以pH敏感相分离高分子为载体的酶联荧光免疫分析法测定人IgG

pH敏感高分子因其独特的pH敏感性质而在药物的控制释放[1,2]、分子分离[3]以及生物传感器[4]等方面得到应用. 应用于免疫分析时, 要求pH敏感高分子在溶液pH 7.4左右波动时做出响应, 过多偏离生理pH会对免疫反应生成的抗原-抗体复合物造成不同程度的破坏. 目前, pH敏感高分子并未在免疫分析中广泛应用, 这主要是由于高分子的相转变pH大多在4或10左右[5,6]. 我们[7]曾合成了37 ℃下相转变pH在5.6左右的pH敏感高分子, 并将其作为免疫反应载体, 建立了乙肝表面抗原的分析系统, 虽然其相转变pH比以往的高分子更接近于中性[5], 但并没有达到生理pH值7.4范围, 分离时仍可能对免疫复合物造成一定的损害.

自动酶联荧光免疫分析系统检测冻肉中李斯特氏菌

目的评价自动酶联荧光免疫分析系统(VIDAS)检测冻肉中李斯特氏菌的灵敏度和特异度。方法采用VIDAS法和常规细菌培养法(GB4789.30-2003)平行检测148份进境冻肉样品中李斯特氏菌,以常规细菌培养法作为参照,对VIDAS法进行评价。结果148份样品中VIDAS法检测李斯特氏菌阳性28份;常规细菌培养法检测阳性16份,这16份皆是VIDAS法检测阳性的样品。VIDAS法用于冻肉李斯特氏菌检测的灵敏度为100%,特异度为90.9%。结论VIDAS法检测冻肉中李斯特氏菌具有很高的灵敏度和较高的特异度,用于进境冻肉的检测,既可有效把关,又大大缩短检验时间,加快通关速度。

酶联荧光免疫分析技术检测粪便中艰难梭菌毒素A/B

目的应用酶联荧光免疫分析(ELFIA)技术及PCR联合检测粪便标本中艰难梭菌毒素A/B(CDAB),分析不同临床表现的住院患者粪便标本中CDAB的检出情况。方法收集北京大学第一医院2010年8月～11月242位住院患者粪便标本,用ELFIA法检测CDAB,对检测结果为可疑的标本用PCR复测。将患者分为非抗生素相关腹泻组和抗生素相关腹泻组,对两组的CDAB阳性率进行χ2检验,并分析检测结果与临床表现的相关性。结果 242位患者中,22例ELFIA法CDAB检测为阳性,12例检测结果为可疑。12例可疑标本有10例进行了PCR复测,8例(80.0%)CDAB基因阳性。两法联合检测共计30例为CDAB阳性,阳性率为12.4%。抗生素相关腹泻组CDAB阳性率(24.0%)显著高于非抗生素相关腹泻组(6.9%)(χ2=14.21,P<0.01)。CDAB阳性组的年龄(68.2±23.6)岁高于CDAB阴性组(58.7±23.9)岁(P<0.05)。结论 ELFIA法检测CDAB,有商品试剂盒,方法简便可靠。可疑阳性标本用PCR法检测tcdA/tcdB基因,可进一步提高阳性率。艰难梭菌毒素在抗生素相关腹泻患者检出率较高,与临床表现具有较好的相关性。

自动酶联荧光免疫分析系统检测冻肉中沙门菌的评价

〔目的〕 评价自动酶联荧光免疫分析系统 (VIDAS)检测冻肉中沙门菌的灵敏度和特异性。〔方法〕 使用VIDAS法和常规细菌培养法平行检测各种冻肉样品中沙门菌 ,以常规细菌培养法作参照 ,对VIDAS技术进行评价。〔结果〕 15 5份样品中VIDAS检出沙门菌阳性 10例 ,阴性 14 5例 ;常规细菌培养法检测出VIDAS法阳性样本中的 9例呈阳性 ,其余 14 6例皆为阴性。VIDAS法用于冻肉沙门菌检测的灵敏度为 10 0 % ,特异性为 99%。〔结论〕 VIDAS法检测冻肉中沙门菌具有很高的灵敏度和特异性 ,用于进出口冻肉的检测 ,可大大缩短检验时间 。

