酶联免疫捕获法检测耳鼻喉科患儿血清过敏原特异性IgE的价值

目的探讨酶联免疫捕获法检测对耳鼻喉科患儿血清过敏原特异性IgE(specific immunoglobulin E,sIgE)水平分析的价值。方法选取广州市中西医结合医院2019年3月—2022年2月收治的耳鼻喉科患儿血清样本300份,使用酶联免疫捕获法检测其粉尘螨、户尘螨、狗毛屑、猫毛屑、艾蒿花粉、链格孢共计6种常见的吸入物过敏原sIgE,记录精密度、灵敏度、线性范围等数据,并与Immuno CAP系统的评价效能进行对比分析。结果酶联免疫捕获法检测6种过敏原sIgE的批内变异系数(coefficient of variation,CV)值均<7%,而总CV%<8%。6种过敏原的定量限(limit of quantitation,LOQ)值均低于0.35 kU/L,均为阴性。相关系数均大于产品说明书的阈值0.975,线性范围良好。不同过敏原的回归方程斜率差异均有统计学意义(P<0.05)。两系统定量检测结果相关性较强。两种检测方法的阳性符合率为77.33%,阴性符合率为98.67%,Kappa值为0.833,P<0.05。结论酶联免疫捕获法检测对耳鼻喉科患儿血清过敏原特异性IgE水平的评价效能,具有较好的精密度与灵敏度,且与Immuno CAP系统的相关性较好,作为一种自动化全定量检测手段,能够满足临床耳鼻喉科常见过敏原检验的要求,具有使用价值。此文的研究结果为儿童耳鼻喉科常见过敏性疾病的诊断和鉴别诊断后期标准制定提供了借鉴内容。

采用酶联免疫捕获法和荧光酶联免疫吸附法检测过敏原IgE抗体的比较分析

目的:对酶联免疫捕获法的ALLERG-O-LIQ系统和荧光酶联免疫吸附法的ImmunoCAP系统检测过敏原特异性IgE抗体的一致性进行对比观察。方法:研究对象为我院2008～2010年就诊于变态反应科、儿科的病例,采用2种不同的酶联免疫吸附法检测屋尘螨(D1)、粉尘螨(D2)、狗毛屑(E5)、德国小蠊(I6)、鸡蛋(F1)、牛奶(F2)、花生(F13)、蟹(F23)、虾(F24),共9种过敏原特异性IgE抗体检测,将2种检测结果进行一致性检验和线性回归分析。结果:共进行了520项次过敏原特异性IgE检测,两种系统对吸入性过敏原特异性IgE抗体定量检测结果一致性良好(P<0.05),特异性IgE结果:屋尘螨>粉尘螨>德国小蠊>狗毛屑;而对食物过敏SIgE抗体检测结果的相关度较吸入过敏原低,特异性IgE结果:蟹>虾>花生>鸡蛋>牛奶。结论:ALLERG-O-LIQ系统和ImmunoCAP系统都属于新一代易操作的过敏原检测系统。2种检测方法一致性良好,结果偏离度较小,呈线性回归分布。因此,对于评估血清中的特异性IgE来说,ALLERG-O-LIQ系统是一个可靠的、经济的临床诊断系统。其检测的结果与ImmunoCAP系统的检测结果比较相符合。

酶联免疫捕获法检测常见过敏原的应用评价

研究常见过敏原检测中酶联免疫捕获法的应用价值。 方法 选取2019年1月-2021年1月我院收治的128例过敏性反应患者为研究对象,采用酶联免疫荧光测定法与酶联免疫捕获法测定常见SIgE抗体,分析检测结果。 结果 对4种过敏原进行阴阳定性分析结果显示,D1(屋尘螨)、F13(花生)及I6(德国小蠊)一致性良好,F2(牛奶)不存在一致性;对常见过敏原进行分级别对比一致性分析结果显示,D1、I6过敏原一致性较差,F2标本不存在一致性,F13过敏原存在中等一致性。 结论 以UniCAP系统为金标准,酶联免疫捕获法测定常见过敏原,灵敏度均较好,可为临床诊治提供可靠依据。

核酸检测法对甲型病毒性肝炎的免疫检验价值分析

目的探讨核酸检测法对甲型病毒性肝炎的免疫检验价值。方法78例抗-甲型肝炎病毒(HAV)免疫球蛋白M(IgM)检验标本中呈现阳性的患者作为研究对象,随机分为实验组与对照组,每组39例。实验组采用核酸检测法进行检验,对照组采用酶联免疫捕获法进行检验。对比两组检验结果的准确率。结果实验组检验结果准确36例,检验准确率为92.3%;对照组检验结果准确25例,检验准确率为64.1%;实验组检验准确率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在对感染性疾病甲型病毒性肝炎进行检验时采用核酸检测法,其对甲型病毒性肝炎的检验准确率更高,为后续的疾病干预与治疗提供保障,可以在临床检验中推广使用。

