用酶组合技术制备水解明胶的研究

本文研究了ASI.398中性蛋白酶和菠萝蛋白酶法制备水解明胶,初步探讨了用酶的组合技术制备小分子量及窄分布水解明胶的可能性。结果表明,酶的不同组合方式是调节产物分子量及分布的极有效手段,菠萝蛋白酶和AS1.398中性蛋白酶组合的先后次序,可以调节产物的分子量,两者以混合方式组合,则可以调节产物的分子量分布。

花生DNA分子标记的研究 Ⅲ不同限制酶组合AFLP分析效果比较

采用了28对EcoR I/Mse I AFLP选择性扩增引物、64对Pst I/Taq I AFLP选择性扩增引物,对 作图亲本24-3、B4及其杂种F1进行了分析,统计了两种限制酶组合的扩增总带数、多态性带数及多 态性率。秩和检验结果说明,两种限制酶组合AFLP每对引物扩增出的总带数无显著差异,而多态性条 带数目以及多态性率均有极显著的差异。证明尝试不同的限制酶组合可望揭示出花生品系材料间更 为丰富的遗传变异性。

适合反刍动物日粮类型多酶组合配方的研究

该试验针对适合在内蒙古地区较常用反刍动物日粮类型(玉米、豆粕、青干草、玉米青贮),利用体外试验筛选出了多酶组合配方和最佳添加量,通过体内试验比较了2种添加方法。结果为:复合酶的合理的组合为酶Ⅰ∶酶Ⅱ∶酶Ⅲ∶酶Ⅳ=水平1∶水平2∶水平2∶水平1;适合添加量为0.1%和0.2%,从成本核算考虑应是0.1%;从绵羊增重效果看,复合酶添加方法为喷洒在粗饲料中优于直接添加在精料中。

犬海水中火器伤伤后早期血液心肌酶组合的研究

目的观察海水中火器伤早期血液心肌酶组合变化,为早期救治方案拟定提供科学依据。方法将17只普通级毕格犬分为海水中致伤组(n=14)和地面致伤组(n=3);海水组于海水中枪伤后救出,(33.75±25.29)min经中心静脉测压管采血测试丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和淀粉酶(AMY),分析其致伤前后的变化。地面组同海水组。结果海水中火器伤伤后与实验前相比AMY、CK-MB和LDH(P<0.01)、CK(P<0.05)升高有非常显著性差异,AST、ALT和S/L虽无显著性差异(P>0.05),但AST和ALT均有上升趋势。火器伤伤后海水组与地面组相比AMY(P<0.05)增高有显著性差异,CK、CK-MB、LDH、AST和ALT虽无显著性(P>0.05),但CK、CK-MB、LDH、AST及ALT均有上升趋势。结论海水中枪击伤呼吸功能、心脏、肝脏和肾功能均有不同程度的损害,在处理原发伤道损伤同时应该对机体的整体状态和伤道外的损伤作出及时诊断和治疗。

