酶菌协同发酵中草药渣工艺优化研究

本研究旨在筛选适宜的酶菌发酵制剂并建立优化发酵条件,以改善和提高中草药渣的营养价值和生物活性含量。采用三因素三水平正交试验设计,设置三个变量分别为初始含水量(45%、50%、55%)、发酵温度(35、37、40℃)和发酵时间(24、48、72 h),研究纤维素酶、植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌协同混合发酵对药渣营养成分和生物活性含量变化的影响,确定适宜的工艺参数。研究结果表明:酶菌协同发酵咽炎片药渣的最佳发酵工艺条件为初始水分含量55%,发酵温度40℃,发酵时间72 h。黄曲霉毒素B1和呕吐毒素均符合我国饲料卫生生产标准。在此发酵工艺条件下有助于提升发酵药渣的营养价值。

阴沟肠杆菌产AmpC酶菌和非产酶菌的耐药性研究

目的 :探讨阴沟肠杆菌分布特征及产 Amp C酶菌和非 Amp C酶菌的耐药性。方法 :对临床分离的 158株阴沟肠杆菌分布科室、感染部位及对 16种抗生素耐药性进行分析 ,并通过酶粗提物头孢西丁三维试验结合 PCR法检测 Am p C酶。结果 :标本来源主要为患者的痰液、尿液、创口分泌物等 ,科室以重症监护室为多 ,感染部位以呼吸道为主 ,耐药性较高的抗生素为头孢西丁、头孢噻肟、头孢曲松等 ,158株阴沟肠杆菌中产 Amp C酶菌株共 3 3株 ,产 Amp C酶阳性率占总菌株数 2 0 .9% ,产 Amp C酶菌株对各种抗生素的耐药率比不产 Amp C酶的明显增高。结论 :阴沟肠杆菌的耐药与产 Amp C酶有关 。

一种新型淀粉酶的鉴定及其产酶菌株的筛选

对筛选到的菌株ZX99产生的一种新型淀粉酶 (异麦芽低聚糖酶 )进行了分析鉴定。ZX99菌株能产生一种胞外淀粉酶 ,该酶能催化淀粉的降解产生异麦芽低聚糖。对原产酶菌株ZX99多次进行紫外线照射诱变后 ,获得了优良、稳定的变异菌株BS3 2 32 ,其产酶水平为原株的 1 60 %。产物薄层层析证明 ,该酶能催化淀粉的降解 ,产生异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖和异麦芽四糖等低聚糖 ,但对普鲁兰基本不起作用 ,由此证明它是一种不同于新型普鲁兰酶 (neopullulanase)和传统淀粉酶 (amylase)的一种新型淀粉酶。

柞蚕肠道菌群分析及产酶菌的筛选与鉴定

【目的】研究柞蚕肠道菌群结构及产酶菌,探寻具有新的生理功能的微生物,用于研制微生态制剂,以提高柞蚕生产的叶丝转化率及抗病能力。【方法】采用培养法分离柞树叶饲喂的5龄柞蚕幼虫肠道细菌,通过生理生化特性结合16S rDNA系统发育分析,对其肠道细菌群落类型进行鉴定,采用筛选培养基筛选产纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶的菌株。【结果】获得的柞蚕肠道菌有芽孢杆菌、葡萄球菌、肠杆菌,其中以芽孢杆菌为主要菌群。芽孢杆菌是肠道菌中产纤维素酶、蛋白酶的主要菌群;葡萄球菌产蛋白酶能力较弱;肠杆菌不产酶。【结论】柞蚕肠道菌与家蚕肠道菌群结构相似,筛选出的产酶菌活性较高,可以制备微生态制剂用于蚕业生产。

产几丁质酶菌的分离鉴定及其抑菌作用的初步研究

从北京地区的土样、砂样和水样中分离并纯化了产生几丁质酶的菌株 ,其中CT14含几丁质酶活性最高 ,经对其细胞形态、菌落特征的观察和生化特性检测 ,证明该菌株是环状芽孢杆菌 (Bacilluscirculans)。其几丁质酶粗提液能抑制多种植物病原真菌的生长 ,表明它对植物病原真菌的拮抗作用具有广谱性。