重组人巨细胞病毒(HCMV)优势表位嵌合抗原的构建表达以及捕获法检测IgM抗体

通过计算机软件分析选择巨细胞病毒优势抗原表位,用聚合酶链式反应(PCR)扩增优势表位基因,构建了巨细胞病毒多优势表位嵌合抗原表达载体p4T-UL32-UL44-UL80a-UL83,转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,GST亲和层析法获得高纯度嵌合抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记嵌合抗原,并构建捕获法检测血清中的抗HCMVIgM抗体。结果表达的优势表位嵌合抗原具有很好的抗原性,用其建立的捕获法检测确诊的30份阳性和63份儿童阴性血,阳性检出率和阴性检出率都是100%说明用嵌合抗原构建的捕获法检测血清中抗HCMVIgM抗体具有更高的灵敏度和检出正确率,其检测水平已经达到国外的同类产品水平。

凉山彝族自治州2011—2013年基于BED捕获酶联免疫法估算HIV-1新发感染率

目的 了解凉山彝族自治州HIV感染情况及新发感染率。方法 收集凉山州2011-2013年每年医疗机构HIV监测人数分别为412 608例、393 699例及443 025例，用酶联免疫和蛋白印迹方法检测出HIV抗体阳性样本数量分别为4 480、3 999及4 719份，再应用BED捕获酶联免疫法（BED-CEIA）进一步检测，排除HIV-1既往阳性样本，得出新发感染所占比例，进而估算每年的HIV-1新发感染率。结果 凉山州2011-2013年HIV阳性感染率分别为1.09%、1.02%和1.07%，新发感染率（95% CI）分别为0.34（0.32～0.37）%、0.62（0.58～0.66）%和0.61（0.57～0.65）%。2011-2013年HIV新发感染人群主要集中在男性，分别为64.24%（433/674）、59.22%（504/851）和58.37%（495/848）；彝族分别为84.72%（571/674）、94.59%（805/851）和84.20%（714/848）；已婚人群分别为61.57%（415/674）、61.45%（523/851）和60.50%（513/848），文盲和小学文化程度人群分别为60.24%（406/674）、61.57%（524/851）和60.03%（509/848）。结论 HIV新发感染率比感染率更能反映艾滋病的流行状况，研究结果提示凉山州艾滋病疫情形势仍然严峻，需加大防控力度。

应用捕获酶联免疫测定法估算2010-2012年浙江省重点人群人类免疫缺陷病毒1型新发感染率

目的估计浙江省2010-2012年重点人群人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)新发感染情况及其发展趋势。方法收集浙江省2010-2012年665例HIV哨点监测阳性样本和4030例新报告确证阳性病例样本,应用BED HIV-1捕获酶联免疫测定法(BED HIV-1 capture enzyme immunoassay,BED-CEIA)检测新发感染,利用公式I=[F×(365/W)×R]/[N+F×(365/W)×R/2]×100%估算人群的HIV-1新发感染率,并对同期新报告确证阳性病例计算新发感染比例。结果浙江省2010-2012年HIV监测哨点重点人群的男男性行为人群(men who have sex with men,MSM)HIV-1新发感染率最高,分别为3.52%(2.22%～4.83%)、6.63%(4.65%～7.94%)和6.33%(4.83%～7.84%),其他人群均较低。浙江省2010-2012年报告阳性病例新发感染比例分别为27.08%、26.09%和30.35%,2011年和2012年MSM报告阳性病例新发感染比例分别为40.17%和42.05%。结论浙江省MSM人群HIV-1新发感染率2010-2011年增长较快,2011-2012年稍有下降但仍维持较高水平,其他人群相对较低。报告阳性病例中MSM人群新发感染比例也较高。浙江省MSM人群HIV流行形势仍然非常严峻,应加大对该人群的干预力度。

