免疫亲和层析技术协同酶联免疫吸附法检测赭曲霉毒素A

利用免疫亲和层析技术(immunoaffinity chromatography,IAC)对样品中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)进行捕获与浓缩,利用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法对IAC捕获的目标物OTA进行测定。IAC与ELISA中的抗OTA单克隆抗体来自不同的克隆株,分属不同独特型,与OTA结合靶点的选择性存在差异,IAC与ELISA协同检测,可以有效过滤OTA结构类似物造成的干扰,提高免疫分析的特异性与灵敏度。该方法用于加标样品测定时,OTA的检出限为0.2 ng/g,定量限为0.4 ng/g,OTA的平均回收率为75.9%,与单一的ELISA法相比,该方法虽然回收率略低,但灵敏度可以显著提高,达到ELISA法的60倍。通过对49份样品的实际检测,该方法检出阳性样品与国标法的符合率达到100%,漏检率为0%,由此可见,该方法在准确性上表现出明显的优势。作为一种综合免疫分析技术,该方法不需要大型仪器设备,对操作环境没有严格要求,便于基层实验室对样品中OTA的分析。

酶联免疫吸附法在畜产品快速检测中的应用

酶联免疫吸附法是畜产品质量安全检测常用的快检方法之一,能快速、准确、高效地对相关产品进行检测。伴随着行业的高速发展,人们对畜产品的需求数量及质量要求也在逐步上升,畜产品的食品安全问题越来越受到重视。但近年来,畜产品中存在着动物疫病、兽药残留及产品非法添加物等相关问题。因此,使用快速、准确的检测方法筛查畜产品的质量安全至关重要。本文以酶联免疫吸附法为主要技术导向,深入剖析其原理,同时对该技术在畜产品快检中的应用情况分层介绍,以期为行业相关研究人员提供依据。

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测鱼糜制品中鸡蛋卵白蛋白

目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附(sandwich enzyme linked immunosorbent assay,sELISA)法检测鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)的方法,组装定量检测鱼糜制品中OVA含量的ELISA检测试剂盒。方法确定各步骤反应时间,使用棋盘法确定捕获抗体和检测抗体的最佳工作浓度,建立检测方法并对其性能进行评价。结果反应最佳条件为:抗原孵育20 min,检测抗体孵育20min,酶促反应显色10 min。兔抗OVA抗体为捕获抗体,工作质量浓度为1μg/mL,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记兔抗OVA抗体为检测抗体,1:5000(V:V)稀释。采用四参数逻辑曲线拟合标准曲线,所建立sELISA方法的检测范围为8.5~200.0 ng/mL,检出限为3.5 ng/mL,定量限为8.5 ng/mL。批次内和批次间的变异系数分别为2.31%~4.58%和6.06%~12.23%;鱼糜基质中的回收率为80%~130%;测得28种常见食物样品中4种样品的交叉反应率小于0.002%;试剂盒在4℃保存6个月期间,标准品检测结果的变异系数为4.29%~18.91%。结论建立的方法快速、灵敏、准确、稳定性好,可用于鱼糜制品中鸡蛋OVA的定量检测。

化学发光法与酶联免疫吸附试验在血液标本内乙肝病毒检测中的价值对比

对比分析化学发光法、酶联免疫吸附法用于检测血液样本内乙肝病毒的价值。方法 选择2022年1月-2023年12月我中心接收疑似乙肝血液样本50例进行回顾性分析,均采取化学发光法、酶联免疫吸附试验对样本内乙肝病毒进行检测,以实时荧光定量聚合酶链反应结果为金标准,分别计算化学发光法、酶联免疫吸附试验检测的灵敏度、特异度及准确率,进一步分析两种检测方法在检测乙肝五项的阳性检出率。结果 50例疑似乙肝患者经实时荧光定量聚合酶链反应检查,结果 显示35例确诊为乙肝疾病,占比70.00%,经过计算,化学发光法检测的灵敏度为97.14%、特异度为93.33%、准确率为96.00%,与酶联免疫吸附试验计算结果比较无统计学差异(p>0.05)。进一步检测乙肝五项结果显示,两项技术在检测HBsAb(乙肝表面抗体)、HBcAb(乙肝核心抗体)、HBsAg(乙肝表面抗原)阳性率比较无统计学差异(p>0.05),化学发光发检测HBeAg(乙肝e抗原)、HBeAb(乙肝e抗体)阳性率高于酶联免疫吸附试验(p<0.05)。结论 化学发光法与酶联免疫吸附试验均可作为检测血液样本内乙肝病毒的方法,其中以化学发光法检测结果更为准确,可用于临床动态监测病情,值得借鉴。

