酶联免疫吸咐试验(ELISA)常见问题的原因分析与处理

酶联免疫吸咐试验（ELISA）具有灵敏度高、特异性好的特点，广泛应用于各种传染性疾病的筛查，如肝炎、HIV，也可应用优生优育等。优质的试剂、良好的仪器和正确的操作是保证ELISA实验结果准确、可靠的必要条件。试验中若不做好相关控制，易出现白板、花板、色弱和假阳性等现象。尤其足花板现象（空白、阴性、阳性对照以及室内质控孔结果正常，而标本孔的OD值却明显偏高）是各级临床实验室常遇到的问题。现将ELISA实验操作中的影响因素总结如下：

酶联免疫吸附试验一步法与二步法在HIV初筛中的应用比较

目的:通过对酶联免疫吸咐试验(ELISA)双抗原夹心一步法和二步法检测人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的比较,探讨各自特点。方法:对51 230份标本,用双抗原夹心ELISA一步法和二步法试剂双盲检测,初筛阳性标本送广东省艾滋病检测确证中心实验室,采用免疫印迹法进行确证。结果:检测51 230份标本,一步法初筛阳性98例,确证阳性4例,假阳性率0.18%;二步法初筛阳性27例,确证阳性4例,假阳性率0.05%,两法的假阳性率比较有显著性差异(P<0.01)。结论:ELISA二步法检测HIV抗体的综合效果优于一步法,更适合于HIV检测的初筛试验。

酶联免疫吸附试验两步法在HIV抗体检测中的应用

目的探讨酶联免疫吸咐试验(ELISA)双抗原夹心一步法和二步法检测人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的不同效果。方法采集2005年10月～2008年10月本市中心血站无偿献血者血液标本48463例,用双抗原夹心ELISA一步法和二步法试剂检测,初筛阳性标本,采用免疫印迹法进行确证。结果检测48463份标本,一步法初筛阳性87例,确证阳性4例,假阳性率0.17%;二步法初筛阳性24例,确证阳性4例,假阳性率0.05%,两法的假阳性率比较有显著性差异(P<0.01)。结论酶联免疫吸咐试验二步法检测人类免疫缺陷病毒抗体的效果优于一步法,更适合于人类免疫缺陷病毒检测的初筛试验。

一种化学发光酶免疫分析法检测梅毒特异性抗体结果的正确解读

目的研究如何对化学发光酶免疫分析法梅毒抗体检测(TP-CLEIA)筛查梅毒特异性抗体为阳性的检测结果进行正确的解读。方法对100例使用TP-CLEIA筛查阳性的标本,在用免疫印迹法梅毒抗体检测(TP-WB)确认的同时,采用梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、微粒子化学发光法梅毒抗体检测(TP-CMIA)及ELISA法梅毒抗体检测(TP-ELISA)同时测定,对试验结果作了进一步分析。结果 (1)以TP-WB法为准,TP-CLEIA法筛查为阳性的标本中,真阳性的比例为48.0%。(2)受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析显示,最佳临界值为25.92,此时的阳性预测值为97.7%,阴性预测值89.5%,此时具有最大的ROC曲线下面积;当TP-CLEIA法S/CO<7.84时,经梅毒确认试验被证实为阴性的概率为100.0%;当S/CO>49.77时,梅毒确认试验被证实为阴性的概率为100.0%。(3)对以TP-CLEIA法筛查为阳性,再用TP-CMIA复核为阳性的标本中,其真阳性的比例为81.3%,而无漏检的情况发生。结论 TP-CLEIA作为梅毒的筛查方法,存在较高的筛查假阳性率,尤其是S/CO水平较低时。对TP-CLEIA法筛查为阳性的标本,TP-CMIA法是较为理想的复核方法。