野生与养殖银鲳消化道菌群结构中产酶菌的对比分析

实验对野生和养殖银鲳胃、幽门盲囊、前肠、中肠、后肠菌群结构进行了定性对比分析,并对产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶的菌株进行了鉴定。结果发现,野生和养殖种群的消化道菌群结构存在较大差异,且同一种群消化道各部分之间菌群结构也存在较大差异。尽管养殖和野生银鲳均在幽门盲囊中具有最多的可培养细菌菌株,但野生银鲳消化道内主要菌群为嗜冷菌属(Psychrobacter)和Pseudochrobactrum,养殖银鲳消化道主要菌群为不动杆菌属(Acinetobacter)和假单孢菌属(Pseudomonas),两种群共有细菌仅一株,即Psychrobacter piscatorii strain VSD503,但其分别存在于野生与养殖种群银鲳消化道的不同部位。在产酶菌株筛选中发现,野生银鲳消化道内分离到16株产酶菌,其中44%可培养菌能产蛋白酶,56%能产淀粉酶,11%能产脂肪酶,56%能产纤维素酶,部分菌株可产2株以上的消化酶,其中产3种以上酶的菌株有5株,且产酶量丰富。相对于野生银鲳,养殖银鲳消化道内分离到22株产酶菌,主要以产蛋白酶和淀粉酶为主,70%可培养菌可产蛋白酶,21%可产淀粉酶,仅Bacillus thuringiensis strain VITGS可产纤维素酶,无一株菌产脂肪酶,其中只有Bacillus thuringiensis strain VITGS产3种酶但产酶量相对较少。研究可为银鲳人工养殖中潜在益生菌的筛选提供理论依据。

胆红素氧化酶产酶菌株的分离及最佳产酶条件的研究

胆红素是铁卟啉化合物在人体内的代谢产物之一,主要来源于衰老红细胞崩解后的血红蛋白,随胆汁排泄。凡能引起胆红素的生成过多或使肝细胞对胆红紊的摄取、结合、排泄过程发生障碍的因素,都可使血中胆红素浓度增高,出现高胆红素血症。因此,测定血中胆红素水平对临床诊断肝胆疾病,溶血等有着重要的意义。

产纤维素酶菌种TP1202的选育及产酶条件研究

从腐木上分离到 1株纤维素酶活较高的野生纤维素酶产生菌TP0 1,经鉴定为绿色木霉 (Trichodermaviride)。以TP0 1为出发菌株 ,经紫外线、亚硝基胍、硫酸二乙酯和LiCl等物理化学诱变处理 ,最后得到 1株高产突变株TP12 0 2。通过对培养基中氮源、碳源、培养温度、培养时间、培养基的含水量、培养基的起始pH、培养基中葡萄糖含量的研究 ,测定TrichodermavirideTP12 0 2纤维素酶的CMC和滤纸酶活 ,找到了产纤维素酶的较佳条件 ,即 ,稻草粉 :麦麸 =4∶1,物料∶水份 =1∶0 75～ 1,以 (NH4 ) 2 SO4 或NH4 Cl为氮源 ,葡萄糖含量为 1%～ 2 % ,起始pH为 7 5 ,在 30℃下培养 96～ 12 0h左右 ,其酶活力为最高 ,每克干曲CMC酶和滤纸酶活分别达到 2 890 0U、6 0 4U ,是出发菌株的 3倍和 6倍。

一种具有纤溶活性的枯草杆菌蛋白激酶的研究──Ⅰ高产酶菌株的筛选与鉴定

本文主要阐述了一种具有纤溶活性的枯草杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）蛋白激酶产生菌株的筛选与鉴定的研究结果。作者从初筛的１２株Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｌｉｌｉｓ菌中，通过对固体发酵和液体发酵所产生的枯草杆菌蛋白激酶，用琼脂糖－纤维蛋白平板法测其活性，经比较不同菌株的活性，筛选出两株高产酶菌株：Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＨＷ—１２和Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＨＷ—３。同时对菌体和菌落形态特点、生理生化反应进行了鉴定，认为Ｂ．ＳｕｂｔｉｌｉｓＨＷ－１２菌株可用来做为发酵生产该酶的菌种。