加工食品中花生蛋白夹心酶联免疫吸附测定的前处理方法探究与改进

目的构建一种可配合花生蛋白夹心酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒实现对于加工食品中花生成分可靠检测的高质量样品前处理方法。方法对9种不同pH的提取缓冲液提取未处理、湿热处理、干热处理花生蛋白效果进行比较分析以确定最优提取缓冲液类型。而后,将吐温-20、二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)以单独或组合添加的方式加入上一步获得的最优提取缓冲液中,提取3组花生蛋白,并对提取效果与夹心ELISA试剂盒检测花生蛋白回收率进行比较分析以确定最优添加剂配方。结果最终确定添加0.2%SDS和0.1%吐温-20的碳酸盐缓冲液(50 mmol/L,pH 9.6)为最优提取缓冲液。向碳酸盐缓冲液中加入SDS、吐温-20较好地提升了花生蛋白的提取率和回收率,将湿热处理花生蛋白回收率提高了2倍以上。结论本研究实现了对商业加工食品中花生成分的可靠检测,为推动过敏原信息在食品标签的准确标注提供了技术支撑,也为相关研究提供了参考。

猪粪中氧氟沙星酶联免疫吸附分析法的构建及应用

[目的]为粪便中其他小分子抗菌药物的酶联免疫分析方法的构建提供技术借鉴,实现猪粪中氧氟沙星禁用抗菌药物的养殖全过程管理。[方法]采用碳二亚胺法,将氧氟沙星(OFL)与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,制备出人工抗原OFL-BSA和OFL-OVA。使用OFL-OVA抗原制备氧氟沙星单克隆抗体,使用OFL-BSA作为包被抗原建立氧氟沙星间接竞争酶联免疫吸附(ELISA)方法。风干的猪粪样品经醋酸-醋酸钠溶液(pH约4.0)与甲醇的混合液(1∶3,V/V)提取及稀释后测定。[结果]建立的氧氟沙星间接竞争ELISA方法在标准溶液浓度范围(0~81 ng/mL)内线性良好(r>0.99),方法检测限为3.5μg/kg。不同添加浓度的氧氟沙星回收率为70.8%~86.8%,变异系数为0.7%~4.7%。应用该法检测79份猪粪实际样品,检测结果与液相色谱-串联质谱法的分析结果具有良好的一致性。[结论]该方法准确、灵敏、快捷,可用于猪粪中氧氟沙星残留的快速分析。

电化学发光免疫分析法联合核酸检测在酶联免疫吸附法双试剂HBsAg+/-献血者归队筛查中的应用

目的探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)联合核酸检测(NAT)在酶联免疫吸附法(ELISA)双试剂测定HBsAg+/-献血者归队筛查中的应用效果。方法纳入176例血液初筛HBV-DNA阴性且ELISA双试剂测定HBsAg+/-的献血者,经过6个月屏蔽期后,采集献血者样本进行ELISA双试剂检测及ECLIA联合NAT血液筛查。结果 176例归队体检献血者中,ELISA试剂1反应性35例,ELISA试剂2反应性31例,双试剂反应性1例。3例HBV-DNA反应性中,1例ELISA双试剂为反应性,2例ELISA结果均为阴性。19例ECLIA检测结果为反应性的献血者中,1例ELISA双试剂及HBV-DNA检测均呈反应性,另18例中ELISA试剂1反应性5例,试剂2反应性13例。176例归队献血者中符合可归队再献血129例(73. 29%)、符合下次归队体检者31例(17. 61%)、永久性屏蔽16例(9. 09%)。结论 ECLIA联合NAT检测可用于HBsAg+/-献血者归队的筛查,对保障献血者权益具有重大意义。

酶联免疫吸附法在食品安全检测中的应用

近年来,食品安全问题引起了公众的广泛关注,如食品中的药物残留、毒素残留及微生物污染等,这些问题严重威胁着人体健康。因此,确保食品的安全性与质量至关重要。微生物检测作为食品安全监管的有效手段之一,能够及时发现食品中的安全问题,有效预防食品安全事件的发生。本文阐述酶联免疫吸附法的原理、常见类型及操作步骤,及其在食品微生物检测中的应用,以期为食品安全检测提供有力保障与科学依据,提高食品安全检测的效率与准确性,保障公众的食品安全。

