间接酶联检测法浅谈

比较了间接酶联检测法和双抗体夹心法检测烟草花叶病毒(TMV)的结果,检测提纯的病毒和叶片榨汁中的病毒,间接酶联检测法的灵敏度都比夹心法高.

发展中国家幽门弯曲菌感染的诊断:两种酶联检测法的比较和血清流行率的研究

已经证实,无论发达国家还是发展中国家,B型胃炎和胃溃疡与幽门弯曲菌存在相关。一般来说,诊断幽门弯曲菌靠内窥镜活组织检查,分离细菌或显微镜鉴定胃窦部活检组织。受幽门弯曲菌感染的病人会发生全身性抗体反应,用血清学试验检测具有与内窥镜培养和活组织检查相较的敏感性和特异性。一些资料提示。

马铃薯普通花叶病毒(PVX)抗血清的制备和不同酶联免疫吸附检测法的对比试验

从一东农 30 3马铃薯的重花叶症状病株 ,经用千日红 (Gomphrenaglobosa)两次单斑分离获得一马铃薯普通花叶病毒 (PVX)毒源株 ,用普通烟 (Nicotianatabacum )繁殖病毒 ,参照S .M .PaulKhurana等人的方法提纯病毒 ,免疫家兔 ,获得了效价达 1∶5 12 ,非专化反应为 1∶4的马铃薯X病毒抗血清。把PVX抗血清用过碘酸钠氧化法制备成辣根过氧化物酶的结合物 ,其工作浓度可达到 1∶10 0 0以上。在这一基础上进行了直接酶联检测法 (DirectImmunosorbentAssay) ,间接酶联检测法 (IndirectImmunosorbentAssay)的对比试验。

酶联免疫吸附检测法检测全血中他克莫司浓度及其应用

目的：探讨酶联免疫吸附检测法（ＥＬＩＳＡ）检测全血中ＦＫ５０６浓度的准确性及其在器官移植术后抗排斥治疗中的应用。方法：采用酶联免疫吸附检测法，对５例肝移植术后患者不同时期全血中ＦＫ５０６谷值浓度进行监测，并结合临床调整剂量，分析该法的准确性及其对临床ＦＫ５０６应用的指导作用。结果：在３０５个血样的１３１次检测中，质控血样检测结果全部在控制范围内，高、低浓度两个质控的ＲＳＤ值分别为９．０９％和１１．９０％，监测下的ＦＫ５０６血药浓度控制与文献报道一致。结论：酶联免疫吸附检测法灵敏度高、特异性强，是一种较理想的ＦＫ５０６血药浓度常规检测方法，适宜在医院内开展。

酶联免疫吸附检测法的应用研究进展

酶联免疫吸附检测法(ELISA)由于具有灵敏、特异、简单、快速及易于自动化操作等优点而得到了快速发展,并且被广泛应用于多个领域。本文对ELISA检测法应用现状及优缺点进行综述,为今后ELISA检测法的更为广阔的应用与发展提供参考。

胆汁泡蛋白酶联免疫吸附检测法的建立与初步临床应用

目的 建立胆汁泡蛋白快速检测法 ,作为防治胆石症临床研究的指标。方法 提取 3 3 .5kd胆汁泡蛋白 ,建立酶联免疫吸附检测法 (ELISA)标准曲线 ,并应用ELISA药盒测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量 ,同时观察利胆冲剂、胆通胶囊等对泡蛋白的影响。结果 ELISA曲线方程为Y =0 .0 3 5X(r=0 .99) ;胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量分别为 (2 13 .4± 70 .1)mg/L、(179.8± 97.9)mg/L ,明显高于胆色素性结石症、非胆石症胆道疾病组以及正常人组 (P <0 .0 5) ,而后三者之间没有显著差异 (P >0 .0 5) ;利胆冲剂治疗两周后 ,胆汁和血清泡蛋白含量显著降低 ,而对照组和胆通胶囊治疗组未见明显变化。结论 胆汁泡蛋白的含量在不同人群差异显著 ;利胆冲剂等药物能降低胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量 。

酶联免疫吸附检测法在农药残留检测中的应用

随着农药种类和用量的不断增加,农药的残留对人体的危害以及食品进出口的影响日益严重,因此进行农药残留检测工作非常重要,其中最重要的是建立高效的检测方法。酶联免疫吸附检测法(ELlSA)特异性高、灵敏性强,在农药残留检测中的研究和应用也越来越多,本文综述了其在农药残留检测方面的应用现状、存在问题及建议。

酶联免疫吸附检测法临床应用进展

酶联免疫吸附检测法(ELISA)因具有简单、高效、灵敏、特异、稳定、试剂成本低等特点,被广泛应用于临床医学诊断和研究、食品安全检测等生命科学领域。近年来,ELISA在常规临床诊断应用基础上,通过研究者不断摸索和实践,在感染性疾病、呼吸系统疾病、循环系统疾病、泌尿系统疾病、内分泌及代谢性疾病、神经系统及精神疾病等诸多疾病实验室诊断方面取得新的进展。本文对近几年ELISA临床应用情况进行综述,对存在问题进行分析总结,并提出相应对策,以期为ELISA更好地服务于临床提供借鉴。

