以pH敏感相分离高分子为载体的酶联荧光免疫分析法测定人IgG

pH敏感高分子因其独特的pH敏感性质而在药物的控制释放[1,2]、分子分离[3]以及生物传感器[4]等方面得到应用. 应用于免疫分析时, 要求pH敏感高分子在溶液pH 7.4左右波动时做出响应, 过多偏离生理pH会对免疫反应生成的抗原-抗体复合物造成不同程度的破坏. 目前, pH敏感高分子并未在免疫分析中广泛应用, 这主要是由于高分子的相转变pH大多在4或10左右[5,6]. 我们[7]曾合成了37 ℃下相转变pH在5.6左右的pH敏感高分子, 并将其作为免疫反应载体, 建立了乙肝表面抗原的分析系统, 虽然其相转变pH比以往的高分子更接近于中性[5], 但并没有达到生理pH值7.4范围, 分离时仍可能对免疫复合物造成一定的损害.

自动酶联荧光免疫分析系统检测冻肉中李斯特氏菌

目的评价自动酶联荧光免疫分析系统(VIDAS)检测冻肉中李斯特氏菌的灵敏度和特异度。方法采用VIDAS法和常规细菌培养法(GB4789.30-2003)平行检测148份进境冻肉样品中李斯特氏菌,以常规细菌培养法作为参照,对VIDAS法进行评价。结果148份样品中VIDAS法检测李斯特氏菌阳性28份;常规细菌培养法检测阳性16份,这16份皆是VIDAS法检测阳性的样品。VIDAS法用于冻肉李斯特氏菌检测的灵敏度为100%,特异度为90.9%。结论VIDAS法检测冻肉中李斯特氏菌具有很高的灵敏度和较高的特异度,用于进境冻肉的检测,既可有效把关,又大大缩短检验时间,加快通关速度。

酶联荧光免疫分析技术检测粪便中艰难梭菌毒素A/B

目的应用酶联荧光免疫分析(ELFIA)技术及PCR联合检测粪便标本中艰难梭菌毒素A/B(CDAB),分析不同临床表现的住院患者粪便标本中CDAB的检出情况。方法收集北京大学第一医院2010年8月～11月242位住院患者粪便标本,用ELFIA法检测CDAB,对检测结果为可疑的标本用PCR复测。将患者分为非抗生素相关腹泻组和抗生素相关腹泻组,对两组的CDAB阳性率进行χ2检验,并分析检测结果与临床表现的相关性。结果 242位患者中,22例ELFIA法CDAB检测为阳性,12例检测结果为可疑。12例可疑标本有10例进行了PCR复测,8例(80.0%)CDAB基因阳性。两法联合检测共计30例为CDAB阳性,阳性率为12.4%。抗生素相关腹泻组CDAB阳性率(24.0%)显著高于非抗生素相关腹泻组(6.9%)(χ2=14.21,P<0.01)。CDAB阳性组的年龄(68.2±23.6)岁高于CDAB阴性组(58.7±23.9)岁(P<0.05)。结论 ELFIA法检测CDAB,有商品试剂盒,方法简便可靠。可疑阳性标本用PCR法检测tcdA/tcdB基因,可进一步提高阳性率。艰难梭菌毒素在抗生素相关腹泻患者检出率较高,与临床表现具有较好的相关性。

酶联荧光分析法测定血清肌钙蛋白Ⅰ的临床应用

心肌肌钙蛋白I（cTnI）免疫层析法检测的灵敏度低,放射免疫法和ELISA操作复杂、检测时间长,化学发光分析法（CLIA）技术要求高,均不易在急诊常规开展。

酶联荧光分析法测定血清心肌肌钙蛋白I

目的对酶联荧光分析法(ELFA)检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)进行方法学评价,并探讨其临床应用价值。方法系统研究ELFA法测定cTnI的精密度、灵敏度、线性范围、回收率、标准曲线的稳定性及干扰因素,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果相比较。同时应用ELFA法测定50名正常人、62例非心肌梗死患者及53例急性心肌梗死(AMI)患者的血清cTnI水平。结果ELFA法检测cTnI的总CV值为2.58%～4.82%,分析灵敏度为0.05μg/L,线性范围0.1～50μg/L,稀释标本的平均回收率为101.2%,标准曲线至少可稳定14d。ELFA法(Y)与ELISA法(X)具有良好的相关性(Y=0.983X-0.148,r=0.996)。加入高浓度的胆红素、三酰甘油和血红蛋白对测定无显著性影响(P>0.05)。AMI患者血清cTnI[(18.6±4.8)μg/L]显著高于正常人[(0.068±0.014)μg/L]和非心肌梗死患者[(0.055±0.021)μg/L](P<0.01);cTnI诊断AMI的阈值为0.8μg/L,诊断敏感度、特异度、准确度分别为91.4%、93.8%、92.9%,阳性和阴性拟然比分别为14.6和0.09。结论ELFA法操作简便、结果准确可靠、自动化程度高,且检测快速,具有较高的精密度;cTnI是敏感、特异的心肌标志蛋白,适合在临床工作中推广应用。

