吡咯啉-5-羧酸合成酶在人肝癌组织中表达及其对人肝癌细胞系铁死亡的调控作用观察

目的 观察吡咯啉-5-羧酸合成酶(Pyrroline-5-carboxylate synthase,P5CS)在肝细胞癌(Hepatocellular car-cinoma,HCC)组织中的表达变化及其对人肝癌细胞系铁死亡的调控作用。方法 (1)HCC及癌旁组织P5CS检测:选择10例HCC患者的癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法检测HCC及癌旁组织P5CS蛋白;(2)P5CS对人肝癌细胞系Li-7、Huh-7铁死亡的调控作用观察:取对数生长期Li-7、Huh-7,用si ALDH18A1[乙醛脱氢酶家族18成员A1(AL-DH18A1)可编码P5CS蛋白]转染细胞,采用q RT-PCR法检测转染前后Li-7及Huh-7细胞脂质过氧化物合成相关基因ACSL4、LPCAT3、LOX-15,采用WESTERN Blotting法检测转染前后Li-7及Huh-7细胞铁死亡相关蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)。取转染前后Li-7及Huh-7细胞各分为2组,分别加入5μmol/L的铁死亡诱导剂Erastin、同体积DMSO,采用C11-BODIPY荧光探针检测各组细胞脂质过氧化物含量。取转染前、后Li-7及Huh-7细胞各分为2组,分别加入5μmol/L的GPX4靶向抑制剂RSL-3、5μmol/L的Erastin、同体积DMSO,采用C11-BODIPY荧光探针检测各组细胞脂质过氧化物含量。结果 HCC及癌旁组织P5CS蛋白相对表达量分别为6.80±2.10、0.40±0.20,二者比较,P<0.05。与转染前比较,转染后Li-7及Huh-7细胞SLC7A11、GPX4蛋白相对表达量低(P均<0.05)。与转染前比较,转染后加入Erastin、RSL-3的Li-7、Huh-7细胞脂质过氧化物含量均升高(P均<0.05)。与加入Erastin者比较,转染后加入RSL-3的Li-7、Huh-7细胞脂质过氧化物含量高、细胞活性低(P均<0.05)。结论 HCC组织中P5CS表达升高。P5CS可抑制Li-7及Huh-7细胞的铁死亡,P5CS可能通过抑制细胞GPX4表达,调控Li-7及Huh-7细胞的铁死亡。

胱硫醚-γ-裂解酶和胱硫醚-β-合成酶在高血压大鼠阴茎海绵体中的表达

目的:探讨高血压对大鼠阴茎海绵体组织胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)表达的影响及与大鼠勃起功能的关系。方法:健康雄性SPF级自发性高血压大鼠(SHR)与对照组WKY(Wistar-Kyoto)大鼠各10只,于12周龄时测定大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP)、血浆和阴茎海绵体内源性H2S的含量,采用免疫组化和Western印迹分析CSE和CBS在阴茎海绵体内的表达。结果:SHR与WKY大鼠的血清睾酮值没有显著差别,SHR的ICP/MAP在0、3和5 V电刺激盆腔神经节(MPG)时均显著低于WKY组(n=10,P<0.05)。SHR血浆H2S含量显著低于WKY大鼠[(10.49±1.35)μmol/Lvs(21.92±2.75)μmol/L,P<0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S含量显著低于WKY大鼠[(52.60±3.44)nmol/mg prot vs(87.67±2.12)nmol/mg prot,P<0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S生成率也较WKY大鼠显著降低[(1.14±0.07)nmol/(mg·min)vs(4.35±0.32)nmol/(mg·min),P<0.05]。CSE及CBS主要表达在SHR和WKY大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞和血管内皮细胞的胞质,SHR的CSE及CBS蛋白表达量均显著低于WKY大鼠(P<0.05)。ICP/MAP与CSE和CBS表达呈高度正相关(r=0.955、0.977,P均<0.05)。结论:高血压大鼠阴茎海绵体组织中CBS和CSE的表达下降,导致阴茎海绵体内H2S合成减少,可能是高血压引起勃起功能下降的机制之一。

