酶联免疫吸附剂测定法考察丹参滴注液去除蛋白工艺的研究

目的研究丹参滴注液去除蛋白工艺,考察工艺的合理性。方法采用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA法),以丹参蛋白为检测指标研究丹参滴注液制备工艺中去除蛋白的效果。结果丹参提取药液经醇沉及超滤工艺后含蛋白量大大降低,低于检测限。结论醇沉和超滤工艺可有效去除丹参滴注液中的蛋白,保证制剂安全。

化学发光法和酶联免疫吸附剂测定在乙肝病毒血清学检测中的效果分析

目的评价化学发光法及酶联免疫吸附剂测定在乙型肝炎(乙肝)病毒血清学检测中的效果。方法 200例疑似乙肝患者,采用随机数字表法分为试验组和对照组,每组100例。试验组患者采取化学发光法检测,对照组患者采取酶联免疫吸附剂测定检测。比较两组乙肝表面抗原(HBsAg)检测阳性情况。结果试验组HBsAg检测阳性率为83.00%,高于对照组的57.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在乙肝病毒血清学检测中采用化学发光法的效果优于酶联免疫吸附剂测定, HBsAg检测阳性率更高,灵敏性更优。

贝母素甲改善脂多糖联合烟雾诱导小鼠慢性阻塞性肺疾病的机制

目的探讨贝母素甲(PME)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠的作用和相关机制。方法将80只小鼠随机分为4组(每组20只):对照组、PME组、COPD组和治疗组。使用脂多糖联合烟雾诱导小鼠COPD动物模型。通过组织病理学、超微结构、小鼠肺组织湿/干重比值分析PME对COPD模型鼠结构的影响;ELISA和Western blotting分析PME对肺组织中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β表达的影响;二氢乙锭(DHE)染色和Western blotting分析PME对肺组织中氧化应激反应的影响;Western blotting分析PME对核因子κB(NF-κB)通路以及核因子2相关因子2(Nrf2)通路相关蛋白表达的影响。结果与COPD组相比,PME治疗可明显减轻小鼠肺组织的损伤和减少炎症细胞数量,降低肺组织湿/干重比。与对照组相比,COPD组小鼠的肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6及IL-1β水平明显增加,经PME治疗后小鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6及IL-1β水平明显降低。另外,与对照组相比,COPD组小鼠肺组织中TNF-α和IL-1β水平显著升高,经PME治疗后小鼠肺组织中TNF-α和IL-1β蛋白水平明显下降。免疫组织化学和Western blotting实验显示,与对照组相比,COPD组SOD2水平明显降低,而PME治疗后能够提高超氧化物歧化酶(SOD)蛋白水平。对肺组织丙二醛(MDA)含量分析发现,与COPD组比较,PME治疗后明显抑制COPD小鼠肺组织中MDA的产生。Western blotting结果显示,PME治疗后能够阻止肺组织中的NF-κB抑制蛋白(IκBα)磷酸化以及NF-κB p65向细胞核转移,PME处理后的小鼠肺组织中Nrf2及其主要下游靶点血红素加氧酶1(HO-1)的表达明显升高。结论PME能够抑制COPD小鼠体内的炎症和氧化应激反应,改善脂多糖联合烟雾诱导肺组织损伤,其机制可能与激活Nrf2通路和抑制NF-κB通路相关。

酶免疫测定进展

1971年瑞典斯德哥尔摩大学的Engvall和Perlmann与荷兰Organon Tecknika公司的van Weemen和Schuurs分别发表了首创的以酶作为标记物的免疫测定（enzyme immunoassay，EIA）：瑞典学者称之为“酶联免疫吸附剂测定”（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），因为测定中应用了固相吸附剂以便于分离“游离的”和“结合的”酶结合物。1974年Voller等在《世界卫生组织公报》上发表了以实验室中通用的8×12孔塑料微量滴定板（简称微板）为同相的ELISA方法检测血清中疟疾抗体的报告等，展示了ELISA在医学检验中广阔的应用前景。

ELISA法检测Zeta链联合血红蛋白电泳对地中海贫血筛查的价值

目的探索适用于农村地中海贫血(thalassemia,地贫)的筛查模式。方法对南宁市郊农村750对育龄夫妇行血常规检测,平均红细胞体积(mean cell volume,MCV)下降者定义为地贫表型阳性。夫妇一方或双方地贫表型阳性者联合酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测Zeta链和国产电泳仪行血红蛋白电泳,与地贫基因结果进行比对。结果 750对育龄夫妇中,261对(34.8%)夫妇任一方地贫表型阳性,接受Zeta链和血红蛋白电泳检测。97对夫妇一方HbA2增高者行β地贫基因检测,检出4对(0.41%)β地贫高危夫妇,即夫妻双方均携带β地贫基因,电泳结果与基因检测结果一致。α地贫基因检测结果表明,119例(22.7%)受试者携带--SEA。Zeta链诊断--SEA的漏诊率为5.9%(7例,其中5例为HbH病患者),误诊率为0.5%(2例)。以夫妇双方任一方Zeta阳性为标准,11对α地贫高危夫妇均可筛查出。结论ELISA法检测Zeta链联合血红蛋白电泳法是一种有效、经济、方便、易于在农村地区应用的地贫筛查模式。