不同外源酶组合对棕榈粕原料体外养分消化率和酶水解物能值的影响

本试验旨在利用单胃动物仿生消化系统(SDS-Ⅱ)探究不同外源酶组合对棕榈粕原料体外干物质消化率(IVDMD)、体外粗蛋白质消化率(IVCPD)、体外能量消化率(IVGED)和酶水解物能值(EHGE)的影响,以评价不同来源棕榈粕[马来西亚棕榈粕(MPK)和菲律宾棕榈粕(PPK)]的营养价值并筛选对应的最优外源酶组合。试验1采用2×3因子设计,设6个组,即分别以不添加外源酶的PPK和MPK原料作为对照组,以及分别向PPK原料中添加酶包-A(EP-A)、酶包-B(EP-B)和分别向MPK原料中添加EP-A、EP-B作为试验组。利用SDS-Ⅱ模拟猪全消化道消化过程,测定各组的IVDMD、IVCPD、IVGED和EHGE。试验2采用单因素完全随机设计,设5个组(EP0、EP1、EP2、EP3和EP4组),以不添加外源酶的EP0组为对照组,试验组分别在MPK原料中添加不同的外源酶组合,分别测定各组的IVDMD、IVCPD、IVGED和EHGE,以筛选最优外源酶组合。2个试验中每个样品均设5个重复,每个重复设1根消化管。结果显示:1)PPK的IVDMD、IVCPD、IVGED均显著高于MPK(P<0.05),PPK的EHGE与MPK相比无显著差异(P>0.05)。2)添加外源酶组合EP-A和EP-B均能显著提高MPK和PPK的IVGED和EHGE(P<0.05),添加外源酶组合EP-A和EP-B均能显著提高MPK的IVCPD(P<0.05),添加外源酶组合EP-B能显著提高MPK和PPK的IVDMD(P<0.05)。3)添加不同外源酶组合均能显著提高MPK的IVDMD、IVCPD、IVGED和EHGE(P<0.05),且EP4组的IVDMD、IVGED和EHGE显著高于EP1、EP2和EP3组(P<0.05)。由此可见,PPK的IVDMD、IVCPD、IVGED均高于MPK,为更加优质的棕榈粕来源;添加外源酶组合EP-A和EP-B均可提高2种来源棕榈粕的IVDMD、IVCPD、IVGED和EHGE,且EP-B效果更佳;EP4组的外源酶组合为酶解MPK的最优组合。

多酶组合催化制备L-高苯丙氨酸

【目的】L-高苯丙氨酸(L-HPA)是许多医药化学品的重要中间体,化学合成法生产L-HPA反应复杂、环境污染严重,本研究旨在开发高效环保的L-HPA酶法合成路线。【方法】采用模块化组装的方法,构建了一条以甘氨酸和苯乙醛为底物高产L-HPA的新途径。【结果】首先,根据文献挖掘设计了一条由苏氨酸醛缩酶(TA)、苏氨酸脱氨酶(TD)、苯丙氨酸脱氢酶(PheDH)和甲酸脱氢酶(FDH)组成的多酶组合催化途径,用于L-HPA的合成。其次,根据氨基基团的引入和重构,将L-HPA多酶组合催化途径分为基础单元和扩增单元,基础单元包括TA和TD,扩增单元包括PheDH和FDH。然后,利用不同表达水平的质粒,对基础单元和扩增单元进行蛋白表达的组合调节,获得最优工程菌BL21-C-M1-R-M2,使L-HPA产量达到208.6 mg/L。最后,我们对全细胞转化体系进行优化,使L-HPA产量进一步提高到1226.6 mg/L,苯乙醛摩尔转化率为34.2%。【结论】该工艺路线绿色高效,为未来大规模生产L-HPA奠定基础。

组合酶水解鸡骨素工艺研究与水解液风味分析

本文用木瓜蛋白酶和风味蛋白酶进行组合,以得到组合酶水解鸡骨素的最佳工艺。首先通过正交实验确定同时加酶时风味蛋白酶和木瓜蛋白酶的适宜加酶量和水解温度,然后研究在适宜条件下,风味蛋白酶和木瓜蛋白酶的不同添加方式对鸡骨素水解效果的影响。结果表明:在料液比1∶3、温度40℃、pH值7.0的条件下先加1500U.g-1的木瓜蛋白酶水解2 h,灭酶后再加1200 U.g-1的风味蛋白酶水解2 h得到的鸡骨素水解液的水解度最高为28.8%,氮回收率为79.37%,蛋白表面疏水性指数最低。通过固相微萃取气象色谱质谱法(SPME-GC-MS)对水解液挥发性物质进行分析共检测出26种挥发性物质,吡嗪类含量最高达到41.94%,其中主要的风味物质为2,3,5-三甲基吡嗪(24.01%)和2,5-二甲基吡嗪(14.59%),醇类次之含量为21.83%,烃类含量18.09%,还有少量的醛类、酮、酚等。

