凝血活酶生成动力学检查及意义

目的:利用凝血过程中的动力学原理,建立一新方法,对人体凝血功能进行更深入的研究。方法:基于凝血活酶生成一期法和二期法的检测原理,利用分光光度计对纤维蛋白形成过程进行连续扫描,并对扫描图形进行测量分析获得凝血活酶生成情况。结果:实验数据显示纤维蛋白聚合速度与凝血酶形成的时间和含量相关,而凝血酶生成与凝血活酶形成时间和含量相关,利用这一相关性可检测参与凝血活酶形成各凝血因子的活性。结论:凝血动力学方法可行、可靠并能提供较传统方法更为直观和更多的实据参数。

以迟缓型凝血活酶生成试验、纠正试验及交叉试验改变的血友病两例报告

1 资料和方法 Biggs凝血活酶生成试验对血友病类出血性疾病的诊断和鉴别诊断有很大价值,既是轻型者也可作出诊断。本院对有关出血性疾病的诊断,一般按常规检查即可得出结果,而近期遇到两例血友病患者却不能据此确诊,经过延长消耗时间达24小时后,才使凝血活酶生成试验成功,及至纠正,从而明确了诊断。 例1,男性,年龄32岁;例2,男性,年龄36岁,系兄弟两人,均有典型血友病史;自幼出血、关节肿胀并畸型,每次出血均经输注新鲜血液而缓解,此次又因肘关节出血并大块血肿,为查明原因而来本院就诊。 实验室检查:①凝血时间(CT,试管法),两例均明显延长,达1小时以上。②血浆复钙时间(RT):两例均明显延长,例1长达420秒。

猪背膘中NADPH生成酶的活性与瘦肉率关系的初步研究

试验选择湖北白猪断奶仔猪48头,测定150和180日龄的活体背膘厚及背膘脂肪组织中NADPH生成酶的活性。180日龄随机屠宰36头。对背膘中4种NADPH生成酶的活性与活体背膘厚及胴体性状进行相关分析,结果表明:150和180日龄4种酶的总活性与活体背膘厚、胴体背膘厚及肥肉率呈正相关;与胴体瘦肉率呈负相关。说明4种NADPH生成酶的活性高时,猪的活体背膘厚、胴体肥肉率提高,瘦肉率降低。文中还给出了用酶活性估测瘦肉率的回归方程。研究结果表明猪背膘中4种NADPH生成酶的活性可以作为选择瘦肉型猪瘦肉率性状的辅助指标。

北京黑猪NADPH生成酶活性的遗传分析

本文收集１３０２头北京黑猪个体测定资料，利用最小二乘模型估计北京黑猪背膘脂肪组织ＮＡＤＰＨ生成酶活性、背膘厚、日增重、饲料转化率等性状的遗传力、遗传相关、表型相关、环境相关等参数，同时估计了１９９１～１９９５年间这些性状的变化以及采样体重、性别等因素对ＮＡＤＰＨ生成酶活性的影响。结果表明：①ＮＡＤＰＨ生成酶总活性的估计遗传力为０．２５±０．０３（Ｐ＜０．０１）；②ＮＡＤＰＨ生成酶活性与背膘厚、日增重、饲料转化率的遗传相关分别为０．５１，０．７５及０．４８；③在５０ｋｇ左右体重采样时，不同性别测定猪ＮＡＤＰＨ生成酶总活性有显著差别（Ｐ＜０．０５）。

