犬粪便棘球绦虫抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法建立与应用

目的研究双抗体夹心酶联免疫吸附检测犬粪便棘球绦虫虫体抗原的方法并评价其在实际工作中的应用价值。方法实验犬12只，分实验组和对照组，实验组用活化绵羊源原头蚴（G1型）作人工感染；感染后0～8周内收集粪便，56d宰杀实验犬，收集成虫；制备成虫抗原和虫体代谢／分泌抗原，蛋白酶K处理抗原并分别免疫成年绵羊和新西兰白兔；绵羊抗血清用80％饱和硫酸铵沉淀、透析，兔抗血清过IgG亲和层析柱，分别获得纯化抗体；观察犬粪便在PBS液中-80℃冷冻3d或在含1％Formalin的PBS液中70℃～80℃加热8h的处理方法对检出结果的影响。运用该方法对四川省甘孜县达通玛区4个乡的580只家犬吡喹酮每6月一次驱虫前后的粪抗原进行监测。结果试验系统的敏感性为92．3％，特异性为80％；粪抗原从感染后的第2～3周可检出；两种样品处理方法都可以灭活虫卵但不影响检出效果；检测方法可同时用于对细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫感染的诊断；达通玛区家犬粪抗原阳性率从2000年的50％下降到2005年的17％。结论检测方法具有较高的特异性和敏感性；推荐粪便用加热的方法处理可以灭活虫卵以防止生物污染；该方法可以在基层推广应用。

双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验法检测丙型肝炎病毒抗体的应用效果分析

目的探讨双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测丙型肝炎病毒抗体的应用效果,旨在分析两种检测方法的灵敏度及特异度,为血液筛查提供参考。方法选取2016年3月至2018年3月我县无偿献血者血液标本1200例作为研究对象,其中抗丙型肝炎抗体(抗-HCV)阴性标本1123例,抗-HCV阳性标本77例。采用双抗原夹心法与间接ELISA法分别进行检测,记录检测结果与丙型肝炎病毒核酸符合率,并进行统计学分析。结果77例抗-HCV阳性标本中,双抗原夹心法阳性检出率96.1%(74/77)高于间接ELISA法87.0%(67/77),差异具有统计学意义(P<0.05),双抗原夹心法检测及间接ELISA法分别有3份和10份假阴性样本出现;双抗原夹心法检测准确度、灵敏度、特异度均高于间接ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在检测丙型肝炎病毒抗体的方法中,相比于间接ELISA法,双抗原夹心ELISA法的检测结果较为理想,能够有效提高其阳性检出率、准确度、灵敏度及特异度。

酶联免疫吸附双抗原夹心法检测人畜布氏菌抗体的研究

目的为人畜布氏菌病血清学诊断、监测及流行病学调查提供实用和简便的一种酶免疫试验技术。方法在制备高滴度布氏菌抗原辣根过氧化物酶结合物及其冻干制品基础上,应用酶联免疫吸附双抗原夹心法即双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)、试管凝集试验(SAT)及虎红平板凝集试验(RBPT)对从山西省布氏菌病疫区收集的布氏菌病患者、布氏菌感染羊、牛、猪以及健康人、羊、牛、猪共计290份血清进行对比检测。结果上述3种试验对健康人、羊、牛、猪共计140份血清检查均为阴性反应,用DAgS-ELISA对布氏菌感染人、羊、牛、猪共计150份血清检查,其阳性率分别为91.4%、74.6%、66.7%及66.7%,从总体而言,检查的特异性及敏感性,以DAgS-ELISA优于SAT及RBPT。结论双抗原夹心酶联免疫吸附试验检测人畜布氏菌抗体,不仅特异、敏感、简便,而且制备一种布氏菌抗原酶结合物及其冻干制品,可用于人及各种动物布氏菌抗体的检测,值得推广应用。

