复合蛋白酶交联酶聚集体制备枸杞蛋白多肽

该研究利用交联酶聚体技术制备出复合蛋白酶交联酶聚体固定化酶,以酶活回收率为指标,通过单因素实验得到复合蛋白酶交联酶聚集体最佳制备条件:风味蛋白酶与木瓜蛋白酶比例为3∶1,沉淀剂硫酸铵浓度为60%,戊二醛浓度0.5%,交联时间为50分钟,交联pH为7.5。此时最大酶活回收率为80.32%。相比单一蛋白酶,复合蛋白酶交联酶聚集体具有更好的热稳定性和pH稳定性,同时表现出良好的连续多次水解枸杞蛋白的性能。以蛋白水解度为指标,优化后复合蛋白酶交联酶聚集体最佳水解条件为:温度为60℃,pH为6,酶浓度为10 mg/mL,水解时间为100 min,在此条件下枸杞蛋白水解度为41.21%,比游离复合蛋白酶提高了6.9%。

磁性磷脂酶D交联酶聚集体的制备及其酶学性质

以磁性Fe3O4为载体,采用吸附-聚集-交联的方法固定来源于Streptomyces chromofuscus的磷脂酶D(scPLD),制备了磁性磷脂酶D交联酶聚集体(MCLEA)。该方法制备的MCLEA酶活回收率可达72.89%,酶活为(437.00±6.60)U/g。与游离酶相比,MCLEA在不同温度和pH下的稳定性都得到了一定程度的提升,但由于与底物的亲和力降低,需要更高浓度的磷脂酰胆碱(PC)和Ca^(2+)作为反应底物与MCLEA结合。乙醇、四氢呋喃、叔丁醇、乙酸乙酯、乙醚和甲苯对MCLEA的酶促反应具有促进作用,MCLEA在进行连续13次酶促反应后,酶活仍可保留在76%以上,其半衰期为331.67min,该固定化方案可以提高酶的稳定性,从而提高其在催化反应过程中的重复利用性。

交联酶聚集体与仿生硅化技术结合制备固定化脂肪酶

将交联酶聚集体(CLEAs)与仿生硅化技术相结合,制备了交联脂肪酶Candidasp.99-125杂化生物催化剂.以京尼平为交联剂,在最佳条件下制得的脂肪酶CLEAs的酶活达771U/g,回收率达75%;保护剂聚乙烯亚胺(PEI)与Candidasp.99-125脂肪酶共沉淀制备P/CLEAs,其酶活达897U/g,回收率约88%;利用PEI的诱导作用,在P/CLEAs表面形成氧化硅涂层,制得的脂肪酶CLEAs(Coated-CLEAs)显示出良好的稳定性,特别是其抗蛋白酶水解能力、有机溶剂耐受能力、重复使用性能等方面明显提高.

交联酶聚集体——一种无载体酶固定化方法

对一种崭新的无载体酶固定化技术———交联酶聚集体(Cross-linked Enzyme Aggregates,CLEAs)技术进行了文献综述。CLEAs技术是一种将蛋白质先沉淀后交联形成不溶性的、稳定的固定化酶。研究结果显示其活性和稳定性可与交联酶晶体(Cross-linked Enzyme Crystals,CLECs)技术相媲美。由于其制备不需要复杂耗时的结晶、纯化步骤,一般实验室都能实行,因而更有利于研究和应用的普及。该文就CLEAs的制备、在水溶液中的活性和稳定性在有机溶剂中的活性和作用机理及研究进行了介绍讨论。

交联β-葡萄糖苷酶聚集体的制备及其性质

交联酶聚集体法是一种新型的无载体酶固定化方法。本实验用该法固定化黑曲霉β-葡萄糖苷酶,对其制备条件、结构特征、酶学性质进行了研究。结果表明,β-葡萄糖苷酶酶液在冰水浴中经90%的硫酸铵沉淀30min后,以5%戊二醛水溶液进行酶聚集体交联反应,可获得较高活性的交联酶聚集体,酶活回收率达75%,对对-硝基苯基-β-D-葡萄糖苷作用的最适温度、最适pH值和Km值分别为60℃、pH4.0和4.61×10-3mol/L,与游离酶相比,表现更高的底物亲和力。将其用于大豆异黄酮活性苷元染料木素的合成,40min内对染料木苷转化率达到66%。