亚甲基四氢叶酸还原酶和胱硫醚-β-合成酶基因多态与唐氏综合征发生的关系

目的探讨母体5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因和胱硫醚-β-合成酶(CβS)基因多态性与唐氏综合征(DS)发生的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测70例DS患儿母亲和117例对照女性的MTHFR两个多态位点(C677T、A1298C),利用SHEsis在线分析软件进行单体型和连锁不平衡分析;PCR法检测CβS 844Ins68基因型。Pearsonχ2检验各基因和基因型频率分布的差异。计算比值比评价相对危险度。结果 MTHFR基因两个多态位点及CβS 844Ins68突变基因频率和基因型频率在病例组和对照组中分布无显著差异(P>0.05)。MTHFR 677T/T/1298(C/C+C/A)联合基因型显著地增加DS发生风险(OR=8.46,95%CI:0.90~79.51,P<0.05)。MTHFR两个多态位点存在连锁不平衡(D’=0.68);677T-1298C单体型与DS发生显著相关(OR=5.22,95%CI:1.37~19.94,P<0.01)。结论 MTHFR两个位点变异联合分析及677T-1298C单体型可能是DS发生的风险因素,不能排除叶酸代谢酶基因多态在DS发生中的作用。

截短人胱硫醚β-合成酶的可溶性表达、纯化及活性鉴定

目的构建截短人胱硫醚β-合成酶(T-hCBS)基因原核表达载体,得到可溶性的T-hCBS蛋白,为同型半胱氨酸检测试剂盒的开发打下基础。方法通过优化T-hCBS基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/T-hCBS,转化大肠埃希菌BL21。使用Ni 2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过HiTrap脱盐柱脱盐,采用比色法检测目的蛋白活性。结果重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为44mg/L,比活约1 100U/mg。15%SDS-PAGE显示其相对分子质量为45kD,与预计大小一致。表达菌体超声破碎后上清及纯化的蛋白溶液均呈现红色。结论成功克隆和表达了T-hCBS蛋白,并得到高产高酶活性的可溶性蛋白,对同型半胱氨酸检测试剂盒的开发有一定的潜在应用价值。

同型半胱氨酸和胱硫醚-β合成酶基因多态性与脑梗死的关系

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)和胱硫醚-β合成酶(CBS 844ins 68)基因多态性与脑梗死的关系。方法运用多聚酶链反应技术和荧光偏振法(FPIA)检测75例脑梗死及143例正常人CBS 844ins 68基因多态性和血浆总Hcy水平。结果①脑梗死组CBS844ins 68 D/D、D/I、I/I基因型频率(%)分别为80.00、17.33、2.67,对照组分别为78.32、18.88、2.8,CBS844ins 68各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的无显著性差异(p>005)。②脑梗死组与对照组血浆Hcy分别为(13.6±5.4)μmol/L和(10.9±2.4)μmol/L,两者有显著性差异(p<0.05)。脑梗死患者血浆总Hcy水平显著高于正常组。结论胱硫醚-β合成酶多态性与脑梗死无明显相关,高同型半胱氨酸血症与脑梗死发生有一定关系。

脑血栓患者胱硫醚-β合成酶的基因多态性研究

目的 :探讨同型半胱氨酸 (Hcy)代谢过程的关键酶之一胱硫醚 -β合成酶 (CBS)基因多态性与脑血栓的关系及其家族遗传性。方法 :采用限制性内切酶片段长度多态性方法检测患者 CBS基因T2 7796 C位碱基突变。结果 :病例组与对照组 CBS基因分布频率和等位基因频数分布差异无显著性(P>0 .0 5 ) ;一级亲属和对照组 CBS基因分布频率差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,C纯合型与对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,杂合型差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,杂合型比纯合型患脑血管病的危险度高 3.2倍。结论 :不能排除 CBS基因 T2 7796