RPR和TP-ELISA、TPHA三种试验方法检测梅毒抗体的比较

目的探讨快速血浆反应素试验(RPR)、酶联免疫吸咐试验(TP-ELISA)和血球凝集试验(TPHA)三种试验方法在梅毒检测中的应用价值。方法经TP-ELISA检测阳性108份同时采用RPR,TPHA法进行检测分析,并对三种试验方法进行比较分析。结果108份TP-ELISA阳性病例经TPHA确认阳性率98.1%,两法的灵敏度与特异性相当接近,无显著性差异(P>0.05),RPR法阳性率64.8%,TPHA、TP-ELISA法与RPR法有显著性差异(P<0.05)。结论TP-ELISA是检测梅毒螺旋体抗体操作简便,成本低,易推广的检测方法,RPR法可作为观察疗效,判断复发检测方法。

ELISA预包被板条室内预检方法的建立及初步应用

目的建立一种快速预检ELISA预包被板条的实验室方法。方法利用现代优质酶联免疫检测仪的基础酶联软件对预包被板条基础空白比色,并与以预包被板条模拟未包被板条批检的标准方法(参考方法)进行比较。结果模拟前后,总体方差齐(F检验P>0.05,a=0.05),相应的行预检与模拟A平均值的离均差与行模拟净显色A平均值的离均差均无显著性差异(配对计量资料比较t检验:P>0.05,a=0.05)。结论利用基础酶联软件直接预检预包被板条是简便实用的,具有评价预包被板条质量和选板设置数据复核的双重功效;试剂生产单位或厂家也可以对预包被板条二次批检。

IgA抗β2-GPI与反复自然流产的关系

目的检测反复自然流产（RSA）患者血清IgA抗β2-GPI水平，探讨IgA抗β2-GPI与反复自然流产的关系。方法将2011年1月～11月来甘肃省妇幼保健院生殖免疫中心就诊的102例反复自然流产患者，按发生自然流产的时间分为早期流产组（孕周〈12w）57例，晚期流产组（孕周≥12w）45例，另将36例已生育健康妇女作为对照组，采用酶联免疫吸附法检测血清中IgA抗β2-GPI水平。结果早期流产组IgA抗β2-GPI阳性21例，阳性率36．8％；晚期流产组IgA抗β2-GPI阳性16例，阳性率35．6％，对照组IgA抗β2-GPI阳性3例，阳性率8．3％。与对照组比较，早期流产组、晚期流产组IgA抗β2-GPI抗体阳性率均显著高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；早期流产组与晚期流产组IgA抗β2-GPI抗体阳性率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IgA抗β2-GPI抗体可能与反复自然流产有关，IgA抗β2-GPI抗体可作为RSA免疫因素的辅助诊断指标。

体液中胃癌相关抗原的测定及临床应用

我们应用自行研制的鼠抗人单克隆抗体GMG 1:1D1—2建立了胃癌相关抗原(GCAA)的酶联免疫吸咐试验测定法,对134例正常人及140例各类患者进行了血清及胃液中GCAA测定。结果表明健康对照组血清GCAA光密度值(OD)为0.58±0.26,以其平均值+2标准差的OD值为正常高限,则GCAA在各类胃病中的阳性率分别为:慢性浅表性胃炎(8.8％),慢性萎缩性胃炎(20％),胃溃疡(12％),胃癌(37.9％)。胃癌患者血清中GCAA的OD值明显高于正常对照组,但阳性率仍偏低。而胃癌患者胃液中GCAA的阳性率可高达61.1％,明显大于血清中GCAA的阳性率。胃液中CEA的水平与GCAA呈一致变化。如果同时检测胃液中GCAA与CEA的含量,则可使胃癌的阳性诊断率达到77.8％。

三种梅毒血清学检测方法比较与评价

目的比较常用的三种梅毒血清学试验方法的特异性、敏感性,为临床诊断与治疗提供参考。方法应用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)三种梅毒血清检测方法,对梅毒患者的血清58份和非梅毒患者的血清2282份进行检测。结果共检测标本2340份,其中经流行病学等方法确诊的梅毒患者58例,占2.47%,非梅毒患者2282例,占97.53%。TP-ELISA、TPPA、TRUST特异性和灵敏性分别为99.8%,98.6%,99.2%和100%,96.55%,84.48%。结论选用3种不同方法平行进行梅毒检测,将减少漏诊、误诊率,在梅毒的确诊、预后及药物疗效方面都具有十分重要的意义。