交联酶聚集体法制备单宁酶及固定化酶性质研究

交联酶聚集体法(cross-linked enzyme aggregates,CLEAs)是一种新型的无载体酶固定化方法。使用该法固定化黑曲霉产单宁酶,制备无载体固定化单宁酶(Cross-linkedenzyme aggregates-tannase,CLEAs-TA),并对其制备条件、结构特征、酶学性质进行分析。结果表明,最优制备条件为单宁酶游离粗酶液在冰水浴中经80%的硫酸铵沉淀30min后,以1.5%戊二醛水溶液进行酶聚集体交联反应,可获得较高活性、较高稳定性的交联酶聚集体,酶活回收率达47.33%,对酯键水解作用的最适温度、最适pH值分别为50℃、4.5,与游离酶相比,表现更高的pH及温度稳定性,重复使用6次后,活力剩余32.86%,其良好的操作稳定性有利于没食子酸丙酯高效转化为没食子酸及广泛应用于水解茶饮料中单宁的反应。

交联草酸脱羧酶聚集体的制备及其性质

为了获得缓解泌尿系统草酸盐结石病症的酶制剂,用无载体固定化方法——交联酶聚集体(CLEAs)制备交联草酸脱羧酶聚集体。使用基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET32a/YvrK诱导表达制备草酸脱羧酶粗酶液,用30%的乙醇进行沉淀分离提纯,纯化倍数为2.7倍,酶活回收率91.2%;在戊二醛添加量为0.06%、pH5、牛血清白蛋白添加量0.5g/L、4℃的条件下处理该酶2h,得到交联草酸脱羧酶聚集体(oxdc-CLEAs),酶活回收率达95.4%;酶学性质研究表明,相对游离草酸脱羧酶,交联草酸脱羧酶聚集体的耐酸性、耐热性、耐胰蛋白酶降解能力均有提高。

乳化法制备交联海藻糖合酶聚集体的研究

交联酶聚集体（CLEAs）是一种高活性的无载体固定化酶，常用的基于溶液法（Sheldon法）制备的CLEAs呈无定形的集簇体，影响其连续使用效率．以海藻糖合酶为模型酶，首次在油包水乳化体系中构建了CLEAs，利用扫描电镜和光学显微镜分析了所得CLEA的微观结构，考察了CLEAs的活性和重复使用性能．结果表明，乳化法制备的CLEAs外观呈较规则的微球形，粒径约20～60μm，其活性和重复使用性能均高于参照Sheldon法制备的CLEAs．

交联海藻糖合酶聚集体的制备及其性质

采用交联酶聚集体(CLEAs)技术制备交联海藻糖合酶聚集体,研究不同沉淀剂、酶与交联剂浓度比例、交联强度及硼氢化钠还原处理对海藻糖合酶CLEAs活性的影响及其结构特征与反应性能。结果表明:采用质量浓度为10mg/mL的酶以质量浓度为30mg/mL的聚乙二醇(PEG)为沉淀剂,以体积分数为0.5%的戊二醛室温交联2h,再以硼氢化钠还原处理后,制备得到的海藻糖合酶CLEAs最适催化温度为70℃,比游离酶提高20℃,最适pH值为7.0,与游离酶相比,CLEAs的温度及pH值稳定性均得到提高,对Zn2+、Cu2+、Fe2+、Al3+金属离子的抗性明显增强。微观形貌分析表明单个海藻糖合酶聚集体粒径在0.2～0.5μm,众多聚集体以"脚手架"结构形成大小不一的集簇。

交联木聚糖酶聚集体的制备及其性质研究

制备了交联木聚糖酶聚集体(CLEAs),并对其酶学性质进行了研究,以提高木聚糖酶的稳定性。通过毛栓菌发酵分离得木聚糖酶,经硫酸铵沉淀后以戊二醛作为交联剂对其进行化学交联,制得CLEAs,并用常规方法测定了各种因素对游离木聚糖酶和CLEAs的影响。在对耐热性、有机相中稳定性和耐酸碱性的研究中,CLEAs均表现比游离酶有较高的稳定性,因此运用CLEA技术可提高木聚糖酶的稳定性,使其广泛应用于饲料等工业生产中。