双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测布氏菌抗原的实验研究

目的 建立检测布氏菌抗原特异、敏感和快速的试验方法。方法 在制备高滴度布氏菌抗体辣根过氧化物酶结合物及其冻干制品基础上 ,建立检测布氏菌抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (DAbS -ELISA) ,包括常规DAbS -ELISA及快速DAbS -ELISA。用建立的两种DAbS -ELISA法对布氏菌菌体抗原及可溶性抗原进行有关其特异性及敏感性对比观察 ;同时对模拟的这些抗原污染的饮用水标本进行对比观察。结果 常规DAbS -ELISA检测布氏菌 5 44A、16M、13 3OS及 10 4M的菌体抗原以及布氏菌 16M可溶性抗原的敏感性分别为 0 .2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190万菌 /ml、2万菌 /ml和 0 .0 12 μg/ml ;用快速DAbS -ELISA法的敏感性分别为 2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0万菌 /ml和 1.2 μg/ml;同时用这两种DAbS -ELISA检测上述抗原污染的饮用水标本其敏感性分别为 0 .2 2万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0万菌 /ml和 0 .0 12 μg/ml ;以及 2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0 0万菌 /ml和 1.2 μg/ml。而且这两种DAbS -ELISA法检测不含布氏菌抗原的所有对照均为阴性反应。结论 双抗体夹心酶联免疫吸附试验是检测布氏菌抗原的特异、敏感、快速和适用的试验方法。

酶联免疫吸附测定与双抗原夹心法检测抗-HIV比较

目前血站检测无偿献血者的抗-HIV(人类免疫缺陷病毒HIVⅠ型和Ⅱ型抗体)一般采用的是间接酶联免疫吸附测定(ELISA)法,此方法简便快捷,具有较高的灵敏度和特异性,且价格便宜,适用于献血员的筛选.

双抗夹心法酶联免疫吸附试验影响因素探析

目的探析双抗夹心法酶联免疫吸附试验中牛血清清蛋白封闭,吐温20及浓度,样品与检测抗体的加样方式及孵育温度对酶联免疫吸附试验检测结果的影响。方法双抗夹心法酶联免疫吸附试验检测人白细胞介素(IL)-1Ra细胞因子作为模型,检测封闭条件,吐温20及其不同浓度,样品与检测抗体分开孵育及共同孵育,酶联孵育温度对标准品浓度与OD值关系的影响。结果酶联免疫吸附试验不封闭、洗液吐温浓度为0.05%且孵育温度为37℃的R^2=0.995 7;BSA封闭的R^2=0.981 1;洗液中吐温浓度0.005%时R^2=0.991 5,0.5%时R^2=0.9868;样品和检测抗体一同孵育1h或2h的R^2分别为0.964 5和0.874 2;孵育温度为25℃的R^2=0.996 1。结论BSA封闭步骤对低浓度的样品检测灵敏度不强;样品和检测抗体及酶稀释液中必须含有吐温20且浓度在0.05%条件下最合适;样品和检测抗体共同孵育会影响对高浓度样品的检测;37℃和25℃的孵育温度条件下的酶联免疫吸附试验检测灵敏度没有差异,但25℃孵育可以降低OD值背景。

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测鱼糜制品中鸡蛋卵白蛋白

目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附(sandwich enzyme linked immunosorbent assay,sELISA)法检测鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)的方法,组装定量检测鱼糜制品中OVA含量的ELISA检测试剂盒。方法确定各步骤反应时间,使用棋盘法确定捕获抗体和检测抗体的最佳工作浓度,建立检测方法并对其性能进行评价。结果反应最佳条件为:抗原孵育20 min,检测抗体孵育20min,酶促反应显色10 min。兔抗OVA抗体为捕获抗体,工作质量浓度为1μg/mL,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记兔抗OVA抗体为检测抗体,1:5000(V:V)稀释。采用四参数逻辑曲线拟合标准曲线,所建立sELISA方法的检测范围为8.5~200.0 ng/mL,检出限为3.5 ng/mL,定量限为8.5 ng/mL。批次内和批次间的变异系数分别为2.31%~4.58%和6.06%~12.23%;鱼糜基质中的回收率为80%~130%;测得28种常见食物样品中4种样品的交叉反应率小于0.002%;试剂盒在4℃保存6个月期间,标准品检测结果的变异系数为4.29%~18.91%。结论建立的方法快速、灵敏、准确、稳定性好,可用于鱼糜制品中鸡蛋OVA的定量检测。

酶联免疫吸附试验夹心法检测解脲脲原体方法的建立

目的为了提高解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)检测的快速性。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法检测UU抗原并与传统的培养法相比较。结果ELISA夹心法敏感度为92.6%,特异度为97.4%,最低能够检测出蛋白含量为5～10ng/ml的UU抗原。结论ELISA夹心法是一种敏感、方便、快捷、适合大规模标本检测解脲脲原体的方法。