饲料酶制剂理论与实践的新思路——新型高效饲料组合酶的原理和应用

饲料组合酶是专门针对酶制催化的高效问题而提出,它与一般的复合酶不同。应用饲料组合酶可以降低饲料酶制剂的使用成本,对提高非常规饲料原料的利用效率和开发特种动物专用的酶制剂有重要意义。

比较机械分离法和组合酶消化法分离大鼠生精细胞的差异

目的:采用机械分离法和组合酶消化法分离大鼠生精细胞,比较两者在细胞数量、细胞纯度及存活率等方面的优劣。方法:实验于2007-03/05在广东省人民医院医学研究中心进行。分别采用机械分离法和组合酶消化法分离成年SD大鼠睾丸生精细胞,即机械分离法采用锐性分离结合筛网过滤,依次将间质细胞、血细胞剔除,经过滤筛选后,获得较为纯净的生精细胞,最后经差速贴壁法获得纯度较高的生精细胞。组合酶消化法采用胶原酶和胰酶消化相结合的方法,首先用胶原酶Ⅳ将间质细胞分离出来,经胰酶消化后获得单细胞的生精细胞悬液。分析比较两者所得细胞总数及细胞纯度的差异,并检测分离培养前后细胞存活率的变化。结果:组合酶消化法分离的生精细胞数量与机械分离法相当,两者比较差异无显著性意义(P>0.05)。但机械分离法所得生精细胞的纯度高于组合酶消化法,并且分离培养前后细胞存活率也明显高于组合酶消化法,两两比较差异均有显著性意义(P<0.05)机械分离法所得生精细胞悬液中以支持细胞混杂为主,而组合酶消化法则混杂较多支持细胞和间质细胞。结论:机械分离法分离生精细胞纯度高、细胞存活率高及费用低,是一种简单、经济、有效的生精细胞分离方法。

栽培种花生ddGBS测序中酶切组合的选择

花生全基因组水平生物信息的挖掘是研究花生种质遗传资源的前提。基于已公布的两个栽培种花生的祖先二倍体(Arachis duranensis和A.ipaensis)的全基因组序列,根据双酶切GBS(Double digest Genotyping-by Sequencing,ddGBS)测序特点,通过SacⅠ和Mse Ⅰ、PstⅠ和Msp Ⅰ、EcoR Ⅰ和NIaⅢ的电子酶切结果,统计和对比三组酶切片段的均匀度和覆盖度,筛选得到ddGBS测序片段所需的最佳酶切组合EcoR Ⅰ和NIaⅢ,并进一步揭示了其酶切片段在染色体水平及全基因组水平的分布情况,确保该酶切组合在后续基因组信息挖掘中的可行性,为全基因组层水平上遗传资源的揭示奠定基础。

组合型木聚糖酶对21日龄黄羽肉鸡器官指数、内源消化酶活性以及肠道吸收功能的影响

通过对21日龄黄羽肉鸡器官指数和胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶以及血清中木糖水平进行检测,研究酶制剂对动物内脏器官所产生的影响,以及组合酶和单酶之间的差异。木聚糖酶在小麦型日粮中添加,降低了肝脏、肌胃、腺胃、十二指肠、空肠和回肠的器官指数,增加了胰腺的器官指数;降低了胃蛋白酶和胰蛋白酶的分泌水平;组合酶比单酶降低小肠器官指数更明显,单酶增加了胰脂肪酶的分泌水平,组合酶降低了胰脂肪酶的分泌水平,差异不显著(P>0.05)。小麦型日粮饲喂组血清中木糖的水平高于玉米型日粮组和加酶组,酶制剂的添加降低了血液中的木糖水平,各处理组之间差异不显著(P>0.05)。