交联果胶酶聚集体的制备及其对罗布麻的脱胶效果

运用交联酶聚集体技术对枯草芽孢杆菌FM208849所产的果胶酶进行固定化,将制得的交联果胶酶聚集体用于罗布麻皮脱胶。结果表明,以体积分数为4%的戊二醛溶液在30℃水浴中对果胶酶聚集体交联135min,可以得到性能优异的交联果胶酶聚集体;利用5mL的10mg/mL果胶酶CLEAs悬浮液对沤麻液(含罗布麻皮1g)在45℃水浴中脱胶8h,可以使其残胶率降至4.61%;利用交联果胶酶聚集体对沤麻液进行10次脱胶实验后,其残胶率仍可保持在11.25%以下,可重复利用性较高。

模板法制备多孔交联脂肪酶聚集体碳酸钙及其特性

针对传统交联脂肪酶聚集体(cross-linked lipase aggregates,CLEAs)表面密实、比表面积小、无太多孔隙结构、在催化过程中存在扩散限制、影响酶催化效率等问题,该文通过脂肪酶、氯化钙、碳酸钠、硫酸铵共沉淀制备脂肪酶/碳酸钙微球,再加入二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)进行脂肪酶交联自组装,然后用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)去除碳酸钙模板剂,制得多孔交联脂肪酶聚集体微球(p-CLEAs),对其制备条件、结构特征、酶学性质进行研究。结果表明,最佳制备条件为:Ca^2+浓度0.35 mol/L、脂肪酶与Ca^2+比例5:1、沉淀剂饱和度80%、沉淀pH值为8、沉淀时间45 min、DTT体积分数0.2%、交联时间40 min。与常规CLEAs相比,所制备的p-CLEAs在甲醇耐受性、热稳定性和pH值稳定性方面均有明显改善,4℃保藏6个月,仍保持较高的活性。其结构稳定,形貌、孔道尺寸可调控,呈多孔结构,这种多孔结构使得底物分子更容易进入脂肪酶的活性位点,不仅降低了传质限制,还提高了催化效率,具有较高的催化活性。

交联糖化酶聚集体的制备

为了克服游离糖化酶的部分缺点,将游离糖化酶用合适的沉淀剂沉淀后,再用戊二醛作为交联剂进行交联,制备了新型的固定化糖化酶-交联糖化酶聚集体。研究结果表明,糖化酶最适聚集条件为:pH5.6,20℃,5g/L的糖化酶液中加入叔丁醇沉淀,可获得比较理想的糖化酶聚集体;最适交联条件为:向糖化酶聚集体中加入10%戊二醛水溶液交联120min,再经离心、洗涤数次后即得交联糖化酶聚集体,酶活力为游离糖化酶的40.4%。

腈水合酶交联酶聚集体在生成烟酰胺体系中的应用

采用交联酶聚集体(CLEAs)技术和球化酶技术对来自大肠杆菌的ES-NHT-118腈水合酶进行固定化.利用大分子葡聚糖醛作为交联剂交联腈水合酶,在优化了温度、p H、交联剂用量及交联时间后,腈水合酶CLEAs和球化酶的酶活回收率分别达到49.63%及52.88%.利用扫描电子显微镜对2种固定化酶进行了表征,将固定化酶用于催化3-腈基吡啶转化生成烟酰胺.同游离酶相比,腈水合酶CLEAs和球化酶显示了良好的p H稳定性和热稳定性,对高浓度底物的耐受性也有提升.酶活为4 U/m L,底物终浓度为50 mmol/L时,2种固定化酶在重复使用10次后分别保留了73.45%及61.26%的催化产率.