胱硫醚β-合成酶基因多态性及血浆同型半胱氨酸与新疆哈萨克族原发性高血压的关系

目的：探讨胱硫醚β-合成酶（Cystathione beta synthase，CBS）基因 T833C、G919A、844ins68多态性及血浆同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）水平与新疆哈萨克族原发性高血压（Essential Hypertension，EH）的关系。方法选择新疆哈萨克族 EH 患者118例（EH 组）和住院体检者108例（对照组），使用扩增阻滞实变体系法检测 CBS T833C、G919A、844ins68多态性，并采用酶标免疫吸附检测法检测血浆 Hcy 水平，化学发光法检测血浆叶酸、维生素 B12（VitB12）水平。结果EH 组血浆 Hcy 水平均高于对照组（P ＜0．05）。CBS T833C、G919A 纯合型、杂合型血浆 Hcy 水平高于野生型，且差异有统计学意义（P ＜0．05）。EH 组 CBS 基因第833位点 C 等位基因频率、第919位点 A 等位基因频率高于对照组，差异有统计学意义（CBS 833位点 C 等位基因：χ^2＝5．917，P ＝0．015；CBS 919位点 A 等位基因：χ^2＝5．917，P ＝0．020）。通过 Logistic 多元回归去除混杂因素后显示：年龄（OR＝1．120，P ＝0．000，95％ CI 1．077～1．165）、肥胖（OR ＝1．086，P ＝0．040，95％ CI 1．004～1．174）、高同型半胱氨酸血症（OR ＝1．099，P ＝0．039，95％ CI 1．005～1．203）是新疆哈萨克族 EH 的独立危险因素。结论血浆 Hcy水平与新疆哈萨克族 EH 相关。CBS T833C、G919A、844ins68基因多态性可能与新疆哈萨克族 EH 无关。

糖尿病大鼠肾脏胱硫醚-β-合成酶和胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达初步研究(英文)

目的研究糖尿病大鼠肾脏内源性硫化氢(H2S)的两种合成酶胱硫醚-β-合成酶ystathionine-β-synthase CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase CSE)mRNA表达。方法用腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病模型,大鼠随机分为两组:正常对照组(C组)和糖尿病组(D组)。建模第8周,测定24h尿蛋白、血糖及肌酐清除率[1],应用RT-PCR技术检测大鼠肾皮质CBS、CSE mRNA表。结果糖尿病组大鼠尿蛋白、血糖及肌酐清除率均较正常对照组明显升高(P<0.05),但肾皮质CBS、E mRNA表达较正常对照组无显著性差异(P>0.05)。结论CBS、CSE/H2S系统不能通过两种合成酶NA水平的改变而参与糖尿病肾病中血流动力学紊乱发生,其作用通路中的其他环节改变是否参与糖尿病病的发生发展尚需进一步证实。

同型半胱氨酸及胱硫醚β-合成酶基因多态性与2型糖尿病合并冠心病的关系

目的探讨我国北方汉族糖尿病(DM)合并冠心病(CHD)者同型半胱氨酸水平(Hcy)及Hcy代谢相关酶胱硫醚β-合成酶(CBS)的844ins68的基因多态性特点。方法检测104例2型DM合并CHD患者(DM合并CHD)、127例2型DM患者、61例CHD患者和91名健康对照者的Hcy、叶酸、维生素B12、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A-I(apo A-I)、载脂蛋白B(apo B)浓度。应用聚合酶链反应(PCR)分析CBS 844ins68基因多态性。结果DM合并CHD组Hcy水平明显高于DM组和对照组,叶酸、维生素B12水平明显低于DM组及对照组(P<0.01)。DM合并CHD组与CHD组Hcy、叶酸、维生素B12水平差异无统计学意义(P>0.05)。DM组与对照组之间Hcy、叶酸、维生素B12水平差异无统计学意义(P>0.05)。4组CBS 844ins68的基因型及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。Lo-gistic回归分析显示高Hcy水平、年龄、TC是CHD发生的独立危险因素,OR值[95%可信区间(CI)]分别为2.117(1.081～4.145)、1.105(1.070～1.142),1.023(1.005～1.042)(P均<0.05)。CBS 844ins68的OR值(95%CI)为1.254(0.229～6.867)(P>0.05)。结论高Hcy水平是我国北方汉族人2型DM合并CHD发生的独立危险因素。CBS 844ins68基因多态性不是2型DM合并CHD的危险因素。