产柚苷酶菌株B04的分离及产酶特性研究

柚苷酶作为金柚和柑桔果实中主要苦味物质的分解酶有望在深加工生产中得到应用。本研究在金柚树林下土壤和金柚皮腐烂液中分离得到产柚苷酶菌株。研究证明采用添加低浓度蔗糖作为碳源的高层试管法是可行的初筛方法;复筛得到菌株B04,产酶需要诱导,酶底物柚苷和产物鼠李糖均有诱导作用,其中柚苷诱导作用更好,而且添加量为0.02%时菌株产酶能力较强;B04发酵类型为非生长偶联型,30℃,175r/min旋转摇床培养,60h菌体量最大,96h酶活力最高,达到342U/mL。

一步法制备高果糖浆工程及产酶菌体营养价值研究

利用克鲁维酵母菊粉酶酶解菊粉制作高果糖浆 ,优选的酶解条件是 :菊糖浓度15.0 % ,酶作用剂量 2 2U/g ,50℃下作用 6～ 36h ,底物水解率 >95%。水解产物中果糖占95%以上 ,葡萄糖占 5%以下 ,不含其它糖。产酶酵母所含营养物质非常丰富。真蛋白含量4 3.10 % ,赖氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、色氨酸分别是 3.0 2、0 .58、0 .4 4、0 .52mg/kg ,维生素B1和B2含量分别是 5.53和 6 0 .70mg/kg ,重要微量元素铜、锌、铁、锰的含量分别是 19、110、170和 15mg/kg。在本研究设计工艺下 ,高果糖浆和高值兼用酵母生产可以一举两得。

酶菌复合制剂对断奶仔猪生长性能、肠道微生物和血清指标的影响

本试验旨在研究保育料中添加酶菌复合制剂对断奶仔猪生长性能、肠道微生物和血清免疫指标的影响。试验选择108头健康的33日龄杜×长×大三元杂交仔猪,随机分为3组,每组6个重复,每重复6头仔猪(公、母各半)。对照组饲喂基础饲粮,抗生素组饲喂基础饲粮+100 mg/kg杆菌肽锌+50 mg/kg硫酸粘杆菌素+100 mg/kg喹乙醇;酶菌复合制剂组饲喂基础饲粮+0.5 g/kg酶菌复合制剂(啤酒酵母菌、地衣芽孢杆菌、碱性蛋白酶等)。结果表明:酶菌复合制剂对断奶仔猪的末重、平均日增重、平均日采食量和饲料转化率没有显著影响(P>0.05);酶菌复合制剂组与对照组相比肠道乳酸菌含量增加,大肠杆菌含量降低,但各组间差异不显著(P>0.05);酶菌复合制剂组球蛋白含量显著高于对照组(P<0.05),白蛋白/球蛋白显著低于对照组(P<0.05),胰岛素样生长因子-1含量显著高于其他组(P<0.05),血清总蛋白和免疫球蛋白Ig G有增加趋势(0.05≤P<0.01)。综上所述,饲料中添酶菌复合制剂对断奶仔猪生长性能及肠道微生物没有显著影响,但能影响部分血清生化及免疫指标,在一定程度上提高了断奶仔猪的免疫力。

浓香型白酒产糖化酶菌株筛选及产酶条件研究

利用透明圈法从浓香型白酒曲房空气中筛选得到1株产糖化酶能力较强的菌株(J8M-53),液体培养96h后,糖化酶活性可以达到887U/mL。研究发酵条件对该菌株产糖化酶能力影响,结果表明:虽然该菌株产糖化酶的最适初始pH值、培养温度和最佳碳源分别为5℃、30℃和可溶性淀粉,但在pH值为4,培养温度为40℃时酶活依然保持在较高的水平,且菌株对其他各碳源都有一定的利用。该菌株属于好氧菌或者兼性厌氧菌,对氧的需求量较大。另外,该菌株对酒精有一定的依赖性,并具有较强的耐酒精能力,当培养液中酒精浓度为6%vol时,菌株的糖化酶活性最高,酒精浓度为12%vol时的糖化酶活性是最大值的74%。

