纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度

酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。

酶联免疫吸附分析实验在食品分析教学中的实施

该文通过对酶联免疫吸附分析(ELISA)实验在食品分析教学中实施情况进行探讨。介绍了该实验的基本原理以及实施过程,并以在食品安全检测领域中较常用的竞争ELISA为例,论述了用ELISA检测食品中有害小分子化学物质的实验步骤。为有关院校开展ELISA实验提供指导和借鉴。

促凝血与抗凝血对酶联免疫吸附实验中HBsAg检测结果的影响研究

目的 分析促凝血和抗凝血样本对于酶联免疫吸附实验(ELISA)中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)检测结果的影响。方法 选取2022年1月至2022年6月驻马店市中心血站共3 680例无偿献血者的血液样本进行研究,均留取血液样本两份,其中一份采取促凝血处理,另外一份采取抗凝血处理,所有血液样本使用的检测仪器及试剂均相同,并于相同条件下采取ELISA检测HBsAg;并依据HBsAg弱阳性参考品的比例加入抗凝剂开展测定;比较促凝血样本和抗凝血样本ELISA检测HBsAg的样本吸光度与标准吸光度比值(S/CO值)情况。结果 促凝血样本采取ELISA法检测HBsAg显示阳性48例,阳性率是1.30%;抗凝血样本采取ELISA法检测HBsAg显示阳性30例,阳性率是0.82%。促凝血样本用于ELISA法检测HBsAg的阳性率高于抗凝血样本,差异有统计学意义(P <0.05)。3 680例无偿献血者促凝血样本和抗凝血样本内共有18名的HBsAg检测结果存在不一致,促凝血样本HBsAg检测的S/CO值普遍高于抗凝血样本。经重复实验后,上述18例样本复试结果一致,均为阳性,重复实验结果和促凝血样本的检测结果相同。HBsAg质控血清依据比例加进抗凝剂后,伴随抗凝剂量不断升高,HBsAg含量以及S/CO值逐渐降低。促凝血样本用于ELISA法检测HBsAg的S/CO值高于抗凝血样本,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 和促凝血样本相比,酶联免疫吸附实验中采取抗凝血样本检测HBsAg可能产生漏检的情况,建议留取促凝血样本开展检测,以确保检测结果的准确度。

应用快速孵育法优化酶联免疫吸附实验过程探讨——以乙型肝炎病毒表面抗原检测为例

目的利用快速孵育法优化酶联免疫吸附实验操作流程,通过缩短孵育时间,以提高工作效率。方法收集化学发光法定量检测乙肝表面抗原阳性高值样本30例、阳性中值样本30例、阳性临界值样本30例、阴性样本30例,使用ELISA试剂盒说明书推荐方法和快速孵育法同时进行检测,比较检测结果相关性。结果使用酶标板孵育器将孵育时间缩短至原来的1/2、1/3时,ELISA试剂盒说明书推荐方法、快速孵育法与化学发光法检测结果符合率100%;当孵育时间缩短至原来时间的1/4时,两种方法与化学发光法阴性、高值和中值样本检测结果符合率100%;临界值样本检测时,ELISA试剂盒说明书推荐方法与化学发光法检测结果符合率100%,快速孵育法与化学发光法结果 6例不一致,检测结果符合率80%。结论通过实验证实,酶联免疫吸附实验时,快速孵育法可满足临床检测,可将孵育时间缩短至原试剂盒推荐时间的1/3或1/2,可提高工作效率。

酶联免疫吸附实验中全自动立式洗板法应用效果评价

目的 与传统手工洗板法、水平注液式洗板法相比较,评价酶联免疫吸附实验中全自动立式洗板法的应用效果.方法 评价全自动立式洗板法洗板机的性能,包括微孔中液体残留量测定、针头堵孔可能性检测、交叉污染可能性检测.收集乙型肝炎病毒表面抗原化学发光法定量检测结果分别为阴性、弱阳性、阳性、强阳性的四组样本各30例,使用酶联免疫吸附实验原理乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒检测,其中洗板步骤分别使用手工洗板法、水平注液式洗板法、全自动立式洗板法三种方法,由酶标仪读取结果,记录洗板时间,数据利用r检验进行统计学分析.结果 本研究中全自动立式洗板法酶标板微孔中液体残留量均值为0.0087±0.0002μL,＜0.01μL;全自动立式洗板机使用6个月（每周至少使用2次）,96个针头未出现堵孔现象,洗板机6个月前后的直线水柱长度分别为6.53±0.27cm、6.58 ±0.31cm,两组数据差异无统计学意义;阳性质控品和阴性质控品交叉检测,及阳性混合血清和阴性混合血清交叉检测未出现交叉污染现象.120例临床样本利用三种洗板法的定性检测结果一致,其中30例弱阳性样本,均有1例假阴性且来源于同一样本;三种洗板法检测阴性、弱阳性、阳性、强阳性样本的测定结果差异无统计学意义（P＞0.05）.手工洗板法、水平注液式洗板法、全自动立式洗板法的洗板时间分别为8min、5min、20s.结论 全自动立式洗板法可满足酶联免疫吸附实验临床检测中洗板要求.

