酶联免疫吸附法检测HBsAg结果的影响因素探讨

目的探讨不同因素对酶联免疫吸附法检测HBsAg结果的影响。方法采用同一批次的试剂对不同状态的血清标本进行同步检测,对结果进行比较分析。结果 A组(不抗凝血液标本)HBsAg阳性检出率分别为44.4%、11.1%和0%。B组(抗凝剂血液标本)HBsAg阳性检出率分别为0%、33.3%和0%。C组(含血细胞标本)HBsAg阳性检出率分别为22.2%、66.7%和100%。结论引起结果有误的原因有外源性和内源性,其中最主要的是标本有溶血或者浑浊现象。为了最大限度地减少误差的发生,要对血清标本的不同情况采取相应的处理。

神经元特异性烯醇化酶对病毒性脑炎患者脑损伤的监测和评估

目的通过测定病毒性脑炎(VE)患者治疗前和治疗后脑脊液(CSF)中神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量,探讨NSE含量变化对VE病情监测及预后评估价值。方法收集2010年6月-2011年12月河北医科大学第二医院神经内科住院患者60例,并将60例患者参照黄如训主编的《临床神经病学》提出的诊断标准进行分组:VE组40例和非VE组20例。结果 VE组治疗前CSF中NSE平均含量值为14.71±2.37μg/L,VE组治疗后CSF中NSE平均含量为12.12±2.38μg/L,非VE组中NSE平均含量值为6.26±2.34μg/L,两组间比较,P<0.05。结论病毒感染中枢神经系统后,使脑神经细胞变性、死亡,对患者神经系统功能造成不可逆性的损伤;动态观察CSF中NSE水平含量变化对VE患者的病情监测及预后评估有重要意义。

电化学发光免疫法在孕前乙型肝炎及甲状腺功能异常筛查中的作用

目的分析电化学发光免疫法筛查孕前乙型肝炎(乙肝)及甲状腺功能异常的效果。方法320例进行孕前筛查的育龄女性作研究对象,均使用电化学发光免疫法(ECLIA)与酶联免疫吸附测试(ELISA)进行筛查。比较两种检测方式的乙肝病毒指标[乙肝核心抗体(HBcAb)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝e抗原(HBeAg)]及甲状腺功能指标[血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))、血清游离甲状腺素(FT_(4))、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]检测结果,两种检测方式的乙肝病毒、甲状腺功能异常检出率。结果ECLIA检测乙肝病毒指标HBcAb、HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBeAg的阳性率略高于ELISA,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。ECLIA检测甲状腺功能指标FT_(3)、FT_(4)、TSH、TGAb、TPOAb的阳性率略高于ELISA,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。ECLIA对乙肝病毒、甲状腺功能异常的检出率分别为25.31%、53.44%,略高于ELISA检测的21.25%、47.81%,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论对孕前进行乙肝病毒与甲状腺功能筛查的育龄女性使用ECLIA和ELISA进行筛查,均能判断受检者情况,但效果略佳的是ECLIA,可将其作为筛查首选。

兔眼小梁切除术后滤过泡组织血管内皮生长因子和转化生长因子β2的相关性研究

目的观察兔眼小梁切除术后滤过泡瘢痕形成过程中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)与转化生长因子(transforming growth factor beta 2,TGF-β2)的表达变化及相关性,探讨VEGF和TGF-β2和在滤过泡瘢痕形成中的关系。方法随机选取24只青紫蓝兔双眼中的一眼作为实验组,行青光眼小梁切除术,另一眼不行手术作为正常对照组,另取2只兔不手术作为空白组。术前及术后第1、3、5、7、14、21天,观察滤过泡炎症反应和血管增生情况,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测量兔眼滤过泡组织中VEGF及TGF-β2的含量。结果与对照组比较,手术后滤过泡组织中VEGF和TGF-β2表达上调,分别于手术后第5、7天达高峰,差异有统计学意义(P<0.05),同一组织的VEGF和TGF F-β2含量有相关性(P<0.05)。结论青光眼小梁切除术后滤过泡组织内VEGF和TGF F-β2的含量明显增加,与瘢痕化进程一致,两者含量有相关性。