双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性的影响

目的:探究双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测灵敏度及特异性的影响。方法:选取2016年5月~2017年4月我院进行手术和血液透析前抗-HCV检测的患者270例,经血液筛查(荧光定量PCR法)抗-HCV阳性12例,抗-HCV阴性258例,采用双抗原夹心酶联免疫吸附法(ELISA)和间接ELISA分别对270例患者血清进行抗-HCV检测,比较两种检测方法的特异性、灵敏度。结果:双抗原夹心ELISA法灵敏度、特异性均高于间接ELISA法(P<0.05)。结论:双抗原夹心酶联免疫吸附试验可提高丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性,可作为临床血液标本筛查首选方法。

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测杏仁过敏原苦杏仁球蛋白

提取中国甜杏仁过敏原蛋白苦杏仁球蛋白,分别制备兔和鼠多克隆抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法。结果表明:对甜杏仁中苦杏仁球蛋白的检测限为(6.36±1.02)μg/L;对中国苦杏仁及美国大杏仁中苦杏仁球蛋白的检测限分别为(12.11±1.70)μg/L和(18.95±1.52)μg/L,且与常见的14种植物性蛋白没有交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。将该方法用于法式小面包、饼干和脱脂牛乳中杏仁过敏原的检测,苦杏仁球蛋白的添加回收率为78.94%～125.15%,且相对标准偏差均低于5.81%。

酶联免疫吸附试验与电化学发光免疫法检测孕妇乙型肝炎表面抗原效果

目的:探讨酶联免疫吸附试验在孕妇乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的诊断效果及与电化学发光免疫法符合率。方法:选取2016年1月—2018年1月本院收治的孕妇88例,分别应用酶联免疫吸附法(ELISA)和电化学发光免疫法(ECLIA)检测妇HBsAg,比较两种方法检测效果。结果:两种方法检测HBsAg阳性符合率、检测效能及对血清HbcAb和HbsAb指标项检测结果均未见差异(P>0.05)。结论:对孕妇HBsAg进行检测,ELISA和ECLIA检测结果相同,均具有较高的检出率。

夹心酶联免疫吸附试验检测人表皮生长因子的方法建立及其应用研究

目的:建立临床适用的表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)酶联免疫检测方法,探讨EGF在临床常见肿瘤患者血清中的含量变化规律。方法:采用EGF单抗包被酶标板,兔抗EGF多抗为二抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作为酶标抗体建立夹心法ELISA检测临床常见肿瘤患者及健康体检人群的血清EGF含量。结果:建立的EGF酶联免疫吸附法最小检测限达15.6ng/L,批内精密度为8.7%,批间精密度为11.6%,平均回收率为94.7%,符合临床检测要求。血清EGF含量在31名正常人为(1.305±0.382)ng/mL,24名乳腺癌病人术前值为(0.729±0.347)ng/mL,术后为(0.711±0.332)ng/mL,17名结直肠癌病人术前为(0.678±0.311)ng/mL,术后为(0.658±0.298)ng/mL,19名胃癌病人术前为(0.598±0.224)ng/mL,术后为(0.614±0.257)ng/mL。各肿瘤组患者血清EGF水平较健康对照组明显降低(P<0.01)。结论:建立了适用于临床检测的EGF酶联免疫检测方法,肿瘤患者血清中EGF含量较健康对照组明显下降,该检测方法的建立为进一步探讨肿瘤的发病机制提供了有效的手段。

一种适用于教学的酶联免疫吸附试验的抗原抗体系统制备

目的:探讨设计一种教学成本低、便于教学使用、有助于培养医学生综合实验设计能力和提高实验基本操作技能的酶联免疫吸附实验抗原抗体系统。方法:以提纯的人IgG免疫家兔获取兔抗人lgG抗体,再用其包被酶标反应板,以人血清(人IgG)作抗原,用酶标记羊抗人IgG抗体结合抗原及催化底物显色反应。结果:该双抗体夹心法,底物显色反应清楚肉眼即可作出判定,非特异干扰极小。结论:我们设计的酶联免疫吸附实验——双抗体夹心法原理清晰、便于理解和掌握、教学成本较低、结果易于观察、便于教学大量使用。

