用酶联比色法测定肝脏磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D及其应用

研究建立一种磷脂酞胆碱专一性磷脂酶D（PC—PLD）的酶偶联比色测定法，并研究肝脏中磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D（PC—PLD）活力受磷脂的调节及其在肝癌中的变化。将PLD水解磷脂酰胆碱产生的胆碱用胆碱氧化酶氧化，生成的H2O2再在过氧化物酶催化下将4-氨基安替匹林和酚氧化成粉红色有色物质（Trinder反应）。结果：本法中酶浓度或反应时间和产物胆碱量有良好的正比关系。用0.15％的正辛基β-吡喃葡萄糖苷可将PC-PLD从膜性组分中增溶出来，而基本上不抑制酶活力，而其他5种去垢剂即使在很低的浓度下，均能抑制该酶活力。应用此法测定6种磷脂对鼠肝PC—PLD的影响发现只有磷脂酰乙醇胺（PE）可激活PC—PLD，还发现鼠肝癌中膜结合性PC-PLD活力明显增高，尤其是癌前期；而胞液PC-PLD仅在癌前期增高。结论：结果表明，①PC-PLD的酶联比色测定法较简便，灵敏度和重复性也较好，可以满意地应用于组织和细胞中此酶活力变化的研究；②大鼠肝PC—PLD受PE激活，并在肝癌中升高。

酶偶联比色法测定血清门冬氨酸氨基转移酶

目的 建立一种酶偶联比色法测定血清门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）的方法。方法 谷氨酸在ＮＡＤ＋存在下，通过谷氨酸脱氢酶脱氢反应生成ａ－酮戊二酸和ＮＡＤＨ，ＮＡＤＨ在心肌黄酶（ＦＡＤ）的作用下，与硝基四氮唑兰（ＮＢＴ）发生氧化还原反应，使ＮＢＴ生成甲 ，其颜色的深浅与血清门冬氨酸氨基转移酶活性成正比。结果 该方法的批内精密度为（ＣＶ）３．６％，批间精密度（ＣＶ）为 ４．９％，与酶速率法相关良好，ｒ＝ ０．９９８，线性范围 ０～８５０Ｕ／Ｌ。结论 酶偶联比色法是一种准确简便快速的测定血清ＡＳＴ的方法，适合临床应用。

磷脂酰丝氨酸合成酶基因的克隆及在枯草芽孢杆菌中的表达

应用PCR技术从Escherichia coli K12 Sgal-(ExPASy P23830)中扩增到大小为1350bp编码磷脂酰丝氨酸合成酶的DNA片段,将其插入枯草芽孢杆菌诱导型表达载体pBES,获得重组质粒pBES-pss后转化Bacillus subtilis DB104。经蔗糖诱导后,该磷脂酰丝氨酸合成酶在Bacillus subtilis DB104(pBES-pss)中获得胞外分泌表达,SDS-PAGE分析发现目的蛋白分子量约为52kDa,酶联比色法检测酶活力为1.50U/ml,提高了磷脂酰丝氨酸合成酶的表达产量,为工业化发酵生产磷脂酰丝氨酸合成酶奠定了良好的基础。

磷脂酶D水解活性测定方法的研究

为解决磷脂酶D酶活测定试验重复性差、成本高等问题,研究并改良测定磷脂酶D水解活性的方法。将反应体系分为解离和显色两个过程,通过对反应底物、反应条件的优化试验,确定最佳底物为蛋黄来源的卵磷脂,底物溶剂为80%乙醇,其中解离过程的最佳反应条件为温度37℃、pH5.5、时间10 min,金属离子助剂为10 mmol/L的CaCl2。

血清脂肪酶对高脂血症性胰腺炎的诊断价值

目的 :比较分析血清淀粉酶和脂肪酶对高脂血症性胰腺炎的诊断价值。方法 :对191例急性胰腺炎,包括176例非高脂血症性胰腺炎和15例高脂血症性胰腺炎患者进行对照研究,比较分析2组患者血清淀粉酶和脂肪酶活性改变。结果:血淀粉酶在高脂血症性胰腺炎升高幅度低于非高脂血症性胰腺炎,而脂肪酶在两组中均明显升高,两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清脂肪酶对高脂血症性胰腺炎的诊断价值高于血清淀粉酶。

西安市3366例急性呼吸道感染病毒病原学分析

目的 分析西安市急性呼吸道感染（ARI）患儿病毒病原学检测结果,及其与年龄、季节的关系,为临床提供病毒病原学依据。方法 选择在西安市儿童医院呼吸内科住院治疗的ARI患儿3 366例,于住院当日或次日取患儿血清,用ELISA法检测病毒特异性IGM抗体,包括呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、流感病毒（IV）、副流感病毒（PIV）,对检测阳性的病例进行统计学分析。结果 3 366份标本中阳性1 914份,占56.86%,其中IV阳性标本1 017例,检出率30.21%;RSV阳性标本508例,检出率15.09%。IV发病高峰季节在2-6月,发病年龄高峰在1-14岁。结论 2005年7月至2006年6月西安市ARI的病毒病原体以IV为主,其次为RSV。