酶联免疫吸附试验的影响因素分析及控制方法

酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种非均相免疫分析技术，具有操作简便、特异性强、重复性好等优点，广泛用于各种抗原和抗体的检测，是目前临床实验室主流的免疫学检测方法。但由于影响ELISA的因素较多，用适当的方法控制影响因素是保证实验准确性的重要手段，本文详尽分析了试验的影响因素及控制方法，以期同行参考。

胶体层析法、酶联免疫吸附实验法应用于艾滋病病毒抗体初次筛查中的研究价值

目的 探讨胶体层析法、酶联免疫吸附实验法在艾滋病病毒(HIV)抗体初次筛查中的应用,并分析其研究价值,为临床诊断与合理治疗提供指导。方法 回顾性分析于贵阳市疾病预防控制中心利用全国艾滋病实验室检测管理系统收集的2020年9月至2021年9月贵阳市的308例疑似艾滋病(AIDS)检测者的临床资料,所有检测者均进行胶体层析法、酶联免疫吸附实验法及免疫印迹法检测HIV抗体,以免疫印迹法为金标准,分析胶体层析法、酶联免疫吸附实验法的检测结果、对HIV感染的诊断效能及酶联免疫吸附实验法阳性样本带型分布情况。结果 308例检测者中免疫印迹法检测出阳性有220例,阴性88例,酶联免疫吸附实验法检测出阳性219例,阴性89例,阳性检出率为71.10%(219/308),低于免疫印迹法阳性检出率的71.43%(220/308),但两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);胶体层析法检测出阳性有220例,阴性88例,阳性检出率为71.43%(220/308),与免疫印迹法阳性检出率71.43%(220/308)比较,差异无统计学意义(P>0.05);酶联免疫吸附实验法检测对HIV感染诊断的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值均显著高于胶体层析法检测(均P<0.05);由酶联免疫吸附实验法检测阳性样本带型分布情况可见,219例AIDS患者中gP160、gP120带型出现率最高,出现率为100.00%,P55出现率最低,出现率为32.88%。结论 酶联免疫吸附实验法与胶体层析法对于HIV感染的诊断均具有一定的检测价值,且酶联免疫吸附实验法在HIV抗体初筛中灵敏度、特异度、准确度较高于胶体层析法。

西藏自治区血液中心实验室酶联免疫吸附试验检测“灰区范围”浅谈

现在全国大多数血站实验室把“灰区”设置定为COx（1±CV）或CO＋2s，（其中CV为该试剂的批内CV，一般在15％～20％，s为实验室做室内质量控制的标准差）。本研究认为酶联免疫吸附试验（ELISA）“灰区”对于不同检测项目和应用的领域、地域的不同，其设置不能一概而论。

兽医实验室酶联免疫吸附试验操作要点

酶联免疫吸附试验(ELISA)是兽医实验室常用检测方法,具有灵敏度高、特异性强以及操作简便等特点。为了刚好地使用ELISA方法进行疫情检测以及疫病诊断,本文总结了常见ELISA试验各个操作步骤的注意事项,为广大实验员提供获得更准确有效的实验结果提供参考。

血站实验室梅毒抗体酶联免疫吸附测定检测试剂的应用效果分析

探究血站实验室梅毒抗体(抗-TP)酶联免疫吸附(ELISA)测定检测试剂的应用效果。方法 于2020年1月~2021年9月我站采集的18254份无偿献血标本为研究对象,应用ELISA进行检测,分析检测结果。结果 18254例血液样品中,ELISA检测抗-TP反应性为112例,其中85例被TPPA确证为真阳性,ELISA检测敏感度43.15%、特异度100.00%、准确度99.39%;通过ELISA确诊112例具有抗-TP,其中108例为金豪TP-ELISA反应,TPPA确认数为105例,灵敏度为 97.22% ,特异度为100.00% ,漏诊率为 2.78%;英科创新TP-ELISA反应104例,TPPA确认数为102例,灵敏度为 98.08% ,特异度为100.0% ,漏诊率为 1.92%。结论 ELISA法测试抗-TP酶假阳性率较高,建议报废相应血液,献血者归队并再次献血。