乙型肝炎表面抗原金标法阳性而酶联免疫吸附试验阴性的原因分析

我国是乙型肝炎（下称乙肝）病毒感染的中度流行区，乙肝病毒携带者数量已由9．75％降至7．18％。输血是乙肝病毒经血传播的重要途径之一，为了防止乙肝病毒经血传播，提高血液质量，血站现在一般都用胶体金法和酶联免疫吸附试验（ELISA）对献血者的血液样本进行筛查检测。但在日常工作中会碰到两种方法检测结果不一致的现象，现对胶体金法阳性而ELISA结果阴性的现象分析如下。

酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎表面抗原出现假阳性的原因探讨

乙型肝炎是一个世界性公共卫生问题，而我国是乙型肝炎的高发区之一。据估计，我国乙型肝炎表面抗原携带者约1．2亿，是当前严重危害人们身体健康的传染病之一。乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎的感染指标之一，

抗-HCV双抗原夹心酶联免疫法检测试剂的应用评价

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的世界性传染病,主要通过输血和使用血液制品等途径传播。为控制HCV经血传播,要求对献血员进行抗-HCV检测。目前使用的抗-HCV检测试剂,采用的是间接酶联免疫法第三代诊断试剂。

抗-HCV双抗原夹心酶联免疫法检测试剂的应用评价

目的对北京万泰生物药业有限公司生产的丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)双抗原夹心酶联免疫法(简称双抗原夹心法)诊断试剂盒进行应用评价。方法采用抗-HCV双抗原夹心法诊断试剂盒和间接酶联免疫法(简称间接法)诊断试剂盒同时对相同的标本进行检测,将各方法检测结果为阳性的标本通过RIBA试验作进一步确证,根据RIBA结果计算各方法的特异性,进行比对。结果共检测1820份血浆标本,其中3家试剂检测均为阴性的标本1735例、均为阳性的标本26例、双试剂阳性标本14例、单试剂阳性标本26、可疑标本19个;采用RIBA试剂对85份阳性及可疑标本进行检测,

化学发光法、酶联免疫吸附试验、金标法检测乙型肝炎病毒表面抗原比较分析

目的分析化学发光法、酶联免疫吸附试验、金标法等不同免疫检测方法在乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测中的应用价值。方法选取211例自2018年5月—2020年4月在该院进行诊疗的疑似乙型肝炎病毒患者,为所有研究对象实施化学发光法、酶联免疫吸附试验、金标法检测,对比3种检测方法的应用价值。结果金标法检测准确度83.89%、敏感度77.55%、特异度89.38%、阳性预测值86.36%、阴性预测值82.11%;酶联免疫吸附试验检测准确度91.47%、敏感度88.78%、特异度93.81%、阳性预测值92.55%、阴性预测值90.60%;化学发光法检测准确度96.21%、敏感度96.94%、特异度96.46%、阳性预测值95.96%、阴性预测值97.32%。酶联免疫法检测敏感度高于金标法,差异有统计学意义(P<0.05),化学发光法检测准确度、敏感度及阴性预测值均高于金标法,差异有统计学意义(P<0.05),酶联免疫吸附试验与化学发光法检测准确度、敏感度等对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论金标法HBsAg检测价值较低,化学发光法检测价值略高于酶联免疫吸附法,联合检测有助于提高患者诊断准确率,可有效降低假阳性及阳性率。

三种酶联免疫吸附试验法试剂对低值乙型肝炎病毒e抗原检出的比较

乙型肝炎病毒e 抗原（HBeAg）为一种可溶性蛋白抗原 ,是乙型肝炎（HBV） 活动性复制和有传染性的重要标志 ,HBeAg 检测对于乙型肝炎的诊断、机体免疫状态的评价及病程的转归具有重要意义.目前广泛应用的酶联免疫吸附试验（ELISA）法存在不同的特异性和敏感性的差异 ,且结果仅可提示抗原是否存在.微粒子酶免法（MEIA）为一种新的检测方法 ,可半定量地检测HBeAg , MEIA 法特异性强和敏感高 ,更客观地反映其存在情况[1].本研究对720 份血清HBeAg 在半定量检测同时进行了定性检测 , 根据MEIA 半定量结果及3种ELISA 定性试剂检测结果比较 ,可以得到ELISA 定性检出低值血清HBeAg 的符合率.