间接竞争酶联免疫吸附测定法快速筛查药酒中双氯芬酸

目的建立间接竞争酶联免疫吸附测定法快速筛查药酒中双氯芬酸(diclofenac,DCF)。方法采用活性酯法和混合酸酐法分别将DCF与载体蛋白耦合,得到DCF的免疫原和检测抗原。采用DCF-牛血清白蛋白免疫BALB/c小鼠,随后用杂交瘤等技术制备抗DCF单克隆抗体(monoclon alantibody,mAb),基于DCFmAb建立了间接竞争酶联免疫吸附测定法,对该检测方法的性能(准确度、精密度和特异性)进行鉴定。结果紫外扫描结果表明DCF已成功与载体蛋白偶联;获得最优株抗DCF的杂交瘤细胞株(4B9),其IC50值为0.61ng/mL;该检测方法在药酒中的DCF平均添加回收率为85.9%,其批间变异系数(coefficient of variation,CV)(5.3%~9.7%)均大于批内CV(4.9%~9.1%),与类似物(酮洛芬、阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、舒林酸、萘普生、罗非昔布)没有交叉反应。结论本研究建立的间接竞争ELISA法为DCF在药酒中的残留提供了一种新的筛查手段。

研究电化学发光法和酶联免疫吸附测定法在检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物中的应用效果

目的:探讨电化学发光法(ECLIA)和酶联免疫吸附测定(ELISA)法在检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物中的应用效果。方法:选取2021年5月至2022年11月本院接收的检验科进行血清学检验的乙肝患者76例纳入研究,使用ECLIA和ELISA法,对乙型肝炎病毒感染血清学标志物进行检测,比较检验效果。结果:ECLIA法检验的准确率,比ELISA法高(P<0.05);ECLIA法检测的乙型肝炎e抗原阳性率为97.37%、乙型肝炎表面抗原的阳性率为96.05%、乙型肝炎e抗体阳性率92.11%,与ELISA法的86.84%、84.21%、77.63%相比,明显更高(P<0.05);而乙型肝炎表面抗体、乙肝核心抗体阳性率89.47%、92.11%、ELISA法为82.89%、85.53%,相比无统计学意义(P>0.05);乙肝炎e抗原、乙肝炎表面抗原、乙肝炎e抗体,ECLIA法检测,要高于ELISA法(P<0.05);而乙型肝炎表面抗体、乙肝核心抗体两种方法比较无差异(P>0.05)。结论:在乙肝病毒的血清学检验中,ECLIA阳性检出率更高。

电化学发光免疫分析与酶联免疫吸附测定法应用于乙型肝炎病毒血清学检验中的效果分析

目的对比乙型肝炎病毒血清学检验过程中采用电化学发光免疫分析(ECLIA)与酶联免疫吸附测定法(ELISA)的效果。方法90例乙型肝炎患者,分别以电化学发光免疫分析、酶联免疫吸附测定法进行病毒血清学检验。对比两种诊断方法对乙型肝炎病毒[乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)]阳性检出率以及不同浓度下两种检验方法HBsAg重复性。结果电化学发光免疫分析对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg、HBeAb的阳性检出率分别为85.56%、33.33%、48.89%、31.11%、64.44%;酶联免疫吸附测定法对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg、HBeAb的阳性检出率分别为83.33%、32.22%、45.56%、27.78%、44.44%。两种检验方法对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg的阳性检出率对比无统计学差异(P>0.05),电化学发光免疫分析对HBeAb的阳性检出率明显高于酶联免疫吸附测定法(P<0.05)。两种检验方法在高浓度HBsAg批次间重复性相近,而电化学发光免疫分析在高浓度HBsAg批次内及中、低浓度HBsAg批次间、批次内重复性均明显低于酶联免疫吸附测定法。结论乙型肝炎患者接受病毒血清学检验可首选电化学发光免疫分析,其具有检出率高、结果准确等优点,值得临床运用并推广。

化学发光法与酶联免疫吸附测定法在乙型肝炎病毒感染血清标志物检验中的应用效果比较

目的比较化学发光法与酶联免疫吸附测定法(ELISA)在乙型肝炎病毒(HBV)感染血清标志物检测中的应用效果。方法选取2018年6月至2021年3月本院收治的82例疑似乙型肝炎患者作为研究对象,所有患者均采取化学发光法及ELISA检测,以实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法作为金标准,比较两种检测方法的诊断价值、阳性检出率、重复性。结果PCR共检出阳性53例,阴性29例;化学发光法阳性52例,阴性30例;ELISA检出阳性51例,阴性31例。化学发光法检测HBV感染血清标志物的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05)。化学发光法HBeAb、HBeAg、HBsAg阳性检出率均明显高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与ELISA比较,化学发光法检测HBV感染血清标志物效果更好,诊断价值、阳性检出率均较高,值得临床推广应用。