酶联荧光分析法在血清催乳素测定中的应用及其价值

①目的探讨酶联荧光分析法（ELFA）测定血清催乳素及其临床应用价值。②方法采用ELFA法测定不同浓度血清催乳素（PRL）的精密度、灵敏度、线性范围、回收率、标准曲线的稳定性及干扰因素。③结果ELFA法测定PRL的总CV值为3．2％-4．3％；分析灵敏度为0．5ng／mL，线性范围为0．5～200ng／mL，回收率为102．2％，标准曲线的稳定性为12天，高浓度的胆红素、血红蛋白和甘油三酯对对测定结果无显著性影响（0〉0．05）。④结论ELFA法测定血清PRL操作简便，结果准确可靠，自动化程度高，且检测速度快，有较宽的线性范围和较高的精密度．

自动酶联荧光免疫分析系统检测冻肉中沙门菌的评价

〔目的〕 评价自动酶联荧光免疫分析系统 (VIDAS)检测冻肉中沙门菌的灵敏度和特异性。〔方法〕 使用VIDAS法和常规细菌培养法平行检测各种冻肉样品中沙门菌 ,以常规细菌培养法作参照 ,对VIDAS技术进行评价。〔结果〕 15 5份样品中VIDAS检出沙门菌阳性 10例 ,阴性 14 5例 ;常规细菌培养法检测出VIDAS法阳性样本中的 9例呈阳性 ,其余 14 6例皆为阴性。VIDAS法用于冻肉沙门菌检测的灵敏度为 10 0 % ,特异性为 99%。〔结论〕 VIDAS法检测冻肉中沙门菌具有很高的灵敏度和特异性 ,用于进出口冻肉的检测 ,可大大缩短检验时间 。

第四代HIV1/2酶联荧光免疫试验在性病门诊筛查中的应用及评价

目的探讨新的第四代可联合检测P24抗原和抗体的酶联荧光免疫试验(ELFA)技术,在性病门诊中的检测情况,评价该技术在临床上的应用价值。方法对8 495份初次筛查HIV-1/2抗体的检测者血清,采用ELFA和硒标法(金标法,DIGFA)同时进行检测,对其中任何一种方法结果为阳性的血清,送北京市疾病预防控制中心(CDC)做蛋白印迹实验(WB)确证实验。结果 79例ELFA法和DIGFA法均为阳性样本送经WB确认,结果亦为阳性;3例ELFA法检测结果阳性而DIGFA检测阴性的标本,经WB确证结果为2例不确定,1例阴性排除HIV感染。对其中2例不确定者进行定期随访,2个月后1例标本经WB确认为阳性,3月后另1例WB亦转为阳性。5例ELFA法为阴性DIGFA法为阳性的标本,经WB确认结果为4例阴性,1例不确定。该不确定者1月后随访,经WB检测而排除。结论 ELFA法因能尽早检测到刚出现的P24抗原,可以得到独立的精确的抗原抗体数值,特异性及准确性高,可将普通检测方法的窗口期缩短,可广泛应用于早期检测。

酶联荧光分析法在HIV感染筛查中的应用

目的分析酶联荧光分析法(ELFA)检测艾滋病病毒(HIV)阳性反应样本与蛋白印迹试验(WB)确证结果的相关性,探讨ELFA在HIV感染筛查中的应用。方法回顾2014年6月至2016年3月,杭州市各筛查实验室上送样本中,ELFA检测HIV抗体阳性反应样本2 113例,HIVp24抗原阳性反应样本39例,用WB试验进行确证。比较ELFA阳性反应结果和WB确证结果的相关性,分析ELFA检测HIV抗体不同检测值对WB确证结果的预测性。结果 2 113例抗体阳性反应样本与WB试验结果符合率为98.25%(2 076例)。剔除46例无随访结果的样本,进一步讨论2 067例抗体阳性反应样本,ELFA法检测HIV抗体阳性预测值为97.92%(2 024例)。39例HIVp24抗原阳性反应样本首次WB确证36例(92.31%)为结果不确定,已随访的23例均确证为阳性。结论ELFA检测HIV抗体抗原结果直观,抗体阳性反应样本和WB确证试验有很好的相关性和预测性,是HIV抗体检测S/CO比值替代策略中一种较好的检测方法。

