胞氧化损伤

目的探讨5脂氧合酶激活蛋白在人脐静脉内皮细胞氧化损伤中的机制。方法体外分离、培养人脐静脉内皮细胞,分别用10、50、100和200mg/L氧化型低密度脂蛋白处理细胞24h,采用酶联免疫吸附法检测细胞上清液白三烯C4水平,MTT法检测细胞活力,以及实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞5脂氧合酶激活蛋白mRNA及蛋白表达的变化。结果100mg/L和200mg/L氧化型低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞24h细胞活力显著下降(P<0.01),白三烯C4分泌显著增加(P<0.01),回归分析显示白三烯C4释放量与氧化型低密度脂蛋白浓度显著相关(r=0.953,P<0.01)。PCR和Western blot分析发现,5脂氧合酶激活蛋白mRNA表达和蛋白表达均显著增强(P<0.01和P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白促进人脐静脉内皮细胞分泌白三烯C4,导致人脐静脉内皮细胞氧化损伤可能与5脂氧合酶激活蛋白异常表达有关。

钙激活酶激活蛋白的研究进展

钙激活酶 (calpain)是促进宰后肌肉嫩化的主要的内源酶。钙激活酶激活蛋白 (calpainactivator)是钙激活酶系统的成员之一 ,是区别于钙激活酶抑制蛋白 (calpastatin)的钙激活酶的正调节蛋白。目前已对其激活特性、氨基酸序列及cDNA序列实行了研究 ;但其结构和激活机理还不清楚。