双酚A对颗粒细胞激素生成及相关甾体生成酶的影响

目的探讨双酚A(BPA)对大鼠颗粒细胞雌、孕激素生成及相关甾体生成酶的影响。方法采用大鼠卵巢颗粒细胞进行体外培养,72h后给予不同浓度的BPA(0、10-7、10-6、10-5、10-4M)处理,继续培养48h后,收集细胞培养液,用超敏感的固相放射免疫方法测定孕酮和雌二醇(E2)的浓度;用荧光实时定量PCR法测定颗粒细胞内芳香化酶(P450arom)、胆固醇侧链裂解酶(P450Scc)和类固醇合成急性调节蛋白(StAR)的mRNA表达水平。结果在BPA作用下,颗粒细胞孕酮分泌量在10-7M到10-5M组逐渐升高(P<0.05),但在10-4M剂量组出现意外陡降(P<0.01);而E2的分泌量则随BPA浓度的增加而下降(P<0.01)。P450arom mRNA表达显著降低;P450Scc表达量亦在10-7M到10-5M组逐渐升高(P<0.05),而10-4M组出现显著降低(P<0.01)。StARmRNA表达在10-4M组增高(P<0.05)。结论BPA能直接作用于卵巢颗粒细胞,通过作用于P450arom,P450Scc等相关酶的表达以及类固醇合成的限速因子-StAR的表达,而影响颗粒细胞雌孕激素的分泌。

硫氰酸生成酶样基因在家蝇高温和重金属镉应激中的作用

硫氰酸生成酶同源结构域普遍存在于古细菌、真细菌以及真核生物的多种蛋白分子内,这些蛋白构成一个功能多样的硫氰酸生成酶超家族。本研究根据家蝇转录组序列信息,分拣到一条硫氰酸生成酶样基因的EST序列,经分析发现其编码蛋白C末端含有典型的硫氰酸生成酶同源结构域,属于硫氰酸生成酶超家族,将其命名为家蝇硫氰酸生成酶样基因(Md-Rhodlike)。应用实时定量RT-PCR技术,分析了Md-Rhodlike在热激、镉胁迫条件下的表达量变化。Md-Rhodlike的mRNA水平在高温和镉处理后上调,提示该基因可能参与家蝇对高温及镉金属等环境胁迫因子的耐受,是一种新的家蝇应激相关蛋白。

麦芽三糖生成酶高产菌株的选育

以蛾微杆菌(Microbacterium imperiale)Mebl-012菌株为出发菌株,利用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)和紫外复合诱变,筛选麦芽三糖生成酶高酶活菌株。将不同ARTP致死率下的菌悬液进行了混合,均匀涂布筛选平板进行初筛,之后用摇瓶发酵进行复筛,最终筛选出了一株麦芽三糖生成酶高产突变菌株Microbacterium imperiale Metp-57,酶活达到241.32 U/m L,较出发菌株Mebl-012(产量为116.43 U/m L)提高了107.26%。以ARTP诱变过程中筛选出的高产菌株Metp-57为出发菌株,进行紫外诱变处理,得到高产突变株Metu-24,其麦芽三糖生成酶酶活可达到408.41 U/m L,较原始菌株Mebl-012提高了250.77%,且遗传性状稳定。突变株Metu-24较原始菌株Mebl-012的生长速率有明显提高。以本实验麦芽三糖生成酶水解淀粉,制备的麦芽三糖糖浆中麦芽三糖占主要成分,含量达到46.7%。

猪不同组织中NADPH－生成酶活性规律的探讨

北京花猪Ⅱ系在３５ｋｇ体重时，背膘脂肪中的ＮＡＤＰＨ－生成酶活性最高，此有随体重的增加而逐渐下降，７５ｋｇ体重时又开始回升。生长后期，不同背膘位置的酶活性差异不显著，而不同层脂肪的酶活性差异明显，内层高于外层。ＭＤＨ、Ｇ６ＰＤＨ和６ＰＧＤＨ在脂肪组织中活性较高，而在肝脏、心肌和肌肉中却很低。在遗传上有差异的北京花猪Ⅱ系和长白猪，可由酶活性反映出来。若以肩部外层脂肪的ＭＤＨ和Ｇ６ＰＤＨ作为早期选种的遗传标记，有望加胴体蓄脂年的育种进程。