交联青霉素G酰化酶聚集体制备及其催化特性研究

目的考察交联青霉素G酰化酶聚集体催化特性,探讨其应用潜力。方法以硫酸铵为沉淀剂获得青霉素G酰化酶蛋白沉淀,戊二醛交联沉淀的蛋白质制备交联酶聚集体,在此基础上研究交联酶聚集体的催化特性。结果交联粪产碱杆菌来源青霉素G酰化酶聚集体的最适反应温度55℃,最适pH 9.0,其酸碱和热稳定性均优于游离酶,重复使用13批次几乎无酶活性丢失,反应20批次后仍有50.9%的活性。结论交联酶聚集体的稳定性较游离酶好,具有一定的工业应用前景。

交联纤维素酶聚集体制备及其催化特性研究

用90%饱和度的硫酸铵盐析沉淀纤维素酶蛋白,将蛋白沉淀用3%戊二醛交联固定制得交联酶聚集体;研究交联酶聚集体的最适反应温度、最适反应pH、酸碱稳定性、热稳定性、批次稳定性。交联酶纤维素酶聚集体的最高比活性为559.2 U/g湿载体,最适反应温度为60℃,最适pH为9.0。交联酶聚集体的热稳定性和pH稳定性均优于游离酶,重复使用10批活性基本稳定。交联纤维素酶聚集体稳定性较好,具有一定的工业应用前景。

交联柚苷酶聚集体水解柚皮苷制备普鲁宁

为了提高普鲁宁的收率、简化分离提纯的工艺、得到较高纯度的普鲁宁,本实验采用交联柚苷酶聚集体水解柚皮苷制备普鲁宁,以普鲁宁浓度为优化指标,研究了底物浓度、p H、温度、加酶量、反应时间对制备普鲁宁的影响。利用正交设计对水解过程进行优化,确定最佳工艺条件为：柚皮苷浓度13.79 mmol/L、p H=8.0、温度65℃、加酶量18.0 mg/m L、反应时间12.0 h,优化后制备得到的普鲁宁浓度为13.36 mmol/L、收率达到96.87%。连续使用3个批次后,普鲁宁的收率可以达到91.29%,交联酶聚集体的稳定性较好。采用聚酰胺树脂对水解产物进行吸附,体积分数为40%~60%的异丙醇线性梯度洗脱,从0.36 g柚皮苷反应液中可以分离得到0.22 g普鲁宁。

交联酶聚集体转化葡萄糖制备葡萄糖酸的研究

共交联葡萄糖氧化酶-过氧化氢酶具有较好的耐酸性,可以直接转化葡萄糖制备葡萄糖酸。利用正交实验优化其转化条件:反应温度为31℃,转速为150 r/min,加酶质量分数为2.0%,底物质量浓度为150 g/L。发酵罐放大实验显示其转化率可以达到97.2%,并且交联酶的稳定性较好,可以有效的连续使用3个批次,平均转化率为93.8%。利用葡萄糖氧化酶-过氧化氢酶共交联聚集体制备葡萄糖酸是一种简便、高效的方法。

交联肌酸激酶聚集体催化合成磷酸肌酸

从兔肌中分离纯化出肌酸激酶,经乙醇沉淀得到肌酸激酶聚集体,再以氧化葡聚糖为交联剂制备交联肌酸激酶聚集体,沉淀率为90%,相对酶活性为58%。交联肌酸激酶聚集体的pH稳定性和热稳定性显著高于游离酶。以交联肌酸激酶聚集体在碱性条件下催化肌酸和ATP合成磷酸肌酸,转化率(以ATP计)为74%,且可以使用12批次。

酸性木聚糖酶交联酶聚集体的制备条件优化

交联酶聚集体法是一种新型的无载体酶固定化方法,为提高酸性木聚糖酶的稳定性,使用该法固定化微紫青霉产酸性木聚糖酶,制备无载体固定化木聚糖酶,并对其制备条件进行优化。结果表明,优选的制备条件为将质量浓度0.36 mg/m L的酸性木聚糖酶粗酶液在冰水浴中经饱和质量分数为85%的硫酸铵沉淀30 min后,于40℃,加入终体积分数为0.14%的戊二醛,交联4 h可获得较高活性的交联酶聚集体,酶活保留率达42.2%。这有助于酸性木聚糖酶更好地在工业中应用。