酶联免疫吸附法与金标快速检测板法检测乙肝五项血清标志物的价值

目的 比较酶联免疫吸附法(ELISA)与金标快速检测板法检测乙肝五项血清标志物的价值。方法 选取2020年1月至2022年6月医院收治的68例确诊乙肝患者作为研究对象,采集所有参检者空腹静脉血3 ml,采用ELISA、金标快速检测板法检测乙肝五项血清标志物[乙肝表面抗体(HBs Ab)、乙肝e抗体(HBe Ab)、乙肝表面抗原(HBs Ag)、乙肝e抗原(HBe Ag)、乙肝核心抗体(HBc Ab)]。比较两种方法的阳性检出率及对乙肝的诊断准确度。结果 两种检测方法对HBs Ag、HBe Ag的阳性检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);ELISA检测对HBs Ab、HBe Ab、HBc Ab的阳性检出率高于金标快速检测板法,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA诊断乙肝的准确度为88.24%(60/68),高于金标快速检测板法的73.53%(50/68),差异有统计学意义(χ~2=4.755,P=0.029)。结论 ELISA检测对乙肝五项血清标志物中HBs Ab、HBe Ab、HBc Ab的阳性检出率高于金标快速检测板法,且对乙肝具有较高的诊断准确度。

酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原不同程度乳糜血对其的干扰分析

目的:分析不同程度乳糜血浆乙肝表面抗原(HBsAg)检测结果的干扰,探讨乳糜血浆检测结果的可靠性。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测乳糜血浆中HBsAg。结果:不同乳糜指数血浆HBsAg检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同乳糜程度血浆放置时间不同,HBsAg检测结果有区别,乳糜指数≤3的乳糜血浆5 d内检测,差异无统计学意义(P>0.05),乳糜指数为4、5、6、8及>8的乳糜血浆在第3 d检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:不同程度乳糜血浆HBsAg检测结果无影响,轻度乳糜血浆样本放置5 d内检测HBsAg结果无差异,中度及重度乳糜血浆样本必须3 d内完成检测。

荞麦过敏原特异性抗体酶联免疫吸附法检测试剂制备

以天然苦荞过敏蛋白包被聚苯乙烯微孔板,以鼠抗人IgE抗体标记辣根过氧化物酶,以间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,IELISA)检测病人血清中的特异性抗体,分析并建立关键操作步骤及反应条件。结果表明:ELISA反应的最适工作条件为包被的抗原质量浓度100μg/mL、阳性血清稀释度1:50、酶标二抗稀释度1:1000,37℃时封闭的最佳时间为40min,包被抗原与阳性血清中抗体的最佳作用时间为40min,阳性血清与酶标二抗的最佳作用时间为40min。本方法具有良好的特异性、重复性和精密度。

间接免疫荧光法和酶联免疫吸附法检测血清中抗双链DNA抗体在系统性红斑狼疮中的诊断价值

抗双链DNA（double-stranded DNA,dsDNA）抗体主要见于系统性红斑狼疮（systemic lupuserythematosus,SLE）,对诊断SLE有较高的特异性,被称为SLE的＂标记性抗体＂,其对SLE的高度特异性而被列为SLE诊断标准之一。

加样时间及试剂平衡对酶联免疫吸附法检测弱阳性HBsAg的影响

目的 探讨酶联免疫吸附法检测弱阳性乙肝表面抗原的影响因素。方法 利用HBsAg高低值质控血清和 86例患者血清标本作为检测对象 ,用加样时间和试剂平衡时间 2个条件进行实验。结果 立即加样与 30min ,4 5min ,6 0min后加样比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;试剂平衡 37℃ 30min与室温 (2 2℃ ) 0min ,30min比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 加样时间影响弱阳性HBsAg检测的重复性 。

血站实验室梅毒抗体酶联免疫吸附测定检测试剂的应用效果分析

探究血站实验室梅毒抗体(抗-TP)酶联免疫吸附(ELISA)测定检测试剂的应用效果。方法 于2020年1月~2021年9月我站采集的18254份无偿献血标本为研究对象,应用ELISA进行检测,分析检测结果。结果 18254例血液样品中,ELISA检测抗-TP反应性为112例,其中85例被TPPA确证为真阳性,ELISA检测敏感度43.15%、特异度100.00%、准确度99.39%;通过ELISA确诊112例具有抗-TP,其中108例为金豪TP-ELISA反应,TPPA确认数为105例,灵敏度为 97.22% ,特异度为100.00% ,漏诊率为 2.78%;英科创新TP-ELISA反应104例,TPPA确认数为102例,灵敏度为 98.08% ,特异度为100.0% ,漏诊率为 1.92%。结论 ELISA法测试抗-TP酶假阳性率较高,建议报废相应血液,献血者归队并再次献血。