糖皮质激素对急性肺栓塞后肺组织内硫氰酸生成酶表达的影响

目的研究糖皮质激素对大鼠急性肺栓塞后肺组织内硫氰酸生成酶(rhodanase,Rho)表达的影响。方法建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、8、24和48h开胸取出肺组织。常规提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常组为对照,采取半定量RT-PCR和westernblot方法研究Rho在mRNA水平和蛋白水平的表达变化;采用免疫组织化学的方法检测大鼠肺组织中Rho在肺栓塞前后表达的变化及其组织分布情况。在大鼠急性肺栓塞后48h,采用RT-PCR和western blot方法观察地塞米松(dexamethasone,DEX)对Rho蛋白表达的影响。分离培养原代大鼠气道上皮细胞,在培养液中加入50ng/mL的共刺激因子IL-1β,TNF-α和IFN-γ,采用半定量RT-PCR,westernblot和免疫荧光染色的方法观察1μM的DEX对上皮细胞Rho表达的影响,采用ELISA方法检测上皮细胞IL-8和GM-CSF的表达。结果大鼠急性肺栓塞后,Rho的mRNA水平和蛋白水平均逐渐下降,免疫组化研究表明Rho主要分布在支气管粘膜上皮细胞,在急性肺栓塞后表达显著下降。DEX可显著提高Rho的肺内表达。大鼠气道上皮细胞在共刺激因子的作用下IL-8和GM-CSF的表达显著升高,DEX可明显抑制IL-8和GM-CSF的表达,但是Rho的表达显著升高。结论大鼠急性肺栓塞后肺组织内Rho的表达明显下降,糖皮质激素可升高Rho的表达。离体实验证明糖皮质激素是通过抑制上皮细胞的炎症反应来提高Rho的表达。

C端柔性区域对多糖降解菌来源的麦芽五糖生成酶冷适性的调控

冷适麦芽五糖生成酶在低温下具有较高的催化活力,同时能够在室温下快速水解淀粉并特异性地生成具有营养功效的麦芽五糖,因此在食品、医药等领域具有广阔的应用前景。作者以来源于Saccharophagus degradans的两种麦芽五糖生成酶(SdG5A和SdG5A-CD)为研究对象,将其分别表达于Bacillus subtilis中,并分析比较了重组酶的冷适性。结果表明,重组SdG5A在0℃下可以保持27.8%的酶活力,在室温下生产麦芽五糖的得率高达48.6%,具有较强的冷适性;而不含有linker和淀粉结合域(SBD)的SdG5A-CD不具有冷适性。为了探究SdG5A的冷适性机理,利用RoseTTAFold构建了结构模型,并利用分子动力学模拟等方法分析了结构柔性。结果表明,位于SdG5A C端的linker-SBD区域具有极高的柔性,且在0℃下的均方根涨落与45℃保持一致,说明linker-SBD结构高柔性的分子特征是影响SdG5A冷适性的关键因素。

小鼠睾丸间质细胞部分雄激素生成酶mRNA的扩增

小鼠睾丸间质细胞部分雄激素生成酶ｍＲＮＡ的扩增沙家豪周作民王黎熔林敏胡志刚Ｐ．Ｊ．Ｏ＇Ｓｈａｕｇｈｎｅｓｓｙ本研究应用不连续密度梯度离心纯化小鼠睾丸间质细胞（Ｌｅｙｄｉｇ细胞），并运用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的方法扩增所分离的Ｌｅｙｄｉｇ...

鸡CSE多克隆抗体制备及硒缺乏对鸡肝脏内源性硫化氢生成酶的影响

硒与硫化氢生成酶均在动物生理活动中起重要作用。为探讨硒缺乏对鸡内源性硫化氢生成酶的影响,在建立鸡低硒模型后,分别于15、25、35、45、55、65 d采集肝组织,应用实时荧光定量PCR法检测H2S生成酶(CSE、CBS、3-MST)mRNA表达量。结果表明,低硒可诱导CSE、CBS和3-MST mRNA表达量升高,但无时间效应,揭示H2S生成酶在硒缺乏导致的损伤中有重要作用。制备CSE多克隆抗体,为今后CSE蛋白水平研究奠定基础。