酶联放大安培检测基因传感器的封闭方式

在酶联放大安培检测过程中,酶和碱基链在金电极表面的非特异吸附是导致假阳性结果的主要来源.为减少非特异吸附,分别从封闭时间和封闭方式等考查巯基己醇(MCH)和牛血清白蛋白(BSA)对上述非特异性吸附因素的封闭效果.结果表明,BSA不论是对酶还是碱基链的封闭效果均优于MCH.经优化,确定BSA单一封闭剂(15min)为最佳封闭条件,并可用于急性早幼粒细胞白血病(PML-RARα)融合基因的检测.本方法可有效减少非特异吸附,缩短检测预处理时间,并使检测信号在一定程度上得到放大.

罗汉果甜苷V人工抗原免疫原性检测法的建立与评价

目的制备罗汉果甜苷V(mogroside V,MogV)-载体蛋白复合物人工抗原及抗血清,建立抗血清与MogV特异性反应的检测方法,为进一步制备MogV的单克隆抗体、建立快速检测MogV的ELISA法提供技术基础。方法将MogV与丁二酸酐、载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和人血清蛋白(HSA)反应偶联,制得半抗原-载体蛋白复合物后,通过紫外扫描光谱计算出结合的半抗原数目;以此抗原免疫Balb/c小鼠,制备抗血清,并通过ELISA法检测效价和特异性。结果合成的人工抗原MogV-HS-BSA结合比约为44∶1,MogV-HS-HSA结合比约为64∶1;通过免疫小鼠得到特异性针对MogV的抗血清,血清效价较高。结论 MogV人工抗原有较好的免疫原性,建立的免疫原性检测方法简便可行。

核酸适配体在酶联免疫吸附测定法中的应用

酶联免疫吸附试验是诊断技术的重要手段,其基础就是利用抗体检测复杂混合物中的靶标分子,例如细胞表面抗原,免疫原和食品污染物等。然而,适配体系统可以通过指数级富集的配体系统进化技术对ELISA方法进行改良。该技术可以产生一个核酸适配体用于识别各种生物分子,起到探针的作用。与抗体相比,其具有分子小,易被修饰,制造成本低并可用于芯片检测等优点,并有潜力成为抗体的替代品并在ELISA方法中发挥作用。本文对核酸适配体在酶联免疫吸附测定法中的应用进行了综述。

使用快速检测法检测抗HCV的几点体会

目的:抗HCV是HCV感染的主要标志物,应注意快速检测法检测抗HCV所存在的不足。方法:快速检测法和酶联免疫法。结果:快速检测法阳性率比酶联免疫法高。结论:快速检测法只适用于急诊过筛检测,对筛出的阳性结果要选择一种可靠的方法做复检。

ELISA法检测花生酱中AFB_1样品前处理方法的改进研究

通过ELISA法,对检测花生酱中AFB1含量的前处理方法进行了改进研究。通过对样品提取条件的优化,提取液稀释度的改变,建立了新的前处理方法,并利用回收率的测定与国标法进行比较。结果表明:利用改进的提取方法处理花生酱样品,对常见浓度加标回收率达75%～120%。新的提取方法不仅简化了操作步骤,减少了工作量,又提高了回收率。

γ-干扰素释放试验联合斑点形成细胞及ELISPOT诊断活动性结核与潜伏性结核的研究

目的:探究γ-干扰素释放试验(interferon-γrelease assays,IGRAs)联合可产生γ-干扰素(interferon-γ,INF-γ)的斑点形成细胞(spot-forming cells,SFC)数量、酶联免疫斑点检测法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)模型识别活动性结核与潜伏性结核的诊断效能。方法:选取2017年9月-2018年12月在笔者所在医院就诊的结核分枝杆菌感染患者312例,其中活动性肺结核组154例记为活动组,潜伏性结核分枝杆菌感染158例记为潜伏组。通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析γ-干扰素释放试验、SFC及ELISPOT联合诊断模型识别活动性及潜伏性结核的诊断价值。结果:活动组γ-干扰素释放试验结果高于潜伏组,SFC高于潜伏组,ELISPOT阳性率(78.6%)高于潜伏组(31.0%),差异均有统计学意义(P<0.05)。γ-干扰素释放试验诊断的临界值为2.72 IU/ml,其对应灵敏度为79.1%,特异度为52.5%,ROC曲线下面积为0.768[95%CI(0.708,0.829)];SFC诊断临界值为2.78,其对应的灵敏度为75.3%,特异度为60.8%,ROC曲线下面积为0.768[95%CI(0.711,0.825)];ELISPOT阳性诊断临界值为4.27 mg/L,其对应灵敏度为70.8%,特异度为51.3%,ROC曲线下面积为0.620[95%CI(0.546,0.694)]。行Logistic回归分析,得到联合诊断模型Logit(P)=1.433+2.512γ-干扰素释放试验+1.654 SFC+1.121 ELISPOT,联合检测截断值为2.47,对应灵敏度为74.7%,特异度为80.4%,ROC曲线下面积为0.851[95%CI(0.806,0.896)]。联合检测特异度及曲线下面积均高于各指标单独检测,差异均有统计学意义(P<0.05),且联合检测保持较好的灵敏度。结论:γ-干扰素释放试验、SFC及ELISPOT联合诊断模型可提高活动性结核的特异度,并保持较高的灵敏度,在鉴别活动性及潜伏性结核感染方面具有重要的临床价值。