梅毒抗体血清学检测方法比较与评价

目的:比较梅毒血清学检测方法的特异性、敏感性,推荐目前临床实验室对梅毒性病的最佳检测方法。方法:本文采用TRUST、TP-ElisA、TPPA3种方法。结果:TP-ElisA法敏感性高、特异性强,适用于正在或曾经感染过梅毒的检测,适用于血站对献血员的筛选,但不适用于梅毒疗效观察;而TRUST敏感性低、特异性差,但适用于梅毒病人疗效观察。结论目前实验室的梅毒诊断采用TP-ElisA与TRUST组合最佳。

乙型肝炎病毒DNA实时荧光定量PCR检测在临床诊断中的价值

目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBV-DNA含量的方法,探讨其在乙型肝炎预防、诊断、治疗及判断病情等方面的临床应用价值。方法将临床样本分为3组,同时进行ELISA法与PCR检测HBV-DNA含量水平的测定。第1组为HBsAg(阳性)、HBeAg(阳性)、抗-HBc(阳性)的患者。第2组为HBsAg(阳性)、抗-HBe(阳性)、抗-HBc(阳性)的患者,第3组为HBsAg(阳性)、抗-HBc(阳性)的患者,组与组之间进行阳性率及HBV-DNA含量的t检验。结果 228例临床样本的检测结果显示,第1组患者HBV-DNA阳性率为100%,显著高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.01)。HBV-DNA平均含量为7.53×108copy/mL。第2组患者HBV-DNA阳性率低于第1组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),但平均HBV-DNA含量为9.58×107copy/mL,与第1组比较差异无统计学意义(P>0.05)。第3组患者HBV-DNA阳性率为51.8%,与第1组比较差异有统计学意义(P<0.01),但与第2组比较差异无统计学意义(P>0.05),患者的HBV-DNA含量为7.74×107copy/mL,与第1、2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量PCR所测HBV-DNA含量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,对抗病毒药物的选择和判断疾病的预后有一定的临床价值。

门诊病人乙型肝炎五项指标调查

目的 了解替江市门诊病人乙肝感染情况，为合理治疗病人提供参考。方法 应用酶联免疫吸咐试验（ＥＬＩＳＡ）法。结果 受检人数３１４０人，男性 １８３０，女性 １３１０。共检出 ＨＢｓＡｇ阳性７７０人，阳性率２４．５％，其中男性５００，占男性人数的２７．３％，女性２７０人，占女性总人数的２０．６％。男女之间有显著性差异（ｐ＜０．０５）。在７７０例乙肝阳性患者中，ＨｂｓＡｇ、ＨｂｅＡｇ抗－ＨＢｃ均阳性者有 １８０例，结论 乙型肝炎是一种危险而有传染性的疾病，有关部门应做好防治工作，对 ＨＢｓＡｇ阴性者进行乙肝疫苗接种，提高免疫力，而乙肝感染患者则应接受合理治疗，以降低传染性。

出口鳗鱼及制品中口恶喹酸的ELISA快速检测方法的研究

应用混合酸酐法将口恶喹酸与载体蛋白偶联制备人工合成抗原,并以此为免疫原,免疫家兔获得特异性抗血清,经间接ELISA测定其终点滴度>1∶163840。抑制试验表明其检测范围在3125μg/g～3005ng/g之间,可用于出口鳗鱼中口恶喹酸的定量检测。该检测方法与液相色谱法检测结果符合率652%～9215%,平均为817%,回收试验平均回收率为915%。

梅毒血清学检测方法比较及临床应用探讨

目的:比较梅毒血清学检测方法的特异性、敏感性,推荐目前临床实验室对梅性的最佳检测方法。方法:采用TRUST、TP-ElisA、TPPA三种方法。结果:TP-ElisA法敏感性高、特异性强,适用于正在或曾经感染过梅毒的检测,适用于血站对献血员的筛选,但不适用于梅毒疗效观察;而TRRUST敏感性低、特异性差,但适用于梅毒病人疗效观察。结论:目前实验室的梅毒诊断采用TP-ElisA与TRUST组合最佳。