对猪组织中NADPH—生成酶活性规律的进一步分析

北京花猪在35kg体重时,控制脂肪合成的四种NADPH—生成酶活性两两相关且达到显著水平,MDH和G6PDH的遗传力稍高(0.26～0.30),6PGDH和G6PDH与肉质有关,营养水平对酶活性的影响较大。综合分析得出:在利用早期酶活性标记个体蓄脂力的育种实践中,饲养水平要稳定,仅测定背膘脂肪中MDH和G6PDH即可希望取得良好的选择效果。

利清通方对高尿酸血症大鼠的降血尿酸作用及对尿酸生成限速酶与尿酸转运体的影响

目的 建立高尿酸血症大鼠模型,研究利清通方的降血尿酸作用及其机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、别嘌呤醇组、利清通低、中、高剂量组,采用氧嗪酸钾750 mg/(kg·d)灌胃建立高尿酸血症大鼠模型,以别嘌呤醇为阳性对照,观察利清通方对大鼠体质量的影响,利用比色法测定血尿酸(serum uric acid,SUA)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)、腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)含量,利用实时荧光PCR和蛋白免疫印迹法分别测定肾脏三磷酸腺苷结合转运蛋白2(ATP-binding cassette sub-family G member 2,ABCG2)、尿酸盐阴离子转运体1 (recombinant urate transporter 1,URAT1)和葡萄糖转运蛋白9(glucose transporter 9,GLUT9)的m RNA及蛋白表达。结果(1)与空白组比较,模型组体质量降低(P <0.05),SUA、XOD、ADA含量升高(P <0.05),URAT1、GLUT9的m RNA表达量升高(P <0.05),ABCG2蛋白表达量降低(P <0.05),URAT1蛋白表达量升高(P <0.05);(2)与模型组比较,利清通方中、高剂量组体质量升高(P <0.05),利清通方高剂量组SUA含量降低(P <0.05),利清通方低、中、高剂量组XOD含量降低(P <0.05),利清通方高剂量组ADA含量降低(P <0.05),利清通方低、中、高剂量组ABCG2 m RNA表达量升高(P <0.05),利清通方低、中、高剂量组URAT1、GLUT9的m RNA表达量降低(P <0.05),利清通方高剂量组ABCG2蛋白表达量升高(P <0.05),利清通方低、中、高剂量组URAT1蛋白表达量降低(P <0.05)。结论 连续30天灌胃750 mg/(kg·d)氧嗪酸钾可建立稳定的高尿酸血症大鼠模型。利清通方具有降血尿酸作用,其机制可能与抑制尿酸生成限速酶XOD、ADA活性抑制尿酸生成,上调肾尿酸转运体ABCG2蛋白表达,下调URAT1、GLUT9蛋白表达促进尿酸排泄有关。

恒磁场对糖基化终产物作用下内皮细胞一氧化氮生成和一氧化氮合酶活性的影响

目的观察不同强度恒磁场对糖基化终产物作用下人脐静脉内皮细胞一氧化氮生成及一氧化氮合酶活性的影响。方法采用体外培养第3代人脐静脉内皮细胞,糖孵育法制备糖基化终产物修饰牛血清白蛋白。实验分为6组,即对照组、糖基化终产物修饰牛血清白蛋白(100μg/L)组及糖基化终产物修饰牛血清白蛋白+不同强度(1×10-4T、5×10-4T、10×10-4T2、0×10-4T)磁场组。各组细胞于培养及磁场作用24 h后收集标本,用Griess法检测培养上清中一氧化氮水平,并测定人脐静脉内皮细胞的一氧化氮合酶活性。结果糖基化终产物修饰牛血清白蛋白组一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性较对照组明显降低(P<0.05)。1×10-4T、5×10-4T、10×10-4T和20×10-4T恒磁场组一氧化氮生成、一氧化氮合酶活性显著高于糖基化终产物修饰牛血清白蛋白组(P<0.05)。结论糖基化终产物修饰牛血清白蛋白可抑制人脐静脉内皮细胞的一氧化氮合酶活性和一氧化氮产生;1×10-4T^20×10-4T的恒磁场可呈强度依赖性拮抗糖基化终产物修饰牛血清白蛋白对一氧化氮生成的抑制效应。