BED捕获酶联免疫方法在宿州市HIV-1新近感染监测分析中的应用

了解宿州市新报告HIV感染病例中新近感染病例特征,为开展有针对性的预防干预工作提供依据。应用BED捕获酶联免疫方法 （BED-CEIA）对2011-2013年宿州市新发现的65例HIV-1报告病例进行新近感染检测。结果显示：23例属于HIV-1新近感染病例,新近感染检出率35.39%;2011-2013年HIV-1新近感染率0.007%（95%CI0.005～0.009）;男性占86.96%（20例）;18～50岁占91.30%（21例）;农民/民工占56.52%（13例）;经性传播感染占95.65%（22例）。新近感染病例以基层劳动的男性、青壮年为主,人群性途径感染形式严峻;应采取有效的针对性干预措施,防止HIV由职业人群向一般人群蔓延。

2种方法检测常见过敏原特异性IgE的比对分析

目的分析酶联免疫荧光测定法和酶联免疫捕获法检测4种常见过敏原特异性IgE(sIgE)的结果的一致性。方法采用2种方法检测屋尘螨(D1)、德国小蠊(I6)、牛奶(F2)、花生(F13)4种常见过敏原sIgE。结果 2种方法对D1、I6、F13sIgE的定性检测结果具有良好的一致性。将2种方法检测的4种常见过敏原sIgE定量结果进行分级,再对2种方法的定量分级结果进行一致性分析,显示2种方法的F13sIgE定量分级结果存在中等一致性(Kappa=0.489),D1和I6sIgE定量分级结果一致性较差(Kappa分别为0.400、0.305)。以酶联免疫荧光测定法为"金标准",显示酶联免疫捕获法对4种过敏原sIgE的检测灵敏度都比较好,但特异性并不十分理想。结论酶联免疫捕获法与酶联免疫荧光测定法的检测结果具有一定的一致性,其灵敏度和特异性尚可,可作为过敏原检测的初筛方法。

滤纸片干血斑在HIV-1 BED-CEIA新发感染检测方法中的应用

目的探讨在HIV-1 BED-CEIA新发感染检测中应用滤纸片干血斑的价值。方法研究纳入22个艾滋病自愿咨询检测(VCT)中心10226名咨询者血浆及干血斑样本作为目标实施HIV抗体检测,对通过免疫印迹法(WB)明确诊断为350例HIV感染患者的血浆样本及干血斑样本需同时实施BED-CEIA检测,观察滤纸片干血斑在HIV-1 BED-CEIA新发感染检测方法中稳定性、重复性,对两种样本检测结果存在的差异性进行对比。结果在HIV-1 BED-CEIA新发感染检测中应用滤纸片干血斑稳定性、重复性较高,重复性R^(2)值可高达0.9551。350例HIV感染患者样本检测结果中,其中295例患者样本被同时评估为长期感染,53例患者样本被同时评估为新近感染,两种样本对HIV BED-CEIA新发感染评估判定结果呈一致性(R^(2)值=0.95),一致性为99.42%。血浆样本及干血斑样本得到不同结果,样本An值均处于临界值附近(P<0.05)。结论在HIV-1 BED-CEIA新发感染检测中应用滤纸片干血斑的价值较高,检测结果稳定性、重复性较好,虽然部分样本检测结果存在一定的差异,但与血浆样本检测结果两者之间存在较佳的等效性,可广泛应用于临床HIV-1 BED-CEIA新近感染检测中。

符克^(TM)酶联免疫捕获系统检测常见吸入物过敏原特异性IgE抗体

符克^(TM)(Fooke ^(TM))系统是国产自动化全定量过敏原s Ig E检测系统,是一种酶联免疫捕获法检测系统,已经用于检测常见吸入物过敏原特异性Ig E抗体(s Ig E)。本研究采用符克^(TM)系统检测户尘螨、粉尘螨、猫毛屑和狗毛屑过敏原slg E,试图评价符克^(TM)(Fooke ^(TM))系统在检测常见吸入物过敏原特异性Ig E抗体的精密度和灵敏度,并与Immunon CAP系统进行定量和定性比较。研究表明:符克^(TM)系统检测户尘螨、粉尘螨、猫毛屑和狗毛屑过敏原slg E的批内变异系数(CV)分别为3.33%、4.09%、5.83%和4.57%,均高于试剂盒标示精密度;定量测定下限(LOQ)分别为0.261 KU/L、0.255 KU/L、0.164 KU/L和0.269 KU/L,均低于厂商标示灵敏度。符克^(TM)系统和Immuno CAP系统定量检测数据进行线性回归分析表明,户尘螨、粉尘螨、猫毛屑和狗毛屑过敏原的直线回归决定系数分别为0.361、0.472、0.844和0.473,p<0.05,具有良好的线性相关性;符克^(TM)系统和Immuno CAP~系统阳性符合率中,粉尘螨阳性符合率最低(75.00%);户尘螨、粉尘螨、猫毛屑和狗毛屑过敏原阴性符合率均较高(均>85.00%);户尘螨、粉尘螨、猫毛屑和狗毛屑过敏原两系统Kappa值分别为0.907、0.813、0.757和0.855,具有较好的一致性。总体上,研究表明,符克^(TM)系统,作为国产自动化全定量过敏原s Ig E检测系统,用于检测常见吸入物过敏原slgE,具有较高的精密度和灵敏度,与Immuno CAP誖系统比较具有良好的相关性是一种具有较高的精密度和灵敏度,成本低的Elisa捕获检测系统,具有临床应用实用价值。