两种血清循环免疫复合物测定方法的比较

目的 对测定血清循环免疫复合物 ( circulating immune complexes,CIC)的两种方法 ( PEG沉淀法及 CIC-C1 q ELISA法 )进行评价 ,进一步探讨 CIC测定的临床意义。方法 采用 PEG沉淀法和 CIC-C1 q ELISA法检测肾脏损害、系统性红斑狼疮 ( SLE)、类风湿性关节炎 ( RA)等 86例患者的血清 CIC。结果 86例患者中 PEG沉淀法检测阳性 1 7例 ( 1 9.77% ) ,CIC-C1 q ELISA法检测阳性 3 8例 ( 4 4.1 9% ) ,差异有显著性 ( P<0 .0 5 )。CIC-C1 q ELISA法检测 SLE、RA和肾脏损害患者的 CIC阳性率分别为 1 1 /1 5、5 /8和 2 0 /61 ( 3 2 .79% )。结论 与 PEG沉淀法相比 ,CIC-C1 q ELISA法较敏感 ,适宜于临床推广应用。CIC的阳性与 SLE、RA和肾脏损害有关。

血管内皮生长因子在NSCLC卡铂联合紫杉醇化疗中检测的临床价值研究

目的:深入研究血管内皮生长因子(VEGF)在NSCLC卡铂联合紫杉醇化疗检测中的临床应用价值。方法:将我院2011年1月至2012年5月肿瘤科收治的150例NSCLC患者按照VEGF水平分为两组,A组(75例)和B组(75例),两组患者均接受卡铂联合紫杉醇的化疗,并分析两组患者血浆中VEGF水平对NSCLC的预后影响,以及与患者生存率之间存在的关系。结果:NSCLC患者在治疗前血浆中VEGF的基线水平越高,患者预后越不好,生存率越低;VEGF的基线水平可以预测患者的预后。NSCLC患者一线化疗方案卡铂联合紫杉醇治疗两个疗程后,VEGF水平降低,且VEGF水平较低患者的VEGF水平降低更为明显。因此,VEGF可以看做检测化疗有效的标志物。结论:VEGF在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用,与传统的肿瘤标记物不同,外周循环中的VEGF可被看作是血管生成的标记物。

FA280S全自动粪便分析仪对早期华支睾吸虫病检测效果对比分析

分析FA280S全自动粪便分析仪、醛醚离心沉淀法(Aldehyde Ether Centrifugal Precipitation, AECP)、酶联免疫吸附试验法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)对早期华支睾吸虫病的检测效果。选择广州市红十字会医院139例疑似华支睾吸虫感染患者,分别采用FA280S全自动粪便分析仪,醛醚离心沉淀及ELISA法检测,比较3种方法的检测效果。结果显示FA280S全自动粪便分析仪检测华支睾吸虫阳性率为87.8%,醛醚离心沉淀法为76.3%,ELISA法为78.4%,FA280S全自动粪便分析仪检测华支睾吸虫的阳性率高于醛醚离心沉淀法(P 0.05)。因此在华支睾吸虫病的检测中,FA280S全自动粪便分析仪优于醛醚离心沉淀法及ELISA法,可作为诊断早期华支睾吸虫病的主要方法。

肾气丸“阴中求阳”配伍对肾阳虚大鼠细胞因子含量的影响

目的用各拆方肾气丸灌胃肾阳虚大鼠,测定灌胃后各组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,分析肾气丸"阴中求阳"的配伍治疗肾阳虚证的机理。方法以氢化可的松25 mg/(kg.d)注射大鼠,连续12 d,同时以各肾气丸拆方组水煎液灌胃,于灌胃第21天,麻醉大鼠,心脏取血,离心取上清液,用ELISA法检测大鼠血清中IL-1β,IL-2,IFN-γ,TNF-α的含量。结果与正常组比较,模型组IL-1β、IL-2的含量降低,经灌胃后,各拆方组大鼠血浆中二者的含量均有不同程度增加,其中阴阳双补2组含量高于补阳2组,阴阳双补1组含量高于补阳1组,且阴阳双补1组中IL-1β含量高于补阴1组,具有统计学意义。与正常组比较,模型组大鼠血浆中IFN-γ、TNF-α的含量降低,经灌胃后,各拆方组大鼠血浆中二者含量均有不同程度的增加,但增加并不显著。结论肾气丸"阴中求阳"的配伍可能是通过增加血浆中IL-1β、IL-2的含量治疗肾阳虚证,故增加血浆中IL-1β、IL-2的含量,可能是肾气丸"阴中求阳"配伍治疗肾阳虚证的机理之一。