组合酶改善菜籽粕营养品质效果的研究

以菜籽粕为原料,采用已筛选出的组合酶酶解菜籽粕,设置不同水分梯度和酶添加量,在37℃下酶解24 h,以酸溶蛋白质、无机磷、粗纤维含量和体外消化率为指标对组合酶作用进行评定,水分添加量15%和组合酶添加量0.05%酶解24 h达到较好改善菜籽粕营养品质的效果。

组合酶催化体系产氢气的研究进展

氢是一种燃烧值高无污染的燃料。无细胞组合酶催化体系是以碳水化合物和水为底物,通过13种酶协同催化,生成2种产物:氢气和二氧化碳。该体系理论上1mol葡萄糖可生成12mol氢气,是微生物厌氧发酵的3倍。该文介绍了无细胞组合酶催化体系的发展历程、组成酶的特征、酶催化的步骤,最后对该体系优缺点和工业化应用进行了探讨。

不同酶液组合对椪柑原生质体分离的影响

以椪柑愈伤组织和试管苗叶片为试验材料,采用纤维素酶R-10+离析酶R-10的酶液组合Ⅰ和纤维素酶Worthington+离析酶R-10的酶液组合Ⅱ进行原生质体的分离,比较这2种酶液组合对原生质体的酶解时间、产量及活性氧含量的影响。结果表明,酶液组合Ⅱ所需的酶解时间均短于酶液组合Ⅰ;酶液组合Ⅱ所获得的原生质体产量均高于酶液组合Ⅰ,在愈伤组织中前者产量是后者的9. 09倍,在叶片中前者产量是后者的5. 29倍,差异显著;酶液组合Ⅰ的愈伤组织原生质体的活性氧水平是酶液组合Ⅱ的1. 96倍,且差异显著,而对于叶肉原生质体,2种酶液组合之间的差异不显著。因此可见,酶液组合Ⅱ更适合用于椪柑原生质体的分离。

组合酶对复合骨素酶解液呈味物质的影响

为探究组合酶对牛骨素和鸡骨素的复合骨素酶解液呈味物质的影响,选取四种组合酶(木瓜蛋白酶+风味蛋白酶、菠萝蛋白酶+风味蛋白酶、碱性蛋白酶+风味蛋白酶、复合蛋白酶+风味蛋白酶)制备复合骨素酶解液,测定四种复合骨素酶解液的水解度、游离氨基酸、呈味核苷酸、味精当量(Equivalent umami concentration,EUC)、肽分子量分布等呈味物质指标,并进行对比分析。结果表明:碱性蛋白酶+风味蛋白酶(Alkaline proteinase+Flavourzyme,A+F)和复合蛋白酶+风味蛋白酶(Protamex+Flavourzyme,P+F)酶解液的水解度最大,分别为10.67%和11.27%;对呈味游离氨基酸组成分析发现,A+F酶解液鲜味氨基酸、苦味氨基酸、无味氨基酸含量最高,A+F和P+F酶解液总游离氨基酸含量最高;四种酶解液中肌苷酸较另两种核苷酸含量高,A+F酶解液总核苷酸含量最高;比较四种酶解液味精当量,A+F酶解液EUC值最大;A+F和P+F酶解液中分子量<1000 Da肽段含量最高,制备复合骨素酶解液的呈味效果更好;主成分分析表明A+F组合酶综合得分最高,A+F组合酶为美拉德反应提供丰富反应底物。

