Cε3-Cε4蛋白核酸适配子筛选与鉴定

设计并合成随机ssDNA文库,以硝酸纤维素膜为筛选介质,利用SELEX技术筛选人Cε3-Cε4蛋白特异性高亲和力核酸适配子,通过对退火温度、循环次数及靶蛋白与ssDNA摩尔比等关键参数进行优化,建立了适合的筛选体系。ELISA测定各适配子亲和力,获得了人Cε3-Cε4蛋白高亲和力、高特异性适配子,并分析了其一级结构和二级结构。以所获高亲和力适配子分别作为捕获适配子和检测适配子,建立了酶联适配子吸附试验(enzyme-linked aptamers sorption assay,ELASA)方法,灵敏度达到120 ng.mL-1,可用于人IgE的定量检测。