新型蛋白质芯片与荧光酶联免疫法检测过敏原特异性IgE的对比研究

目的:为确认新型过敏原特异性Ig E抗体检测试剂盒(芯片法)的可信度,将芯片法与荧光酶联免疫法进行对比分析。方法:芯片法运用荧光免疫吸附分析的原理,针对6种过敏原的特异性Ig E进行检测,并对比与荧光酶联免疫法检测结果的阳性一致率、阴性一致率、整体一致率,探讨kappa值。共有456例样本用于对比分析。结果:芯片法所检测的阳性率分别为屋尘螨88.6%、猫毛皮屑92.9%、鸡蛋白92.5%、虾91.5%、蚌99.3%、蟹92.2%;而荧光酶联免疫法的阳性率分别为屋尘螨88.6%、猫毛皮屑92.9%、鸡蛋白92.5%、虾85.2%、蚌93.1%、蟹92.2%。6种过敏原的kappa值分别为屋尘螨1.000、猫皮屑1.000、鸡蛋白1.000、虾0.695、蚌0.172与蟹1.000。对于4种常见过敏原屋尘螨、猫皮屑、鸡蛋白与蟹,芯片法与荧光酶联免疫法的测定结果完全一致。虾与蚌的检测一致性偏低,可能因为阴性样本数偏低、检测值位于阈值附近及芯片法敏感度较高所导致。结论:芯片法与荧光酶联免疫法检测变应原特异性Ig E具有高度一致性,芯片法的检测结果敏感性高,是临床上过敏原特异性Ig E检测的可靠工具。

荧光酶联免疫法检测血清骨钙素及探讨

荧光酶联技术是一种灵敏度、特异性较高的检测方法。我们用瑞典法玛西亚公司的ＣＡＰ检测仪和荧光酶联法对新疆三个主要民族进行血清骨钙素水平研究，结果报告如下。１材料和方法在乌鲁木齐市、喀什地区、呼图壁县、阿尔泰地区献血员和体检健康者５１２人中取不同年龄段标...

常规培养法和酶联荧光免疫分析法在测定空肠弯曲菌中的对比

目的运用常规培养法和酶联荧光免疫分析法对相同食品进行空肠弯曲菌检测,对所得结果进行对比分析。方法对市面上销售的150瓶装酸奶同时采用常规培养法和酶联荧光免疫分析法进行检测。结果采用常规培养法检测出空肠弯曲菌3瓶,其阳性率为2.0%;采用酶联荧光免疫分析法检测出空肠弯曲菌7瓶,其阳性率为4.7%。结论酶联荧光免疫分析法的检出率较高,且方法操作简单、省时,建议有条件的检测机构尽量采用酶联荧光免疫分析法对空肠弯曲菌进行检测。

酶联免疫荧光法与双抗夹心酶联免疫吸附法测定屋尘螨组分IgG4的比较

目的运用酶联免疫荧光法（UniCAP法）和双抗夹心酶联免疫吸附法（Fooke法）分别测定经特异性免疫治疗（SIT）的患儿血清sIgG4水平,评价两种免疫定量检测方法的相互关系。方法对45例成功进行皮下SIT的患儿血清分别用UniCAP法和Fooke法检测治疗前、治疗6~8个月后、治疗12~14个月后sIgG4水平。结果与治疗前相比较,在治疗6~8个月和治疗12~14个月后,UniCAP法检测45例患儿血清sIgG4水平全部均有不同程度升高,Fooke法在SIT后6~8个月和12~14个月后分别有40和43例患儿sIgG4水平有不同程度升高,但两种方法检测sIgG4结果升高幅度有差异。结论对于sIgG4测定,SIT后,Uni CAP法比Fooke法测定值升高的幅度更明显。

应用全自动荧光酶联免疫分析系统同时检测人类免疫缺陷病毒抗体和p24抗原

近年来,人类免疫缺陷病毒(HIV)的检测工作在我国发展很快,各地已先后建立了上百个检测实验室,HIV检测的管理和质控也在逐渐加强.自1985年以来,检测HIV的初筛试剂不断发展.第三代试剂的出现大大缩短了从感染到检出抗体的时间[1].最近研制出了第四代试剂,它能同时检测抗原和抗体.法国某公司生产的同时检测人类免疫缺陷病毒抗体和抗原的荧光酶联免疫(VIDAS HIV DUO)试剂,是一种能同时检测HIV 1+2型抗体和HIV-1 p24抗原的第四代试剂,用全自动荧光酶联免疫分析(VIDAS)仪进行检测.资料显示,VIDAS HIV DUO试剂比第三代试剂缩短了检出的时间,窗口期缩短为两个星期左右[2].2000年我们用全自动酶联免疫分析系统对部分血清进行了检测,结果如下.