不同载体组合酶制剂对不同日龄断奶仔猪生长性能和经济效益的影响

试验旨在研究不同载体组合酶制剂对不同日龄断奶仔猪生长性能和经济效益的影响,并对其作用机理进行初步探讨。试验分别选用(36±1)日龄和(40±1)日龄断奶的三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪进行试验。试验分3组,对照组饲喂基础日粮;试验组Ⅰ为普通载体组合酶组,在基础日粮的基础上添加普通载体组合酶500 g/t;试验组Ⅱ为发酵载体组合酶组,在基础日粮的基础上添加发酵载体组合酶500 g/t。试验期为19 d。试验结果表明:生长性能与对照组相比,(36±1)日龄,试验组Ⅰ和试验组Ⅱ在日增重方面分别比对照组提高了11.7%和21.0%,日采食量方面分别比对照组降低了13.8%和5.2%,料肉比方面分别比对照组降低了23.1%和22.1%;(40±1)日龄,试验组Ⅰ和试验组Ⅱ在日增重方面分别比对照组提高19.9%和20.3%,日采食量方面分别比对照组提高了1.3%和7.6%,料肉比方面分别比对照组降低了15.6%和10.8%。经济效益与对照组相比,(36±1)日龄试验组Ⅰ和试验组Ⅱ分别比对照组每头增加毛利12.35元和12.84元,(40±1)日龄试验组Ⅰ和试验组Ⅱ分别比对照组每头增加毛利12.58元和9.20元。不同载体组合酶对不同日龄断奶仔猪的影响方面,试验结果表明,发酵载体组合酶对断奶仔猪使用越早,经济效益越明显。

组合酶与益生菌协同作用对乳仔猪生长性能的影响

本文研究了组合型酶制剂与益生菌对乳仔猪生产性能和腹泻的影响。试验采用28日龄杜长大断奶仔猪96头，分为3个处理，每处理4个重复，每重复8头猪。处理1组为对照组，处理2组为组合酶（0．01％）对照组，处理3组为试验组，即添加0．01％组合酶与0．02％益生茵产品（以国产乳酸菌与酵母菌为主）。结果表明：试验组平均日增重显著高于对照组，料肉比提高6．67％，腹泻率降低79．1％，试验组与加酶组相比料肉比降低1．41％，腹泻率降低37．5％。

组合酶水解鸡骨架蛋白的工艺条件研究

为了研究鸡骨架蛋白的酶解工艺条件,研究了酶种类组成及酶解工艺对鸡骨架蛋白水解度和风味的影响。结果表明,复合蛋白酶和风味蛋白酶的最佳组合比例为1∶3;组合酶的最佳酶解工艺条件为:反应时间4 h,酶用量0.5%,pH值6.0～7.5,反应温度55℃,得到鸡骨架的水解度为27.12%。

不同载体组合酶制剂对不同日龄断奶仔猪生长性能和经济效益的影响

本试验旨在研究不同载体组合酶制剂对不同日龄断奶仔猪生长性能和经济效益的影响，并对其作用机理进行初步探讨。试验分别选用36．4-1日龄和40±1日龄断奶的三元杂交（杜×长×大）断奶仔猪进行试验。试验分3组，对照组饲喂基础日粮；试验组Ⅰ为普通载体组合酶组，在基础日粮的基础上添加普通载体组合酶500g／t；试验组Ⅱ为发酵载体组合酶组，在基础日粮的基础上添加发酵载体组合酶500g／t。试验期为19天。试验结果表明：1．生长性能与对照组相比，（1）36±1日龄，试验组Ⅰ和试验组Ⅱ在日增重方面分别比对照组提高11．7％和17．3％，日采食量方面分别比对照组降低了13．8％和5．2％，料肉比方面分别比对照组降低了23．1％和22．1％；（2）40±1日龄，试验组Ⅰ和试验组Ⅱ在日增重方面分别比对照组提高19．9％和20．3％，日采食量方面分别比对照组提高了1．3％和7．6％，料肉比方面分别比对照组降低了15．6％和10．8％。2．经济效益与对照组相比，36±1日龄试验组Ⅰ和试验组Ⅱ分别比对照组每头增加毛利12．35元和12．84元，40±1日龄试验组Ⅰ和试验组Ⅱ分别比对照组每头增加毛利12．58元和9．2元。3．不同载体组合酶对不同日龄断奶仔猪的影响方面，试验表明发酵载体组合酶对断奶仔猪使用越早，经济效益越明显。