NADPH生成酶活性与猪肉质关系的初步研究

0 前言随着瘦肉型猪在生产上的推广,P.S.E.猪(Pale,Soft and Exudative pigs)在经济上造成的损失也越来越大。七十年代以后,国内、外在对瘦肉型猪选育的同时,广泛开展了对肉质的研究。猪体内酶活性变化与肉质、肉量关系的研究也受到重视。P.S.E.肉在瘦肉率高的猪中多发;其红细胞易于溶血,肌细胞膜易于受损,破裂;糖代谢活动紊乱等,这似乎都与体内NADPH生成酶活性有关。因此,特作本试验。1 材料与方法1987年春,用ES猪53头。其中:公猪31头,母猪22头。出生年龄差别在20天以内。试猪三月龄时,采血用荧光分光光度法测定苹果酸酶(ME),葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGD)三种NADPH生成酶的活性。然后进行氟烷测定。试猪六月龄时,电击后再测血中ME的活性。宰后测定肌肉中ME、G6PD和6PGD三种酶活性。并测定背最长肌的pH值、肉色值和系水力值,算出肉质模糊综合评定值(FSD值)。

源于Bacillus megaterium STB10的直链麦芽五糖生成酶酶学性质及其产物合成规律

构建来源于巨大芽孢杆菌STB10直链麦芽五糖生成酶(Bacillus megaterium maltopentaose-forming amylase,BmMFA)的食品级枯草芽孢杆菌表达系统,实现了该酶的分泌表达,分析了其酶学性质,并对其产物合成规律进行了探究。结果显示,BmMFA具有较强的催化活力,枯草芽孢杆菌发酵后上清液中酶活力可达196.57 U/mL;该酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为7.0,且具有相对较宽的pH值应用范围;BmMFA倾向于内切酶作用机制,且具有较好的产物特异性,水解麦芽糊精24 h后产物中直链麦芽五糖质量分数42%以上,当以支链淀粉为底物时,其转化率及主产物直链麦芽五糖比例均优于直链淀粉。本研究为直链麦芽五糖的酶法制备提供了一定的理论依据。

环状糊精生成酶发酵杂菌污染的防治

环状糊精生成酶(CGT酶)是生产环状糊精的专用酶制剂。它是以农付产品和少量的无机盐为原料经深层发酵制取。我们厂从江苏省食品发酵研究所引入β—环状糊精生产技术,并投入了生产。由于多种原因,投产前期发酵不够正常,时有杂菌污染,有时甚至倒罐,影响了生产的正常进行和产品的经济效益。厂领导对此十分重视,要求尽快找出原因加以解决。我们承包后经过一段时间的研究与探索,找出了染菌的主要原因,并总结出行之有效的防治措施。

丙戊酸钠对卵泡内膜细胞雄激素分泌及相关甾体合成酶改变的影响

目的:研究丙戊酸钠(VPA)对卵泡内膜细胞睾酮生成以及细胞色素P45017α羟化酶(CYP17)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和类固醇激素急性调节蛋白(StAR)mRNA的影响。方法:采用猪的卵泡内膜细胞进行体外原代培养,并给予不同浓度的VPA(0mg/L、50mg/L、100mg/L和250mg/L)处理,48h后收集培养液,采用ELISA法检测细胞睾酮的分泌,采用荧光实时RT-PCR(TaqMan.assay)方法检测卵泡内膜细胞中CYP17、P450scc和StARmRNA表达。结果:VPA刺激了卵泡内膜细胞睾酮的分泌(P<0.05),且CYP17(P<0.01)、P450scc(P<0.01)和StAR(P<0.01)mRNA表达增加。结论:VPA可直接作用于卵泡内膜细胞,改变CYP17、P450scc和StARmRNA表达,引起雄激素的分泌变化。临床上长期服用VPA的癫痫妇女出现类似于PCOS患者的生殖内分泌功能紊乱,可能与该药物本身作用有密切联系。