酶联免疫吸附法在乙肝两对半定性检测中的影响因素分析

探究观察酶联免疫吸附法在乙肝两对半定性检测中的影响因素。方法 2022年1月到2022年12月,选取5000例采用酶联免疫吸附法进行乙肝两对半定性检测的患者为研究对象,统计酶联免疫吸附法检测结果错误的患者例数,汇总患者的相关资料、统计检测影响因素,并进行多因素回归分析。结果 5000例患者中,有50例患者的检测结果错误,检测结果错误率是1.00%。前期准备工作、检验人员工作年限、检测标本质量、检测结果记录、检测过程是检测结果错误的影响因素。将前期准备工作不全、检验人员工作年限≤5年、检测标本质量不达标、检测结果记录不标准、检测过程不规范五项作为因变量,进行多因素 Logistics 回归分析,五项因素均是主要影响因素。结论 应用酶联免疫吸附法进行乙肝两对半定性检测期间存在较多影响因素,其中有五项因素属于主要影响因素,需临床高度重视,积极采用相关措施规避相关因素,提高患者的检测结果准确性。

多羟基双萘醛(WCT)抗血清的制备与不同酶联免疫吸附检测法的对比试验

通过对多羟基双萘醛分子式上的醛基的改造,利用混合酸酐法使小分子化合物多羟基双萘醛能够与大分子蛋白质BSA相结合,形成人工抗原,注射兔子,成功制备WCT抗血清。通过ELISA检测,血清的效价为1∶256,非专化性效价为1∶2。本试验比较了酶联夹心法和间接酶联法的灵敏度,发现间接法检测WCT的灵敏度比夹心法相对高,这为应用间接法检测WCT提供了依据。

两步法酶联免疫吸附试验梅毒抗体检测试剂的质量评估

2010年版《中国药典》要求从2010年10月1日起生产的梅毒螺旋体抗体ELISA检测方法由一步法改为两步法。本实验室在使用新的两步法ELISA梅毒抗体（抗-TP）试剂时发现原厂家试剂的稳定性差,因此对两步法ELISA抗-TP试剂进行了遴选,对试剂的阴性符合率、阳性符合率、精密度、干扰试验、室间质控品检测的准确性及与两种类型的外部弱阳性抗-TP质控品的适宜性等几个方面进行分析比对,报告如下。

双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验法检测丙型肝炎病毒抗体的应用效果分析

目的探讨双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测丙型肝炎病毒抗体的应用效果,旨在分析两种检测方法的灵敏度及特异度,为血液筛查提供参考。方法选取2016年3月至2018年3月我县无偿献血者血液标本1200例作为研究对象,其中抗丙型肝炎抗体(抗-HCV)阴性标本1123例,抗-HCV阳性标本77例。采用双抗原夹心法与间接ELISA法分别进行检测,记录检测结果与丙型肝炎病毒核酸符合率,并进行统计学分析。结果77例抗-HCV阳性标本中,双抗原夹心法阳性检出率96.1%(74/77)高于间接ELISA法87.0%(67/77),差异具有统计学意义(P<0.05),双抗原夹心法检测及间接ELISA法分别有3份和10份假阴性样本出现;双抗原夹心法检测准确度、灵敏度、特异度均高于间接ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在检测丙型肝炎病毒抗体的方法中,相比于间接ELISA法,双抗原夹心ELISA法的检测结果较为理想,能够有效提高其阳性检出率、准确度、灵敏度及特异度。

酶联免疫吸附测定与双抗原夹心法检测抗-HIV比较

目前血站检测无偿献血者的抗-HIV(人类免疫缺陷病毒HIVⅠ型和Ⅱ型抗体)一般采用的是间接酶联免疫吸附测定(ELISA)法,此方法简便快捷,具有较高的灵敏度和特异性,且价格便宜,适用于献血员的筛选.

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测杏仁过敏原苦杏仁球蛋白

提取中国甜杏仁过敏原蛋白苦杏仁球蛋白,分别制备兔和鼠多克隆抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法。结果表明:对甜杏仁中苦杏仁球蛋白的检测限为(6.36±1.02)μg/L;对中国苦杏仁及美国大杏仁中苦杏仁球蛋白的检测限分别为(12.11±1.70)μg/L和(18.95±1.52)μg/L,且与常见的14种植物性蛋白没有交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。将该方法用于法式小面包、饼干和脱脂牛乳中杏仁过敏原的检测,苦杏仁球蛋白的添加回收率为78.94%～125.15%,且相对标准偏差均低于5.81%。