人类免疫缺陷病毒新近感染及其检测技术的研究进展

人类免疫缺陷病毒(HIV)感染使全球面临严重问题,而对HIV新近感染的检测是估算HIV新发感染趋势研究的新方向。HIV核心蛋白p24抗原可早期检出因而用于HIV新近感染的检测,但因其敏感性低,对群体发病率的估计存在局限性;HIV核酸检测用于新近感染的判断敏感性和特异性都较高,尤其是集合核酸技术的应用降低了核酸检测技术本身的高成本;BED(指HIV-1特异的B、E和D亚型)捕获酶联免疫法的数据结果则更能反映出新近感染高危因素以及其他方面的变化规律,对评估HIV新发感染动态趋势起到积极作用。

高危人群生殖器疱疹的血清流行病学调查分析

目的探讨高危人群生殖器疱疹(GH)的感染情况,为预防提供依据。方法通过对高危人群血清采用酶联免疫捕获法检测HSV-2特异性抗体IgM。结果共采集高危人群外周血483份,平均年龄25.2岁。HSV感染人数18例,感染率3.72%。结论高危人群HSV-2阳性率较高,对高危人群血清HSV-2的检测和行为干预,对于防止HSV性传播有着重要意义。

2011年-2015年宁夏男男性行为哨点人群人类免疫缺陷病毒-1新发感染率调查研究

目的调查2011-2015年宁夏地区男男性行为人群HIV新发感染率的变化趋势,为艾滋病防治提供科学依据。方法对2011-2015年男男性行为人群艾滋病哨点监测中发现的HIV-1感染者进行BED-CEIA检测,经灵敏度-特异性校正,计算该人群的HIV-1新发感染率,SPSS 17.0软件进行趋势性检验。结果 5年监测MSM人群共计2 000例,未婚MSM逐年增长,已婚逐年下降。确证HIV阳性123例,46例为新发现病例,5年新发感染率为2.88%~5.73%,差异无统计学意义(χ~2=2.478,P>0.05)。结论宁夏MSM人群HIV-1新发感染率持续处于一个水平,需重点关注此类人群的综合防治。

新建HIV-1新发感染快速检测方法与ELISA法的比较研究

目的初步评价艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)新发感染快速检测方法,在横断面现场调查人群样本中的应用能力,并分析抗病毒治疗对该方法的影响。方法应用该研究前期构建的金标银染免疫渗滤快速检测方法(简称快速检测法),检测2014年江西省国家级哨点新报告的HIV-1感染者和抗病毒治疗者的样本。将新发感染判定的结果与限制性抗原亲和力方法(LAg Avidity EIA,简称LAg法)、BED捕获酶免疫法(BED CEIA,简称BED法)进行一致性和相关性比较,进一步分析三种方法检测抗病毒治疗者样本的差异。结果纳入研究的新发感染者样本共122份,快速检测法与LAg法、BED法判定新发感染结果的一致率分别为94.26%和88.52%。快速检测法检测探针灰度值与LAg法和BED法的ODn值具有较高的相关性。R2分别为0.947 5与0.923 4。经配对卡方检验分析,快速检测法判定新发感染的比例显著低于BED法(P<0.001),而与LAg法差异无统计学意义(P=0.257)。纳入研究的抗病毒治疗者的样本共117份,快速检测法对其误判为近期的比率为16.24%(19/117),而BED方法和LAg方法的误判比率分别为16.24%(19/117)、14.53%(17/117)。另外,快速检测法对所有样本常规HIV抗体检测结果均正确。结论金标银染免疫渗滤快速检测方法检测HIV-1新发感染具有良好的准确性和实际应用性。但抗病毒治疗对快速检测法影响较大,应在横断面人群调查时删除抗病毒治疗样本。