胱硫醚-β-合成酶参与慢性压迫性损伤大鼠神经病理性痛的作用

目的评价胱硫醚-β-合成酶(CBS)在大鼠神经病理性痛形成中的作用。方法 SPF级健康雄性SD大鼠36只,180～200 g,5～6周龄,采用随机数字表法分为3组(n=12):神经病理性痛组(CCI组)、CBS抑制剂组(CCI+AOAA组)及假手术组(Sham组);鞘内成功置管后第3天,建立大鼠CCI模型(坐骨神经缩窄性损伤法);术后1 d开始连续鞘内注射14 d(每天1次):CCI+AOAA组鞘内注射AOAA(10μg/kg)10μL+生理盐水10μL,Sham和14 d测定热痛阈和机械痛阈。术后7、14 d处死大鼠,取脊髓右侧L4～6背根神经节,检测CBS及NF-κB的表达。结果 CCI组与Sham组比较大鼠术后各时点热痛阈和机械痛阈明显下降(P <0.05),术后7和14 d背根神经节NF-κB p65的表达明显升高(P <0.05);CCI+AOAA组与CCI组比较,术后各时点热痛阈和机械痛阈升高(P <0.05),术后7和14 d背根神经节NF-κB p65表达下调(P <0.05)。结论大鼠神经病理性痛形成与背根神经节CBS的上调,促进NF-κB活化有关。

胱硫醚-β-合成酶在SHR脑组织表达下调

内源性硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）由L-半胱氨酸在胱硫醚-β-合成酶（cystathionine-β-synthase，CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine-γ-lyase，CSE）及半胱氨酸转移酶催化作用下产生，它通过中枢机制参与调节心血管活动。高血压时脑内局部H2S浓度的改变可能参与了高血压的发病，自发性高血压大鼠（SHR）脑内CBS表达未见报道。本实验检测CBS在SHR脑组织的分布及表达，探讨其与高血压发病的关系。

河南汉族深静脉血栓患者胱硫醚β-合成酶基因844ins68多态性检测

目的探讨胱硫醚β-合成酶(CBS)基因844ins68多态性与河南汉族人群深静脉血栓(DVT)形成的关系。方法运用PCR方法,对103例河南汉族DVT患者和250例健康对照进行CBS基因844ins68多态性检测,并进行基因型及等位基因频率分析。结果河南汉族人群CBS844ins68共存在2个等位基因(D和I)和3种基因型(D/D,I/I和I/D)。DVT组与对照组相比,各基因型频率与等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CBS基因844ins68多态尚不能作为河南汉族人群DVT发病的遗传风险因子。

新疆哈萨克族原发性高血压与胱硫醚-β-合成酶T833C基因多态性的相关性

目的探讨胱硫醚-β-合成酶(CBS T883C)基因多态性与新疆哈萨克族原发性高血压的相关性。方法高血压组患者145例平均年龄(49.23±7.56)岁,正常对照组100例,平均年龄(49.90±10.01)岁。应用特异引物PCR反应检测CBS T833C的基因型。结果两组CBS T833C多态位点的基因型和等位基因频率分布比较差异无统计学意义(P>0.05);哈萨克族CBS 833 CC基因型的体质量指数(BMI)水平高于TT型及CT型(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示BMI、同型半胱氨酸(Hcy)及高血压家族史是新疆哈萨克族高血压发病的独立危险因素。结论 Hcy是新疆哈萨克族原发性高血压的危险因素,但CBS T833C位点突变不是新疆哈萨克族原发性高血压的独立危险因素。