牛初乳中乳铁蛋白的分离及纯化

乳铁蛋白(Lactoferrin,简称Lf)作为一种糖蛋白,主要存在于哺乳动物的各种外分泌物中,如乳汁、眼泪、唾液等,乳汁尤其是初乳中Lf的含量很高犤1犦。本文通过盐析法和有机溶剂沉淀法从牛初乳中分离出乳铁蛋白,并应用酶联免疫法鉴定各步骤中分离的乳铁蛋白,获得的乳铁蛋白的相对分子量为75,000Da。

血清IL-5、TNF-α检测对慢性阻塞性肺疾病急性加重期的临床意义

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者急性加重期外周血白细胞介素-5(IL-5)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)指标变化。方法选择在我院住院的COPD急性加重期患者70例,开始治疗前采用ELISA方法检测血清IL-5、TNF-α水平,并与同期住院的70例COPD缓解期患者和70例健康体检者的检测结果进行比较。结果 COPD急性加重期患者IL-5、TNF-α浓度明显高于COPD缓解期组和对照组(P<0.05),同时COPD缓解期患者血清IL-5、TNF-α浓度也明显高于健康对照组(P<0.05)。结论 COPD急性加重期患者IL-5、TNF-α明显升高,提示均参与了COPD的发生、发展;COPD缓解期虽然炎症明显减轻,但细胞因子仍持续升高并持续引起组织损伤。IL-5、TNF-α等细胞因子的监测对COPD的治疗有重要临床意义。

乙型肝炎病毒标志物检测方法的选择与应用

目的探讨乙型肝炎病毒定性与定量方法在临床诊治中的应用价值和合理选择。方法收集920例健康体检者血清,分别用胶体金方法、酶联免疫吸附剂测定方法和时间分辨免疫荧光方法检测乙型肝炎病毒表面抗原,对阳性标本再用中和确认试验进行验证和PCR方法检测HBV-DNA。结果 920例标本中胶体金法检出阳性96例,酶联免疫吸附测定方法检出阳性104例,时间分辨免疫荧光法检出阳性112例,时间分辨免疫荧光方法与胶体金方法、酶联免疫吸附测定方法比较有统计学意义(P<0.001、P=0.008);中和确认试验确认112例标本均阳性;实时荧光定量PCR检测112例标本HBV-DNA阳性78例。结论乙型肝炎病毒标志物的日常检测方法应由准确性高的定量方法替代目前常用的定性方法。

血清IL-8、TNF-α及IGF-Ⅰ检测在慢性阻塞性肺疾病急性加重期的临床意义

目的观察慢性阻塞性肺病(COPD)患者急性加重期外周血白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)指标变化。方法选择我院住院的COPD急性加重期患者60例,开始治疗前采用ELISA方法检测血清IL-8、TNF-α及IGF-Ⅰ水平,并与同期住院60例COPD缓解期患者和60例健康体检者进行比较。结果 COPD急性加重期患者IL-8、TNF-α及IGF-Ⅰ浓度明显高于COPD缓解期组和对照组(P<0.05),同时COPD缓解期患者血清IL-8、TNF-α及IGF-Ⅰ浓度也明显高于对照组(P<0.05)。结论 COPD急性加重期患者IL-8、TNF-α及IGF-Ⅰ明显升高,其参与了COPD的发生、发展。COPD缓解期虽然炎症明显减轻;但细胞因子仍持续升高并持续引起组织损伤。IL-8、TNF-α、IGF-Ⅰ等细胞因子的监测在慢性阻塞性肺疾病的诊疗指导中有重要临床意义。

白细胞介素17在多发性硬化中的作用

目的通过检测多发性硬化(MS)患者与健康人的血清白细胞介素17(IL-17)水平,研究IL-17水平与MS之间的关系。方法收集27例MS患者和27例健康人的血清,采用酶联免疫吸附剂法(ELISA)检测样品吸光度,计算出IL-17水平。结果 MS组的血清IL-17水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MS患者组的血清IL-17水平高于对照组。

中药鳖甲提取物抗肝纤维化的实验研究

目的探讨中药鳖甲提取物的抗肝纤维化活性及作用机制。方法传代培养的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)与从鳖甲中提取分离得到的小组分D j61-B j616各浓度组共同培养72 h后,采用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)测定各浓度组Ⅳ型胶原(ColⅣ)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)的含量,同时设空白对照组和刺激对照组。结果鳖甲小组分B j611-B j613的各浓度组的Ⅳ型胶原和Ⅲ型胶原的含量与空白对照组、刺激对照组比较均存在显著性差异(P<0.05)。结论鳖甲提取物通过降低Ⅳ型胶原和Ⅲ型胶原的含量而发挥抗肝纤维化的作用。