酶联免疫吸附测定法与甲苯胺红不加热血清试验在梅毒检测中的价值分析

目的探讨酶联免疫吸附测定法(ELISA)与甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)在梅毒检测中的价值。方法选取2019年1月至2022年12月于我中心检查的1500例梅毒高危患者,所有入选者均进行ELISA、TRUST、TPPA检查。以TPPA为金标准,分析ELISA、TRUST诊断效能。结果1500例梅毒高危患者,TPPA确诊42例为梅毒患者。ELISA诊断梅毒的灵敏度95.24%(40/42)、特异度99.59%(1452/1458)、准确度99.47%(1492/1500)、阳性预测值86.96%(40/46)、阴性预测值99.86%(1452/1454)均高于TRUST(78.57%、98.63%、98.07%、62.26%、99.38%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论梅毒筛查中使用ELISA诊断效能高于TRUST,能够更有效地检出梅毒抗体,提升临床诊断准确率,值得临床广泛应用。

血站实验室梅毒抗体酶联免疫吸附测定检测试剂的应用效果分析

探究血站实验室梅毒抗体(抗-TP)酶联免疫吸附(ELISA)测定检测试剂的应用效果。方法 于2020年1月~2021年9月我站采集的18254份无偿献血标本为研究对象,应用ELISA进行检测,分析检测结果。结果 18254例血液样品中,ELISA检测抗-TP反应性为112例,其中85例被TPPA确证为真阳性,ELISA检测敏感度43.15%、特异度100.00%、准确度99.39%;通过ELISA确诊112例具有抗-TP,其中108例为金豪TP-ELISA反应,TPPA确认数为105例,灵敏度为 97.22% ,特异度为100.00% ,漏诊率为 2.78%;英科创新TP-ELISA反应104例,TPPA确认数为102例,灵敏度为 98.08% ,特异度为100.0% ,漏诊率为 1.92%。结论 ELISA法测试抗-TP酶假阳性率较高,建议报废相应血液,献血者归队并再次献血。

菊酯类农药酶联免疫吸附测定研究进展

介绍了菊酯类农药残留的酶联免疫分析(ELISA)的技术原理、关键技术环节,综述了国内外的酶联免疫测定菊酯类农药残留的研究动态,并展望了此技术的发展及应用前景。

乳铁蛋白的免疫化学分析法——酶联免疫吸附测定法

应用酶联免疫法测定初乳中乳铁蛋白的含量。检测的线性范围为３．１～２００ ｎｇ／ｍｌ，最小检测限为１．５ ｎｇ／ｍｌ，回收率在９１．８２％～１１５．５６ ％之间，变异系数在６．２０％～９．１８ ％之间。

检测T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法的研究

目的 本研究在自制T-2毒素酶标半抗原的基础上，结合市售抗T-2毒素单克隆抗体，建立了检测谷物中T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法（ELISA）。方法粮食样品经70％甲醇-水溶液提取，用滤纸过滤并稀释后。再用0．45μm滤器过滤净化，该滤液用于ELISA检测。结果本方法最低检出量为0．125ng／ml，添加70-280ng／g T-2毒素的大米样品和面粉样品的平均回收率分别为85～117．5％和98．1～102．5％。结论结果表明，该方法简化了粮样提取步骤。可用于谷物及加工产品中T-2毒素的检测。

高敏感度酶联免疫吸附测定法检测分泌蛋白MPB64对于活动性肺结核诊断的价值

目的评价以结核分枝杆菌（MTB）分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法（high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay，HI-ELISA）用于检测痰液中MTB的价值。方法选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本，分别进行BACTEC MGIT960液体培养（简称“MGIT960培养”）、MTB／利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测系统（Gene Xpert MTB／RIF，简称“Xpert检测”）和HI-ELISA检测，通过与MGIT 960培养比较来评价HI-ELISA的诊断效能。结果本研究97份痰标本中，MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为36．08％（35／97）、32．99％（32／97）；与MGIT 960培养比较，HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为88．57％（31／35）、98．39％（61／62）、94．85％（92／97）。在Xpert检测阳性的66份痰标本中，MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为51．51％（34／66）、48．48％（32／66）；与MGIT 960培养相比，HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为91．18％（31／34）、96．88％（31／32）、93．93％（62／66）。Xpert检测MTB为阴性的31份痰标本中，仅有1份标本的MGIT960培养阳性而HI-ELISA未能检测到MTB，其他30份标本检测结果全部相符，符合率为96．77％（30／31）。结论HI-ELISA可以特异性检测MTB活菌，对活动性肺结核的诊断及治疗评价有很高的应用价值。