同型半胱氨酸及胱硫醚β-合成酶844ins68基因多态性与急性脑梗死的关系

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)水平及胱硫醚β-合成酶(CBS)844ins68基因多态性与急性脑梗死的相关性。方法运用循环酶法和PCR方法检测300例急性脑梗死患者(病例组)及261例健康对照者(对照组)Hcy水平及CBS 844ins68基因型,并进行测序验证。结果病例组和对照组空腹血浆Hcy水平分别为(19.3±7.2)μmol/L和(15.1±4.9)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05),按卒中类型分层后比较,各卒中类型之间Hcy水平差异无统计学意义(P>0.05);病例组CBS 844ins68 D/D基因型频率为98.7%,I/D型频率为1.3%,对照组分别为97.7%和2.3%,病例组和对照组I等位基因频率分别为0.7%和1.1%,两组基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05);病例组D/D和I/D基因型相应的Hcy水平分别为(17.3±6.4)、(20.0±13.4)μmol/L,差异无统计学意义(P>0.05)。logistic回归分析结果显示:在调整传统危险因素后,升高的Hcy水平与急性脑梗死发病有关,CBS 844ins68基因突变与脑梗死无关。结论血浆Hcy水平升高是急性脑梗死的独立危险因素;CBS 844ins68基因突变不影响Hcy水平,可能不足以构成急性脑梗死发病中的独立危险因素。

Hcy及胱硫醚β-合成酶844ins68基因多态性与河南汉族脑梗死的关系

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)水平及胱硫醚β-合成酶(CBS 844ins68)基因多态性与河南汉族人群脑梗死的相关性。方法运用循环酶法和PCR方法检测河南汉族300例脑梗死患者及261例健康对照者Hcy水平及CBS 844ins68基因型,并进行测序验证。结果病例组和对照组平均空腹血浆Hcy水平差异有统计学意义(P<0.05);2组基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05);2组基因型相应的Hcy浓度差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,调整传统危险因素后,升高的tHcy水平和脑梗死发病相关,CBS 844ins68基因突变与脑梗死无相关性。结论血浆Hcy浓度升高是河南汉族脑梗死的独立危险因素;CBS 844ins68基因突变不影响Hcy水平,可能不足以构成河南汉族人群中脑梗死发病中的独立危险因素。

同型半胱氨酸和胱硫醚-β合成酶基因多态性与颅内动脉瘤的关系

目的探讨同型半胱氨酸和胱硫醚-β合成酶基因(CBS)844ins 68基因多态性与颅内动脉瘤的关系。方法运用多聚酶链反应技术和荧光偏振法(FPIA)检测76例颅内动脉瘤及143例正常人CBS 844ins 68基因多态性和血浆总Hcy水平。结果①AD组CBS844ins 68 D/D、D/I、I/I基因型频率(%)分别为78.95、19.74、1.31,对照组分别为对照组分别为78.32、18.88、2.80,CBS844ins 68各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。②颅内动脉瘤病例组与对照组血浆Hcy分别为(16.14±6.72)μmol/L和(10.90±2.44)μmol/L,两者差异有统计学意义(P<0.05),颅内动脉瘤患者血浆总Hcy水平显著高于正常组。结论胱硫醚-β合成酶多态性与颅内动脉瘤无明显相关,高同型半胱氨酸血症与颅内动脉瘤病发生有一定关系。