常规培养法和酶联荧光免疫分析法在测定空肠弯曲菌中的对比

目的运用常规培养法和酶联荧光免疫分析法对相同食品进行空肠弯曲菌检测,对所得结果进行对比分析。方法对市面上销售的150瓶装酸奶同时采用常规培养法和酶联荧光免疫分析法进行检测。结果采用常规培养法检测出空肠弯曲菌3瓶,其阳性率为2.0%;采用酶联荧光免疫分析法检测出空肠弯曲菌7瓶,其阳性率为4.7%。结论酶联荧光免疫分析法的检出率较高,且方法操作简单、省时,建议有条件的检测机构尽量采用酶联荧光免疫分析法对空肠弯曲菌进行检测。

应用全自动荧光酶联免疫分析系统同时检测人类免疫缺陷病毒抗体和p24抗原

近年来,人类免疫缺陷病毒(HIV)的检测工作在我国发展很快,各地已先后建立了上百个检测实验室,HIV检测的管理和质控也在逐渐加强.自1985年以来,检测HIV的初筛试剂不断发展.第三代试剂的出现大大缩短了从感染到检出抗体的时间[1].最近研制出了第四代试剂,它能同时检测抗原和抗体.法国某公司生产的同时检测人类免疫缺陷病毒抗体和抗原的荧光酶联免疫(VIDAS HIV DUO)试剂,是一种能同时检测HIV 1+2型抗体和HIV-1 p24抗原的第四代试剂,用全自动荧光酶联免疫分析(VIDAS)仪进行检测.资料显示,VIDAS HIV DUO试剂比第三代试剂缩短了检出的时间,窗口期缩短为两个星期左右[2].2000年我们用全自动酶联免疫分析系统对部分血清进行了检测,结果如下.

食品中沙门氏菌酶联免疫荧光分析(VIDAS(R)Sallmonella[SLM]Assay)筛选方法

本方法为AOAC公布的方法996.08,适用于所有食品中沙门氏菌的检测.可能会遇到一定百分率假阳性结果.所有阳性结果必须通过标准培养方法确证.按967.26B(见17.9.07)从增菌培养基和M肉汤划线于选择性培养基培养,对典型或可疑菌落按967.26C(见12.9.02),967.27(见17.9.03)和967.28(见17.9.07)对培养物加以确证.也可按978.24(见17.9.04),989.12(见17.9.05)和989.13(见17.9.06)使用商品化的生化检验盒对食源性沙门氏菌属鉴定.

聚合酶链反应与自动荧光免疫酶标检测弯曲菌属的试验

弯曲菌属是一种引发人和动物食源性疾病的致病因子 ,涉及到食品的安全卫生。本文针对弯曲菌属的16sRNA建立快速检测鉴定弯曲菌属的PCR方法。并将其与自动酶联免疫荧光分析方法对原奶、水样、冻禽肉制品及宰前活禽的泄殖腔棉拭样品等多种样品进行检验 ,实验结果表明PCR扩增方法检测弯曲菌属具有灵敏、高效、特异、稳定的特点 。

2021—2022年南京地区儿童特异性过敏原定量检测分析及其临床价值

目的探讨2021—2022年南京地区过敏性疾病患儿过敏原的分布和规律,为儿童过敏性疾病的预防和治疗提供科学依据。方法对2021年1月至2022年12月在南京医科大学附属儿童医院进行过敏原检测的8855例患儿结合性别、年龄、季节和临床诊断进行统计分析。结果8855例患儿血清sIgE阳性率为59.87%。食入性过敏原阳性检出率前3位依次为牛奶(35.00%)、蛋白(34.00%)和坚果混合(13.19%);吸入性过敏原阳性检出率前3位依次为户尘螨(28.28%)、粉尘螨(27.56%)和霉菌混合(23.50%)。除牛奶和狗毛屑外,男孩其他过敏原sIgE阳性率均高于女孩(P<0.05)。3岁以下患儿以食入性过敏原为主,牛奶、蛋白是主要的过敏原;3岁以上患儿则以吸入性过敏原为主,户尘螨、粉尘螨和霉菌混合是主要的过敏原。吸入性过敏原夏季阳性率最高,冬季阳性率最低,除猫皮屑、狗毛屑及德国小蠊(蟑螂)外,其余过敏原阳性率在各季节之间的差异有统计学意义(P<0.05)。食入性过敏原常引起患儿皮肤及消化系统问题;吸入性过敏原多累及患儿呼吸系统。结论南京地区常见的过敏原是牛奶、蛋白、尘螨及霉菌混合,不同性别、年龄、季节及疾病的过敏原均存在一定差异。合理、精准检测过敏原可以为患儿提供预防和护理依据,并为临床提供诊疗参考。