ELISA法测定食蟹猴血清中抗PD-1单克隆抗体浓度

目的:建立灵敏度高、特异性好且快速的ELISA方法,用以测定食蟹猴血清中的抗PD-1单克隆抗体(代号BGB-A317)浓度。方法:建立间接ELISA方法对BGB-A317进行定量分析。测定原理:包被重组人PD-1,加入稀释的血清样品,之后加入稀释好的辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG(酶标抗体),再加入TMB底物进行显色和2 mol·L^(-1)硫酸作为终止液,在酶标仪上用双波长读取D_(450/630 nm)值,以标准曲线样品D_(450/630 nm)为纵坐标,以样品浓度为横坐标,进行非线性五参回归运算,得到标准曲线方程,将待测样品D_(450/630 nm)代入方程即可得到待测样品浓度。结果:建立并验证了该ELISA方法,定量范围为3~180 ng·mL^(-1)。精密度(板内和板间)均在±15%之内,准确度介于75%~125%;食蟹猴空白血清、样品稀释液和干扰单克隆抗体对BGB-A317在食蟹猴血清中的浓度测定无影响;稀释线性样品的精密度小于20%,准确度介于80%~120%;平行性样品的精密度为小于20%;BGB-A317在食蟹猴血清中室温放置4 h、-70℃以下放置70 d及反复冻融3次后均保持稳定,样品准确度均介于80%~120%。结论:方法学验证表明该间接ELISA方法具有良好的灵敏度、准确度、特异性和可重复性,可用于定量分析食蟹猴血清中BGB-A317的浓度。

肾移植术后巨细胞病毒pp65检测的临床意义

目的探讨肾移植受者术后,巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65的检测在活动性巨细胞病毒感染中的意义。方法用间接免疫荧光法检测肾移植受者术后HCMV-pp65,同时用酶联免疫捕获法检测HCMV-IgM抗体,共采集91份血标本。结果 91份血标本中,HCMV-pp65阳性24份(26.4%),HCMV-IgM抗体阳性4份(4.4%),在24例HC-MV-pp65抗原血症阳性的患者中,有20例出现HCMV感染症状及HCMV病。结论 HCMV-pp65在活动性巨细胞病毒感染的检测中具有早期、准确的优点,可辅助临床对HCMV感染进行早期诊断与治疗。

人巨细胞病毒UL32和UL44融合基因的表达及其抗原性分析

目的用聚合酶链式反应(PCR)扩增人巨细胞病毒UL32、UL44截短基因,构建pET-32a-UL32-UL44表达载体,转化宿菌大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,对目的蛋白进行纯化、标记HRP,用于检测IgM抗体。方法根据Gene-bank中HCMV的pp150、pp52蛋白序列,利用Protean计算机软件分析其亲疏水性和抗原性,选取适合的区段,根据其对应的UL32、UL44基因核苷酸序列设计合成引物,PCR扩增目的基因序列,经测序证明无误之后,克隆pET-32a-UL32-UL44重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行诱导表达,纯化目的蛋白,标记HRP,用ELISA捕获法对目的蛋白-HRP标记物的灵敏性和特异性等指标进行评价。结果成功构建pET-32a-UL32-UL44重组质粒,导入在BL21(DE3)菌株中,经诱导后目的蛋白表达于上清中,经纯化、标记HRP,标记物用于ELISA捕获法能够准确、特异地检测HCMV血清标本,80份血清检测结果显示其灵敏度可达92.5%,特异性达97.5%。结论 HCMV基因工程重组蛋白具有较好的免疫活性,为研制以基因工程重组抗原代替传统全病毒抗原的HCMV检测试剂盒打下了基础。

2012-2017年河源市麻疹血清学监测结果分析

目的对河源市2012-2017年麻疹血清学监测结果进行分析,了解其流行特点,及时发现易感人群和免疫接种薄弱人群,为制定麻疹防控策略提供科学依据。方法采集麻疹监测病例血清标本,用酶联免疫捕获法(ELISA)检测IgM抗体。结果2012—2017年共检测麻疹标本524份,阳性285份,阳性率为54.39%。麻疹发病及检出高峰在2012-2014年,2015-2017年相对偏低;5个年龄组中,0-7月组阳性率最高,为74.36%,8月-6岁组次之,为60.00%,其后依次是>22岁组(54.02%),7-14岁组(39.51%),15-22岁组阳性率最低(16.27%),不同年龄组间阳性率差异有统计学意义(χ^2=47.9333,P<0.05);132 例无免疫史的阳性病例中,6岁以下占85.61%(113/132)。结论河源市近三年麻疹活跃度明显降低,但是感染风险仍然存在,应加强重点人群管理。