胱硫醚β-合成酶G919A基因多态性与原发性高血压关系的meta分析

目的综合评估胱硫醚β-合成酶（CBS）基因 G919A 多态性与原发性高血压（EH）发生风险的关系。方法全面检索 PubMed 、Embase 、Medline 、万方数据库、中国知网（CNKI）、维普资讯，收集 CBS 基因 G919A 多态性与 EH 发生关系的病例对照研究，优势比（OR）及95％可信区间（CI）评估关联强度，应用 RevMan5.3软件对纳入研究进行异质性检验和效应值 OR 合并，漏斗图评价发表性偏倚；敏感度分析过程，分别以固定效应模型和随机效应模型合并 OR 值，以评估结果的稳定性。结果共纳入4篇文献6组病例－对照研究，共累计 EH 组患者1147例，健康对照组1138例，根据异质性检验结果选取固定效应模型或随机效应模型合并数据。 Meta 分析结果显示：CBS 基因919纯合子模型（AA vs GG）、杂合子模型（GA vs GG）、显性模型（AA ＋ GA vs GG）、隐性模型（AA vs GG ＋ GA）和基因频率（A vs G）与 EH 关系的合并 OR（95％ CI）分别为3.03（1.95～4.72）、1.49（1.10～2.02）、1.61（1.23～2.10）、2.65（1.26～5.57）和1.55（1.35～1.79），均 P＜0.01。漏斗图未检测出显著的发表性偏倚。结论目前 Meta 分析表明 CBS 基因 G919A 多态性与 EH 发病相关联，尤其是在中国人群。

氨基羟乙酸对慢性酒精中毒大鼠海马杏仁核内硫比氨和胱硫醚-β-合成酶含量及学习记忆能力的影响

目的探究氨基羟乙酸(AOAA)对慢性酒精中毒大鼠学习记忆能力及海马组织、杏仁核组织内硫化氢(H2S)浓度和胱硫醚β-合酶(CBS)表达的影响。方法60只SD雄性大鼠随机分为3组,除正常对照(NC)组外,慢性酒精中毒模型(M)和AOAA治疗(AR)组给予含6%(V/V)酒精的水溶液喂养28d。14d后,AR组腹腔注射AOAA,1次/d,连续14d。随后测试各组学习记忆能力,检测海马和杏仁核组织H2S的浓度和CBS表达。结果与NC组相比,M组第2~4天潜伏期、第2~4天游泳距离、海马组织H2S含量、杏仁核组织H2S含量、海马组织及杏仁核组织CBS平均光密度值均显著升高(P<0.01)。与M组相比,AR组以上各指标均显著降低(P<0.01)。结论AOAA能够减轻酒精对大鼠学习记忆能力的影响,可能与AOAA影响海马、杏仁核内H2S浓度和CBS的表达有关。

胱硫醚-β-合成酶在年轻和老年大鼠海马中的表达分布

目的探讨硫化氢(H2S)合成酶胱硫醚-β-合成酶(CBS)在海马中的分布和表达是否受年龄因素的影响。方法用免疫组化和免疫印迹方法观察年轻(3月龄)和老年(24月龄)大鼠海马中CBS的分布和含量。结果 CBS在年轻和老年大鼠海马中主要分布在颗粒细胞层和锥体细胞层,呈区域性分布,其中CA1区表达最多,CA3区、DG区表达较少;CBS在老年大鼠和年轻大鼠海马中的表达和分布没有变化。结论 CBS在大鼠海马中呈区域性分布,CA1区表达最多,年龄不影响CBS的分布和表达。

胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因T833C突变与中国人群出血性脑卒中发病无关

目的 了解胱硫醚 β 合成酶 (CBS)基因T83 3C突变与中国人群出血性脑卒中之间的关系。 方法 利用PCR和分子杂交技术对该位点在中国人群出血性脑卒中患者 ( 2 0 2人 )中的分布进行检测和分析 ,并与无脑血管病变的人群 ( 190人 )进行比较。结果 TT、TC、CC三种基因型在病例组中分布频率分别为 98 5 1%、1 49%和 0 ,对照组中分别为 97 89%、2 11%和 0 ;两组人群 83 3C等位基因频率分别为 0 74%和 1 0 5 % ,均无统计学明显差异。结论 胱硫醚 β 合成酶基因T83