2种艰难梭菌感染检测方法的比较与分析

目的比较酶联免疫荧光分析(ELFA)与实时荧光定量PCR(PCR)2种艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)检测方法的检验性能,从中选择灵敏度高、特异性好且操作简便的CDI检验方法开展临床检验。方法对来自重症监护病房(ICU)、消化内科及感染科等临床科室的126份粪便标本进行艰难梭菌毒素或基因检测。以产毒培养试验(toxigenic culture,TGC)结果作为参考标准,评价ELFA与PCR方法的性能,同时分析我院及各科室的CDI流行情况。结果 TGC检测126份腹泻患者的粪便标本,阳性率为19.0%(24/126),其中ICU、消化内科感染率较高。ELFA和PCR方法的检测敏感性分别为66.7%和91.7%,差异有统计学意义(χ2=4.55,P<0.05);特异性、阳性预测值、阴性预测值与准确度差异无统计学意义。结论我院CDI形势较为严峻,以ICU和消化内科最为突出。PCR与ELFA均能够提供更为准确、可靠的检测结果,但前者敏感性较好。

儿童总免疫球蛋白E和特异性免疫球蛋白E临床可报告范围建立的研究

目的建立儿童荧光酶联免疫分析法检测总免疫球蛋白E(tIgE)和特异性免疫球蛋白E(sIgE)的临床可报告范围。方法收集儿童tIgE和sIgE血清样本12例,参考中国合格评定国家认可委员会(CNAS)和美国临床实验室标准化协会(CLSI)相关文件,在荧光免疫分析仪上进行tIgE和sIgE的分析测量范围(AMR)验证试验,建立其临床可报告范围(CRR)。结果tIgE的AMR为3~4788kU/L,最大允许稀释倍数为50倍,CRR为3~239400kU/L。sIgE的AMR为0.01~92.97kUA/L,不能进行稀释,CRR为0.01~92.97kUA/L。结论儿童tIgE和sIgE临床可报告范围的建立,对于高值病例的动态监测和病例间比较有重要意义,tIgE能够满足临床需求。

以葛根素为辣根过氧化物酶底物的新体系及其分析应用

以一种天然活性成分葛根素(Puerarin)为辣根过氧化物酶(HRP)底物建立了葛根素-辣根过氧化物酶-过氧化氢反应新体系.在反应体系中HRP催化H2O2氧化葛根素(弱荧光)形成二聚体产物(强荧光),该产物在315 nm的激发光下能发射波长为478 nm的强荧光,并且反应体系荧光强度增加与HRP量在一定浓度范围内呈线性相关.根据此关系和竞争型免疫定量原理,以兔布氏杆菌抗体为分析对象建立了基于葛根素的酶联荧光免疫传感分析新方法.对葛根素性质的研究结果证实,葛根素在空气中稳定、对温度稳定,对H2O2+HRP敏感性优于传统底物如对羟基苯乙酸、Amplex Red和高香草酸.优化了酶联荧光免疫传感分析方法的实验条件如HRP-BrAb用量、温度等.运用新体系测定了兔血清样品的布氏杆菌抗体,该方法线性范围为1.3～120 ng/mL,检测限为1.3 ng/mL(3σ),相对标准偏差为3.8%.