胰蛋白酶催化罗丹明110双酰胺衍生物荧光酶联免疫吸附方法检测桔青霉素

桔青霉素(citrinin,CIT)是一种广泛污染玉米、大米等农作物,且对人和动物具有肾毒性、致畸性等毒害的真菌毒素。目前的国家标准检测方法中,需要先用免疫亲和柱或固相萃取柱净化,再用配荧光检测器的高效液相色谱仪测定,需要专业的大型仪器和检测场所。因此,有必要开发一种更简便、灵敏的方法用于谷物中CIT的检测。该实验构建了一种胰蛋白酶催化的荧光酶联免疫吸附方法用于玉米中CIT的检测。该方法利用胰蛋白酶催化罗丹明110双酰胺荧光衍生物裂解产生荧光,以及CIT和胰蛋白酶-CIT与CIT抗体的竞争结合关系,通过记录竞争抑制率B_(0)与CIT浓度的变化关系,从而实现对玉米中CIT的定量检测,可用方程y=18.606 lnx-18.713(R^(2)=0.992),定量范围为12.5~400 ng/mL,通过检测4个不同CIT含量(0.22~3.5 mg/kg)的玉米样本,结果显示该方法的加标回收率为90.10%~110.58%,批内、批间的变异系数为3.65%~14.08%,该研究所构建的荧光酶联免疫吸附方法适用于玉米中不同浓度的CIT快速、灵敏定量检测。

应用全自动荧光酶联免疫法检测肉类中的大肠杆菌O157

肠出血性大肠杆菌是引起食物中毒的一类重要的致病性细菌,大肠杆菌O157是其中的一个重要的血清型。本研究采集冻肉样品,进行大肠杆菌O157检测,结果从鸡肉和鸭肉中各检出一份阳性样品,阳性率分别为5.9%和12.5%,从结果可以看出,我市冻肉中存在有大肠杆菌0157污染。

玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病的酶联免疫—实时荧光PCR检测

针对玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病这两种检疫性病菌进行酶联免疫—实时荧光PCR检测研究,对该方法进行了特异性、灵敏度以及实际样品模拟试验。结果表明,该方法具有较好的特异性,检测低限在100～200 cfu·m^L-1,同时可用于实际样品的检测鉴定。

食品中沙门氏菌酶联免疫荧光分析(VIDAS(R)Sallmonella[SLM]Assay)筛选方法

本方法为AOAC公布的方法996.08,适用于所有食品中沙门氏菌的检测.可能会遇到一定百分率假阳性结果.所有阳性结果必须通过标准培养方法确证.按967.26B(见17.9.07)从增菌培养基和M肉汤划线于选择性培养基培养,对典型或可疑菌落按967.26C(见12.9.02),967.27(见17.9.03)和967.28(见17.9.07)对培养物加以确证.也可按978.24(见17.9.04),989.12(见17.9.05)和989.13(见17.9.06)使用商品化的生化检验盒对食源性沙门氏菌属鉴定.

酶联免疫荧光试纸法在前列腺癌筛查中的应用价值

目的探讨酶联免疫荧光试纸法在前列腺癌筛查中检测血清总前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen,TPSA)的价值。方法收集参与前列腺癌筛查的成年男性105例的年龄、血液样本、前列腺体积等资料,采用酶联免疫荧光试纸法与常规电化学发光试剂法两种方法,同时对同一受试者血液样本进行血清TPSA配对检测,对TPSA检测结果进行统计学分析并将这两种检测方法所获得的TPSA数值与前列腺体积进行相关性分析.结果105例受试者中,两种检测方法测得的TPSA数值差异有统计学意义(P<0.01),酶联免疫发光试纸法测得的TPSA数值低于电化学发光试剂法测得的TPSA数值,差值均值为0.41μg/L;以常规电化学发光试剂法测得的TPSA数值为参照标准,当TPSA>4.00μg/L时两种检测方法均数差值为1.34μg/L,当TPSA<4.00μg/L时两种检测方法均数差值为0.22μg/L。但在所有受试者、TPSA>4.00μg/L组、TPSA<4.00μg/L组三组病例中,这两种检测方法所获得的TPSA数值之间均具有较高的相关性(P<0.01),R^2值分别为0.98、0.88、0.92,R^2值分别为0.96、0.88、0.85。而且这两种检测方法所获得的TPSA数值与前列腺体积也均具有较高的相关性(P<0.01),R值均为0.72,R^2值均为0.52结论酶联免疫荧光试纸法检测TPSA方便快捷,其检测数值与电化学发光试剂法测得的数值有较高的相关性,在前列腺癌筛查中具有一定的参考价值。

应用自动酶联免疫荧光仪(VIDAS)检测禽类组织中雌二醇水平

介绍了有关检测禽肉组织中雌二醇残留量的方法 ,应用固相C18柱分离样品中雌二醇 ,并用 30 %甲醇溶液洗脱 ,然后使用VIDAS仪器检测分析处理。实验显示 ,用免疫酶联法检测具有简单、易操作。