增殖性玻璃体视网膜病变玻璃体的组织病理学及其转化生长因子β_2的表达

目的观察玻璃体视网膜病变玻璃体的组织病理及玻璃体中转化生长因子β2(TGF-β2)在不同级别增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)玻璃体中的表达及其浓度变化,探讨PVR发病过程中TGF-β2与PVR等级的相关性。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附剂测定法(ABC-ELISA)检测玻璃体切割术中干抽获得的30例玻璃体中TGF-β2的表达和含量,应用两样本近似t'检验和直线相关分析判断TGF-β2含量与PVR等级的相关性。另3例标本取自玻璃体切割机集液盒、离心集液盒中液体,取沉淀物,用石蜡包埋,按常规制作病理切片,观察病变玻璃体中的细胞形态,并使用链霉亲和素-生物素复合物(SABC)免疫组织化学方法染色,观察TGF-β2在细胞间质和细胞上的表达。结果PVR玻璃体中有多种细胞成分和胶原纤维,并散布色素颗粒。细胞以上皮样细胞和成纤维样细胞居多。玻璃体中TGF-β2在细胞间质和上皮样细胞均有棕黄色阳性表达。ELISA显示各组之间TGF-β2含量比较差异有统计学意义(P<0.001)。TGF-β2含量和PVR等级存在直线相关关系,相关系数r=0.868,具有统计学意义(P<0.001)。结论玻璃体视网膜病变中,组织病理学改变表现为视网膜色素上皮细胞和成纤维细胞增生。玻璃体内有TGF-β2表达,不同PVR等级玻璃体中TGF-β2含量差异有显著性,其含量与PVR等级具有正向相关性,可能是由于RPE细胞的增生致使分泌TGF-β2增多引起的。

ELISA实验影响因素的研究进展

1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。本文对影响ELISA实验的因素做一综述。

RIA和ELISA检测血清乙酰胆碱受体抗体对重症肌无力诊断的准确性和一致性

目的研究放射免疫沉淀法(radioimmunoprecipitation assay,RIA)和酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定乙酰胆碱受体抗体(anti-acetylcholine receptor antibody,AChR-Ab)对诊断重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的敏感度和特异度,并对不同方法检测AChR-Ab的一致性进行检验。方法本研究采用回顾性的方法,收集在北京协和医院神经科MG专科门诊诊断的未行免疫治疗的MG和非MG对照血清,应用RIA和ELISA检测AChR-Ab,对两种检测方法的敏感度和特异度进行验证,评估两种方法的相关性和一致性。结果共募集120例MG,其中眼肌型54例,全身型66例;非MG对照102例,其中其他神经肌肉病43例,自身免疫病9例,健康体检者50名。MG诊断方面,RIA和ELISA的灵敏度分别为75.00%和71.67%,特异度分别为99.01%和96.08%,阳性预测值分别为98.9%和95.56%,阴性预测值分别为77.09%和74.24%。Spearman检验显示两种方法的相关性良好(r=0.86,P<0.001),Kappa一致性检验显示一致性较好(κ值=0.804,P<0.001)。结论应用RIA和ELISA检测AChR-Ab均对MG具有较好的诊断灵敏度和诊断特异度,且一致性良好。

视神经脊髓炎患者血清胶质纤维酸性蛋白的表达及临床意义

目的通过检测视神经脊髓炎（neuromyelitisoptic，NMO）患者与健康人的血清神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）水平，研究GFAP水平与NMO之间的关系。方法收集2013年6月～2015年4月的NMO患者27例和27例健康人的血清，采用酶联免疫吸附剂法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测样品吸光度，计算出GFAP的浓度。结果NMO患者组的血清GFAP浓度高于对照组，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论NMO患者组的血清GFAP浓度高于对照组。血清GFAP浓度与NMO之间有关联。

口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞KGF的表达水平检测

目的检测体外培养的正常口腔黏膜与口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞表达和分泌的角质细胞生长因子(KGF)的量。方法应用酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)技术检测体外培养的14例口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞和11例正常口腔黏膜成纤维细胞分泌的角质细胞生长因子蛋白的情况。提取各组细胞RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测KGF mRNA表达量的变化。结果 ELISA测定结果显示,扁平苔藓黏膜成纤维细胞分泌角质细胞生长因子蛋白量低于正常口腔黏膜,经检验差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示,正常口腔黏膜与扁平苔藓黏膜成纤维细胞表达的角质细胞生长因子的量没有统计学差异(P>0.05)。结论与正常口腔黏膜相比,口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞分泌的角质细胞生长因子蛋白水平降低,而在基因水平上没有变化。