利用mini-VIDAS和GB方法检测食品中沙门氏菌的比较试验

自动酶标免疫测试仪 ( mini--VIDAS) ,是利用酶联荧光免疫分析技术 ( EL FA)原理 ,通过固相吸附器 ,用已知抗体来捕捉目标生物体 ,然后与带荧光的酶联抗体再次结合 ,经含 0 .1%叠氮纳的 TBS-吐温充分冲洗后 ,通过激发光源检测即能自动读出发光的阳性标本。本实验采用 mini-VIDAS和 CB4789.4-94的方法检测食品中沙门氏菌 ,证明使用 VIDAS具有检测灵敏度高、无传染危险、检测速度快等特点。

利用商品DNA探针对食品中单核细胞增生李斯特菌的快速检测评估

用商品核酸探针 (AccuProbe)对 10 0份市售食品中单核细胞增生李斯特菌进行检测和验证 ,并以酶联免疫荧光分析技术 (VIDAS)和常规培养分离物做生化鉴定 (API)做平行测试比较 ,最终证实基因探针 (AccuProbe)对食品中单增李氏菌的检测具备正确、灵敏、快速、简便等优点 。

重组人胰高血糖素样多肽-1(7-36)在健康人体的药代动力学

目的研究重组人胰高血糖素类多肽-1（7-36）[rhGLP-1（7-36）]（促胰岛素生成药）在健康志愿者的药代动力学.方法选择12,9名健康志愿者,分别单次（0.1,0.15,0.2 mg）和多次（0.2 mg）皮下注射rhGLP-1（7-36）,连续5日,用荧光酶联免疫分析法测定其血药浓度,用DAS软件计算其药代动力学参数.结果单次：药-时曲线符合一房室模型,Cmax、AUC0-t随剂量增加而增加,tmax约为19～21 min,ti/2为10～14min.多次：首次与末次给药后的Cmax分别为（726.76±94.07）,（737.15±72.12）ng·L-1;tmax为18min左右;t1/2为15～17 min.结论在0.1～0.2 mg内,过程呈一级线性动力学特征,体内无蓄积,耐受性较好.

腹泻患者艰难梭菌及其毒素A/B检出率分析

目的了解住院腹泻患者艰难梭菌及其毒素A/B的检出情况,为临床诊断抗生素相关性腹泻提供参考依据。方法收集2015年9月至2016年8月崇州市人民医院疑似抗生素相关性腹泻住院患者的粪便标本163份,用艰难梭菌快速检测试剂盒检测艰难梭菌特异性抗原谷氨酸脱氢酶(GDH);用酶联免疫荧光法检测GDH阳性标本中艰难梭菌毒素A/B的产生情况。结果 163份粪便标本中GDH阳性为34份,阳性率为20.86%。34份GDH阳性标本中艰难梭菌毒素A/B阳性率为41.18%(14/34),可疑阳性率为17.65%(6/34),阴性率为41.18%(14/34)。结论疑似抗生素相关性腹泻住院患者艰难梭菌GDH检出率较高,毒素A/B阳性率也比较高,提示临床应重视抗生素相关性腹泻患者艰难梭菌感染的诊断。

螨变应原注射液体外效力评价方法的建立及验证

目的:针对铝佐剂吸附的螨变应原注射液缺乏有效的生物效力评价方法的现状,探索用基于ImmunoCAP仪的荧光酶联免疫分析方法(ImmunoCAP法)作为该制品体外效力评价方法可行性,以促进该制品质量标准的提高。方法:利用ImmunoCAP法测定螨变应原注射液对过敏病人血清中IgE的抑制率(又称为变应原活性),作为该制品效力评价的检测指标。研究中分析了该方法的特异性;探索了孵育时间、温度、血清稀释度、变应原浓度等条件对抑制率的影响;验证了该方法的精密性;测定了13批维持剂量螨变应原注射液的总变应原活性和上清游离变应原活性。结果:应用ImmuonCAP法测定维持剂量螨变应原注射液对过敏病人血清IgE抑制率,具有较好的特异性;维持剂量制品对血清中特异性IgE的抑制率与变应原浓度具有明显的量效反应关系;该法具有很好的精密性,RSD最大不超过5%;13批维持剂量制品总变应原对血清中IgE抑制率均大于50%;上清中游离变应原对血清中IgE抑制率均不高于20%。结论:ImmunoCAP法可用于铝佐剂吸附的螨变应原注射液的体外效力评价,重复性好,精密度高,操作简便。