血清HBsAg、抗-HBs双阳性结果的初步分析

目的对临床检测中少见的HBsAg和抗-HBs双阳性结果进行分析。方法对ELISA法检测的HBsAg和抗-HBs双阳性的68份血标本进行化学发光微粒子免疫方法(CMIA)复检,仍为双阳性的标本定量检测其HBV-DNA。结果经复检有45例(66.2%)仍然为双阳性,其中32例为HBsAg、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性,阳性率71.1%(32/45),13例HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBc阳性,阳性率28.9%(13/45),45例样本中有25例血清HBV-DNA检测阳性,阳性率为55.6%。结论 HBsAg和抗-HBs双阳性原因较多,操作或ELISA试剂是原因之一,抗-HBs阳性患者HBV-DNA往往存在复制。

HBV标志物检验结果互认研究

目的探讨不同医院之间HBV标志物检测结果的可比性,为广州地区实现医院之间检验结果互认的可行性提供实验依据。方法收集30例不同浓度的新鲜血清用同一厂家ELISA试剂在5家医院进行HBV标志物的检测,以了解不同医院之间检测结果的可比性;同时采用统一分装的7个浓度的标准液在5家医院用酶标仪进行检测,以评价不同医院间酶标仪测定结果的差异;此外还召集原5家医院的原检测人员到同一医院对原30例标本进行HBsAg和抗-HBs的检测,以了解同一条件下不同操作者之间检测结果的差异。结果 5家医院HBV标志物检测结果的总符合率均未能达到100%。其中HBsAg(87.0%)和HBeAg(93.3%)的总符合率较高,而抗-HBs(53.3%)、抗-HBe(60.0%)和抗-HBc(80.0%)的总符合率较低;统一分装的标准液在5家医院用酶标仪进行检测结果差异也较大;同一浓度在不同医院间测定结果具有显著性差异,P<0.05。但在同一条件下不同操作者之间检测结果的总符合率则明显提高,P<0.05。结论检测仪器、试剂和操作者的水平均可影响乙肝两对半的定性检测结果,不同医院之间乙肝两对半定性结果实现互认尚待进一步研究。

鲁斯可皂苷元多克隆抗体的制备

目的:通过人工抗原的构建,制备针对鲁斯可皂苷元(ruscogenin,RUS)的特异性抗体,为建立鲁斯可皂苷元的免疫生物分析方法奠定基础。方法:将鲁斯可皂苷元衍生为带有两个-COOH臂的双丁二酸单酯衍生物(succinylated ruscogenin,RUS-2HS)并采用活泼酯法使其与牛血清白蛋白(BSA)相结合,成为全抗原(RUS-2HS-BSA)免疫新西兰兔,制备抗鲁斯可皂苷元的多克隆抗体,并用酶联免疫吸附测试对抗血清进行鉴定。以同样的蛋白质偶联方法制备鲁斯可皂苷元与卵清蛋白的结合物(RUS-2HS-OVA)作为包被抗原。结果:抗血清的效价为1∶25600,理想的包被抗原浓度为1.563μg.mL-1,相应抗血清工作浓度为1∶8000。结论:运用活泼酯法可制备鲁斯可皂苷元的人工抗原,进一步免疫可获得抗鲁斯可皂苷元的特异性抗血清。

GIF和Rab3a的表达纯化及其在AD病人脑提取液中的含量

目的 验证AD病人脑中存在GIF和Rab3a蛋白。方法 采用GST表达系统在E coli中把构建好的质粒 pGEX - 4T -GIF、pGEX - 4T -Rab3a ,经转化、诱导表达、亲和层析、凝血酶切和进一步纯化 ,得到GIF和Rab3a目的蛋白。利用已纯化好的目的蛋白做标准品 ,用直接型酶联免疫吸附测试 (ELISA)方法初步测定AD病人脑提取物中GIF和Rab3a的蛋白含量。结果 通过电泳表明 ,成功表达纯化得到了G蛋白Rab3a和GIF蛋白 ,利用Rab3a和GIF多克隆抗体用ELISA方法对AD症病人脑提取物中两蛋白的含量进行初步测定 ,结果表明在AD症病人的脑提取物中GIF的含量应为 98 89ng/ml左右、Rab3a的含量为 2 6 6 7ng/ml左右。 结论 在AD病人脑中存在GIF和Rab3a这两种物质。