快速定量分析牛乳中α-乳白蛋白的竞争酶联免疫吸附法

建立一种灵敏度高和特异性好的直接竞争ELISA法来定性和定量检测牛乳中α-乳白蛋白（α-LA）.通过使用牛乳α-LA多次免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并采用过碘酸钠氧化法制备辣根过氧化物酶（HRP）标记的α-LA,建立检测α-LA的直接竞争ELISA法.所制备的多克隆抗体特异性较高,无明显交叉反应,效价为1∶80 920.酶标抗原的标记率达66.67%.直接竞争ELISA法标准曲线相关系数为0.998 57,回收率在86.00%-117.50%之间,重复性高,变异系数〈5%.与国标电泳方法进行样品检测比较,结果显示该方法可有效地用于食品中α-LA的快速定性和定量检测.

一种检测人类血小板因子4的定量酶联免疫吸附实验

背景血小板因子4（PF4）是体内和体外检测血小板激活和α-颗粒分泌的标记物。PF4同时也是保存期间释放的主要的CXC细胞因子。血小板保存期间释放的细胞因子是引起非溶血性输血反应的原因。PF4的定量测定需要一种既可靠又灵敏的实验。为了达到这个目的，作者利用商业用的抗人类PF4抗体研制出一种灵敏、经济的三明治酶联免疫吸附实验（ELISA）。研究设计及方法研制的ELISA法用于检测人类血小板或激活的血小板分泌的PF4。

抗凝剂对抗-HIV酶联免疫吸附试验实验检测结果的影响

目的探讨二乙胺四乙酸钠盐(EDTA-Na2)抗凝剂对抗-HIV酶联免疫吸附试验实验(ELISA)检测结果的影响。方法严格依照抗-HIV试剂盒操作说明要求,应用AT-plus2全自动加样器和FAME全自动酶免处理系统分别检测90例符合献血条件的献血者抗凝血浆和血清标本180份,通过酶标仪读板OD数值并将结果进行分析。结果当血液与EDTA-Na2抗凝剂的比例为1∶4以上时,可以基本消除抗凝剂对结果的影响,同标本类型不同试剂间OD数值数据,差别无显著性意义(P>0.05),相同试剂不同标本类型间OD数值数据,差别有显著性意义(P<0.05)。结论应充分估量采集标本中抗凝剂对抗-HIVELISA实验结果的影响因素,尽量减低由于标本的不正确采集和保存而造成对检测结果的影响,确保血液检测质量安全。

影响酶联免疫吸附实验边缘效应的探讨

目的酶联免疫吸附实验（ELA）边缘效应对检测结果的影响.方法2011-2013年血液四项检测乙肝、丙肝、梅毒、艾滋的酶联免疫吸附实验（ELISA）检测结果发生边缘效应的14个血液样本用同一批号试剂进行双孔复查,与初次结果比较.结果14份标本中2号标本“灰区”判为有反应性,10号标本复查有反应性,其余标本复查结果无反应性,复查结果与初次结果比较P〈0.05具有显著性差异.结论酶联免疫吸附实验的全过程实施质量控制,避免边缘效应的发生,减小实验室工作人员的工作量,减少献血者的淘汰率,对建立固定无偿献血着队伍的归队具有重要意义.

酶联免疫吸附实验检测HIV抗体影响因素探讨

通过对酶联免疫吸附实验检测HIV抗体的检测前、检测中和检测后各相关影响因素的分析,探讨各因素对结果的影响,以便寻找解决的方法和加强质控管理,从而保证检测结果的准确性和精确性。

酶联免疫吸附实验在检测梅毒中的应用

目的探讨酶联免疫吸附实验在梅毒检测中的应用。方法采用酶联免疫吸附试验和明胶颗粒凝集试验。结果用两种方法检测标本360份,酶免法与明胶颗粒凝集实验检测出都为阳性标本78份,用两种方法检测都为阴性的标本276份。结果显示,酶免法与明胶颗粒凝集法检测没有差异。结论酶免法在检测梅毒的敏感性、特异性方面与明胶颗粒凝集法的符合率高,可用于梅毒检测和筛查。