复方B-内酰胺类抗生素对临床常见产酶菌的体外抗菌活性比较

目的 比较哌拉西林 /舒巴坦、氨苄西林 /舒巴坦、头孢哌酮 /舒巴坦、哌拉西林 /三唑巴坦联合制剂与哌拉西林、氨苄西林及亚胺培南 /西司他丁对 471株临床分离产酶菌的体外抗菌作用。方法 以琼脂平皿两倍稀释法测定最低抑菌浓度 (MIC)。结果 哌拉西林 /他唑巴坦的体外抗菌作用稍强于哌拉西林 /舒巴坦 ,两者比较哌拉西林显示出较强的抗菌活性。氨苄西林 /舒巴坦与氨苄西林比较显示出较强的抗菌活性 ;头孢哌酮 /舒巴坦对产酶G-杆菌的 MIC90 值 ,较哌拉西林 /舒巴坦、氨苄西林 /舒巴坦、哌拉西林 /三唑巴坦低 8～ 16倍 ;亚胺培南 /西司他丁比较哌拉西林 /舒巴坦、氨苄西林 /舒巴坦、头孢哌酮 /舒巴坦、哌拉西林 /三唑巴坦具有更强的抗菌活性。结论 哌拉西林 /舒巴坦、氨苄西林 /舒巴坦、头孢哌酮 /舒巴坦、哌拉西林 /三唑巴坦及亚胺培南 /西司他丁对临床常见产酶菌均有很好的抗菌活性。

响应面法优化银杏果酶菌协同发酵工艺

本文旨在运用响应面法优化银杏果的酶菌协同发酵工艺,以期得到一种抗氧化活性高的银杏发酵粉。通过单因素实验探讨了料液比、复合酶制剂添加量、糖化酶和α-淀粉酶添加质量比、酶解时间、混合发酵剂添加量、植物乳杆菌和酿酒酵母添加质量比、发酵时间对银杏发酵粉可溶蛋白含量和DPPH自由基清除效果的影响;并以DPPH自由基清除率为指标,通过响应面分析对银杏果酶菌协同发酵条件进行优化。结果表明,在复合酶制剂添加总量0.3 g/100 g,酶解2 h,发酵12 h的基础上,银杏果酶菌协同发酵最佳工艺为:料液比1∶6 g/mL,糖化酶和α-淀粉酶添加质量比2∶1,混合发酵剂添加总量3.12 g/100 g,植物乳杆菌和酿酒酵母添加质量比1∶1,测得DPPH自由基清除率为69.7%±1.1%,与模型预测值基本一致。由最佳工艺制得的银杏发酵粉(GFP)与未处理的银杏粉(G)相比,DPPH自由基清除率增加了257.4%;可溶蛋白含量4.47±0.13 g/100 g,增加了330%;黄酮含量0.15±0.01 mg/g,增加了50%;多酚含量2.49±0.04 mg/g,增加了118%;银杏酸含量2.96±0.32μg/g,脱除率达85.4%。说明酶菌协同发酵能显著(P<0.05)提高银杏果的抗氧化活性,制得的银杏发酵粉中可溶蛋白、黄酮、多酚等抗氧化成分含量显著(P<0.05)增加、有毒成分银杏酸含量显著(P<0.05)降低,为银杏果的精深加工提供物质基础。

工厂化循环水养殖条件下云纹石斑鱼消化道产酶菌的分离鉴定

采用16S r DNA-PCR菌群分离鉴定的方法,对循环水养殖条件下云纹石斑鱼(Epinehelus moara)幼鱼的胃、幽门盲囊、前肠、中肠和后肠的菌群结构进行了鉴定,用产酶菌筛选培养法对产消化酶的菌株进行了分离鉴定,并测试了各菌株消化酶的活力。研究发现,云纹石斑鱼幼鱼消化道内可培养的主要菌群为假单胞菌属(Pseudomonas)、微小杆菌属(Exiguobacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和葡萄球菌属(Staphylococcus),其中产消化酶的菌株占可培养菌的55.6%。在产酶菌中,同一株菌产3种酶的有5株;产2种酶的有9株;中肠和后肠的菌株数最为丰富,胃次之,幽门盲囊和前肠菌群种类较少;产脂肪酶的菌株都集中在中肠。产消化酶的菌株主要以产蛋白酶和淀粉酶为主,且产酶量丰富,产蛋白酶活力最高达(87.732±1.134)U/m L;淀粉酶活力为(77.176±0.599)^(73.458±0.574)U/m L;产纤维素酶的菌仅一株,且酶活力较低。分析得知,消化道的菌群结构直接影响了外源性消化酶的种类与活性。本研究为工厂化循环水养殖条件下产酶有益菌的筛选提供了理论依据。