利用特异性抗体建立金黄色葡萄球菌肠毒素B快速检测方法

目的:利用特异性靶向金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的抗体建立2种体外快速检测SEB的方法。方法:通过间接ELISA法及生物膜干涉技术测定3株抗体(LXY8、LXY9和LXY10)与SEB的结合活性;通过竞争ELISA法鉴定3株抗体的表位交叉情况;利用配对抗体建立双夹心ELISA检测法和胶体金试纸条层析技术检测SEB。结果:3株抗体与SEB均具有较高的亲和力(LXY8:KD=5.25×10^-10 mol/L;LXY9:KD=5.18×10^-9 mol/L;LXY10:KD=8.93×10^-10 mol/L);经间接ELISA法获得生物素标记的抗体与SEB结合的最低饱和浓度为0.25μg/mL,以该浓度作为抗原表位竞争的浓度,竞争ELISA结果表明3株抗体与SEB结合的表位不交叉;根据双夹心配伍实验的结果,获得LXY8与LXY10的最佳配对,SEB的最低检测限为240 pg/mL,而基于LXY8与LXY10配对的胶体金检测试纸条能够在5~10 min内完成样品的检测,且检测灵敏度约为2 ng/mL。结论:基于双夹心酶联免疫吸附技术建立了一种特异、灵敏的体外检测SEB的方法,利用胶体金层析技术开发了SEB快速检测的胶体金检测试纸条,能够实现SEB现场快速高效检测。

马铃薯试管苗病毒检测技术研究

根据大兴安岭马铃薯种薯生产实际,应用酶联免疫吸附检测法(ELISA)检测茎尖组织培养试管苗的带毒情况,鉴定危害马铃薯生产的6种主要病毒(PVX、PVY、PVS、PVM、PVA、PLRV),并结合指示植物如千日红进行最后鉴定,筛选健康、无毒的试管苗,为切段扩繁及试管薯生产作准备。该方法简单易操作,可作为国内生产脱毒种薯单位的标准检测方法进行推广。

伏马菌素B2人工抗原的制备研究

为制备伏马菌素B2人工抗原,通过戊二醛法和碳二亚胺法将伏马菌素B2偶联到载体蛋白上,人工抗原免疫BALB/c小鼠后,酶联免疫吸附法测定抗血清的效价,竞争酶联免疫吸附法测定人工抗原的免疫原性。通过氨基化和羧基化的苏丹红作为内参,紫外可见光谱扫描图谱鉴定伏马菌素B2成功偶联到载体蛋白上,免疫原性鉴定证明,碳二亚胺法制备的人工抗原可刺激BALB/c小鼠产生抗伏马菌素B2的抗体。

感染负荷与粥样硬化形成及斑块性质的相关性（摘要）

目的探讨感染负荷与冠状动脉粥样硬化及其斑块性质的相关性。方法2001年12月至2003年10月在本院接受介入检查的患者182例，血管内超声检测确定冠状动脉粥样硬化及其斑块性质；介入检查前抽静脉血．酶联免疫吸附检测法（ELISA）检测患者血清巨细胞病毒、幽门螺旋菌，肺炎衣原体、EB病毒、B型柯萨奇病毒、A型流感病毒、B型流感病毒、结核杆菌抗体IgG／IgA及乙肝病毒表面抗原。免疫散射比浊法检测高敏C反应蛋白（hs—CRP）水平。结果根据感染负荷将患者分为三组：A组：感染原n≤3种，B组：n=4～5种和C组：n≥6种。冠状动脉粥样硬化的检出率随感染负荷的增加而增加．各组冠状动脉粥样硬化阳性率分别为44．4％，70．6％和76．7％（P〈0．001）；感染负荷与动脉粥样硬化阳性率呈正相关，r=0．9396。血清hs—CRP水平升高者（〉5．0mg／L）冠状动脉粥样硬化阳性率升高更明显（43．8％，70．0％，70．8％）比（45．5％，63．7％．96．8％）．A、B、C组易损斑块检出率分别为33．3％、32．4％、51．7％（P〈0．05），感染原在5种以上者易损斑块检出率明显升高。结论以往感染微生物数量与冠状动脉粥样硬化率相关，血清hs—CRP水平升高者中两者的相关性更明显．提示二者有协同作用。高水平的感染负荷与冠状动脉粥样硬化的的易损斑块率相关。

应当重视血清阴性的原发性HIV感染

本文作者报导在医院急诊室碰到的血清阴性的原发性HIV感染。作者用第二代酶联检测法初筛2300份患者的标本,后经蛋白印迹法证实,180份标本抗-HIV Ⅰ型阳性,其余2120份标本均为血清阴性。但用酶联免疫法检测这2100份标本的HIVP24抗原。