无偿献血者血液标本酶联免疫吸附测定项目再检结果分析的意义

目的探讨检测试剂及检测系统稳定性的监测方法,从而为检测试剂的评估和选择提供依据。方法收集该中心采集的无偿献血者血液中进行酶联免疫吸附测定(ELISA)检测的再检标本。分析其再检率和反应重复率。结果同项目初、复检试剂再检率的配对t检验显示,HBsAg、抗-HCV抗体、抗-HIV抗体和抗-TP抗体的P值分别为0.009、0.002、0.002和0.005,4个检测项目的初、复检试剂的再检率差异均有统计学意义。同项目初、复检试剂反应重复率的配对t检验显示,HBsAg、抗-HCV抗体、抗-HIV抗体和抗-TP抗体的P值分别为0.041、0.023、0.000和0.170。HBsAg复检试剂首次检测呈阳性的结果可信度较差,再检反应重复率仅为17.30%,抗-HIV抗体复检试剂和抗-HCV抗体初、复检试剂首次检测呈灰区的结果可信度极差,再检反应重复率分别为12.50%、13.90%及14.60%。结论再检率和反应重复率可以作为试剂和整个检测系统稳定性的评估和持续监测指标。

完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染

为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 .

间接竞争酶联免疫吸附测定水产品中的组胺残留

本文通过制备特异性识别组胺衍生物的多克隆抗体,建立了针对水产品中组胺的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。以组胺等为反应原料经三步化学反应合成组胺半抗原,采用活泼酯法将组胺半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联作为包被原和免疫原,用紫外扫描法进行鉴定,结果显示组胺半抗原与载体蛋白偶联成功。通过免疫新西兰大白兔制备组胺抗血清,采用辛酸-硫酸铵方法纯化血清获得了相应的特异性多克隆抗体。通过对icELISA系列反应条件的摸索,确定了各组分的最适工作条件。试验结果表明:该方法对于组胺的IC50为0.91 ng/mL,与组氨酸、N-酰基组氨酸、3-甲基组胺等多种类似物及其衍生物均无交叉反应,方法特异性良好;线性检测范围为0.1~8.1 ng/mL,检出限为0.10 ng/mL;按照10、20、30 ng/g的添加量添加组胺至鱼、虾和贝类样品中,测得其回收率为98.9%~130.1%。方法检测的准确性好灵敏度高,适用于实际水产样品中组胺的检测。

异戊烯基腺苷组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法的建立

从样品制备，ＥＬＩＳＡ类型及免疫反应时间三方面着手建立了异戊烯基腺苷（ｉＰＡ）组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法。用ＮａＩＯ４氧化合成免疫原ｉＰＡ－Ｎ９－ＢＳＡ（ＢＳＡ：牛血清白蛋白）。由此获得的免抗血清效价达１：３４５００。交叉反应试验表明该抗血清只识别ｉＰＡ组细胞分裂素。因此本研究中采用直接型（即固相抗体型）ＥＬＩＳＡ，并将最佳免疫反应平衡时间缩短至３０ｍｉｎ（４℃）。所建立的ｉＰＡ组ＥＬＩＳＡ检测极限为４．７ｆｍｏｌｉＰＡ／孔，线性检测范围０．０１～５０ｐｍｏｌｉＰＡ／孔，板内、板间的变异系数分别为３．７％和５．３％。样品的稀释曲线与标准曲线平行，回收率为８７．１％，表明本研究中采用的８０％甲醇提取、Ｓｅｐ－ｐａｋＣ１８柱初纯化的快速制样程序适合于该ＥＬＩＳＡ。对大豆植株不同部位ｉＰＡｓ含量测定结果表明，根瘤与根尖内ｉＰＡｓ含量显著高于幼叶与顶芽内的ｉＰＡｓ含量。