产几丁质酶菌拮抗烟草黑胫病菌研究

从烟草根际土中分离筛选到两株产几丁质酶能力较高、对烟草黑胫病菌有稳定拮抗作用的菌株ZY-9-1和ZY-19-2。将两菌株发酵液用于烟草黑胫病菌的拮抗试验和初步大田防治试验并研究其对烟叶品质的影响,结果表明:在培养基平板上,量菌株发酵液对烟草黑胫病菌的生长有较好的抑制作用;菌株ZY-9-1和菌株ZY-19-2发酵液应用于大田后,对烟草黑胫病有一定的防治效果,防效分别达到56%和50%;试验样品经过常规化学分析和感官评吸,结果表明菌株发酵液对烟叶品质无不良影响。

九孔鲍肠道中产酶菌株的筛选及其与深圳湾菌株的比较

对九孔鲍肠道环境中的微生物进行了初步的分离和筛选。试验结果表明,在鲍鱼消化道中存在着能分泌蛋白酶、脂肪酶和纤维素酶的微生物。同时,将九孔鲍肠道中分离筛选获得的菌株与深圳湾水体中分离筛选的微生物作了相应的比较,通过分析鲍鱼肠道内菌群的特点,找出能分泌多种酶的有益微生物,再把它作为益生菌用于饲料工业,将提高饲料的利用率,促进鲍鱼的生长。

大曲中高产糖化酶菌株的筛选及环境耐受性分析

[目的]分离适应酿造环境的高产糖化酶大曲土著菌株,用于大曲强化,以减少山西老陈醋酿造过程中的大曲用量,提高原料利用率并改善醋品品质。[方法]以酒精发酵24h的酒醅为样品,用Martin培养基对大曲中的霉菌进行分离,分别以透明圈和酶活大小进行初筛和复筛获得高产糖化酶菌株,以生长量为指标进行环境耐受性分析。[结果]初筛获得的10株产糖化酶菌株中M2、M5、M6、M8、M15的产酶能力（U·mL-1）高于公认的糖化酶高产菌株AS3.4309（M0）,依次为M6（3912.08（32.1）〉M5（1413.16（13.92）〉M8（1233.63（71.07）〉M15（1152.47（21.96）〉M2（923.86（22.42）〉M0（828.88（22.23）。环境耐受性分析结果表明,5株霉菌均能耐受6%的乙醇浓度,在pH3.5生长良好,有的甚至能耐受pH2.0,在15~30℃范围内均可生长。[结论]获得的5株霉菌,不仅产糖化酶能力高于公认且应用广泛的AS3.4309,还能耐受山西老陈醋的整个酿造过程。

头孢唑林联合舒巴坦对90株产酶菌的体外抗菌活性

用液体培养基试管二倍稀释法测定头孢唑林联合舒巴坦对常见临床分离产酶菌的最低抑菌浓度（ＭＩＣ），并与头孢唑林进行比较。９０株产酶菌中金葡球菌２０株、表葡球菌４株、大肠埃希氏菌３５株、克雷伯氏菌２５株、其它６株，产酶菌鉴定采用ｎｉｔｒｏｃｅｆｉｎ试棒。结果９０株产酶菌中３４株（３７．８％）对头孢唑林耐药（ＭＩＣ≥３２ｍｇ／Ｌ），而仅有１９株（２１．１％）对头孢唑林／舒巴坦（２１）耐药，两者比较有显著差异（Ｐ＜０．０５）。头孢唑林／舒巴坦（２１）对其中６５．６％菌株显示出协同或累加抗菌作用，与头孢唑林比较，ＭＩＣ降至其１／２～１／２８，其中包括２５株耐头孢唑林菌株。此外，对３５株产酶菌株测试，头孢唑林／舒巴坦（２１）较头孢唑林／舒巴坦（１１）显示出更强的体外抗菌活性。