酵母表面展示-酶联免疫吸附测定法的建立

以表面展示人源蛋白酶体α亚基6蛋白的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫原理检测技术,以表面展示有人源蛋白酶体α亚基6(proteasome subunit alpha6,PSα6)的重组酵母细胞及其对应的单克隆抗体3D7D12D为研究对象,建立酵母酶联免疫吸附(yeast-ELISA)检测技术,应用于检测小鼠单克隆抗体及单抗效价.应用该方法最佳酵母浓度为0.50A600;测得单抗效价为1∶5×105,与常规ELISA效价接近;交叉试验和阻断试验表明该方法特异性强;同时该方法可用于检测抗血清.结果表明,yeast-ELISA可直接应用于检测单抗,测得效价与常规抗原包被间接ELISA具有良好一致性,特异性好,无交叉反应性.

吲哚-3-乙酸间接酶联免疫吸附测定法的建立

报道了一种利用兔抗 IAA-N-BSA 抗血清和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 IgG 建立的IAA 固相抗原型(或称间接)酶联免疫吸附测定法;该法的线性测定范围在0.8～200ng 之间;本文研究了合成包被抗原的适宜方法;并在植物样品测定冲对该法做了一系列的质量控制试验。

GA_4间接酶联免疫吸附测定方法的建立

利用 GA_4-17-BSA 作为免疫抗原,GA_4-16-OA 作为包被抗原,建立了检测自由态 GA_4的间接ELISA。检测极限为4.1ng/mL,抗血清与 GA_7,GA_3,GA_4-ME 的交叉反应率分别为68.51%,9.10%。1.90%,与 IAA,ABA,ZR 交叉反应率极小。

三唑磷酶联免疫吸附测定法中包被抗体稳定剂的研究

选择了甘油、山梨醇、聚乙二醇（PEG）、卵清蛋白（OVA）、多肽、糖、氨基酸等试剂,通过经验法和正交法相结合的手段配制了一系列稳定剂,对吸附在酶标板上的三唑磷多克隆抗体进行处理（37℃,1h）后,再在37℃下连续贮存7d,利用直接竞争ELISA法对不同稳定剂处理的包被抗体免疫活性、亲合性及检测灵敏度进行检测,并与未经稳定剂处理的对照进行比较,筛选得到效果较好的稳定剂1（质量分数：甘油2.5%,氨基酸1.5%,蛋白胨3.0%,离子螯合剂0.1%,防腐剂0.01%）。用稳定剂1处理包被抗体后,4-6℃下保存半年及37℃下保存14d的试验结果表明,抗体的活性相对保持率分别为97.8%和94.2%;其免疫活性、亲合性（I50分别为68.43和54.38ng/mL）及灵敏度（I10分别为3.72和3.22ng/mL）与常规方法包被的抗体（包被好后不贮存,直接检测,I50为60.73ng/mL,I10为3.11ng/mL）无明显差异;冻融试验表明,经稳定剂1处理的三唑磷抗体在反复冻-融次数不超过8次时其活性也是稳定的。说明筛选出的稳定剂可以显著提高三唑磷多克隆包被抗体的稳定性,可用于三唑磷ELISA试剂盒的生产。

灵芝酸A多克隆抗体制备及酶联免疫吸附测定法的建立

以牛血清白蛋白为载体,采用活化酯法合成灵芝酸A的偶联抗原作为免疫原,按照免疫程序接种试验兔,获得针对偶联抗原的多克隆抗体。对多克隆抗体的效价及靶向进行分析后,构建灵芝酸A的间接竞争酶联免疫吸附测定法。结果显示:多克隆抗体中存在靶向偶联抗原3个区域的独特型抗体,总效价为1∶78 125,其中抗灵芝酸A特异性抗体效价为1∶3 125。间接竞争酶联免疫吸附测定法的灵芝酸A检出限为0.3μg/L,半数抑制浓度为4.0μg/L,线性范围在0.6~27.3μg/L之间。样品测定批间变异系数低于10%,样品加标回收率在82.9%~118.6%之间,对22份灵芝粉剂产品的测定结果显示不同品牌产品中灵芝酸A含量的差异极显著,该法测定结果与高效液相色谱法的测定结果相比,相关系数为0.972。结果表明,间接竞争酶联免疫吸附法测定灵芝酸A可行,该方法能够为灵芝保健品市场中相关产品的质量监控提供一种辅助方案。