南宁地区某院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型与基因型检测

目的了解南宁地区某院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性及碳青霉烯酶产生情况,为CRKP感染防控提供依据。方法收集2021年1月至2022年2月临床分离的CRKP共46株,用PhoenixM50全自动微生物鉴定药敏分析仪进行药敏试验,采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行碳青霉烯酶表型筛选,用PCR扩增碳青霉烯酶耐药基因。结果46株CRKP对厄他培南100%耐药,对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为76.1%和78.3%,对除氨曲南外的其他β-内酰胺类药物的耐药率均为100%,对替加环素耐药率为0,对多黏菌素B(4.3%)及阿米卡星(32.6%)耐药率较低;碳青霉烯酶表型筛选试验检出单产A类碳青霉烯酶菌株33株(71.7%),单产B类金属β-内酰胺酶9株(19.6%),单产D类OXA-48型碳青霉烯酶2株(4.3%),同时产A类和B类碳青霉烯酶2株(4.3%);46株CRKP均检出碳青霉烯酶耐药基因,其中,33株(71.7%)仅携带KPC-2基因,7株(15.2%)仅携带NDM-1基因,2株(4.3%)仅携带VIM-1基因,2株(4.3%)仅携带OXA-48基因,2株(4.3%)同时携带KPC-2和NDM-1基因,未检出IMP型。结论某院分离的CRKP对常见抗菌药物具有高度耐药性,主要产KPC-2型碳青霉烯酶,应加强抗菌药物合理使用、CRKP酶型检测与感染控制,有效防范院内感染。

中国对虾病虾体内同工酶表型变化的初步研究

应用对流免疫电泳及核酸探针检测技术筛选感染病毒的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）病虾，采用不连续的聚丙烯酰胺凝胶电泳研究病虾体内同工酶的表型变化。用分光光度仪对电泳带扫描分析表明，病虾体内４种同工酶—酯酶（ＥＳＴ）、苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）、谷草转氨酶（ＧＯＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的表型与健康虾比较存在显著差异。其中，ＭＤＨ、ＥＳＴ、ＧＯＴ的变化分别反映病虾体内糖类、脂类、氨基酸等３大物质代谢明显紊乱，ＳＯＤ活性下降，显示病虾免疫防御机能明显衰退。对虾体内同工酶表型变化规律稳定，重复性好。

膀胱癌病人乙酰基转移酶表型的研究

应用ＤＤＳ作为实验药物，采用高效液相色谱法，研究了目前尚存话的有２－萘胺职业接触史的１１名膀胱癌病人、２５名普通膀胱癌病人及２３名接触对照的ＮＡＴ酶表型。结果表明。无论有无２－萘胺职业接触史，膀胱癌病人中慢型乙酰化者所占比例（５２．２％和４５．５％）均高于对照组（１３．０％），且差异有显著性（Ｐ＜０．０５），比值比０Ｒ分别为５．５６（９５％可信限＝１．０２～３０．３）和７．２５（９５％可信限＝１．７０～３０．３），提示慢型乙酰化者若暴露于２－萘胺更易患膀胱肿瘤，乙酰化慢表型是膀胱癌的一个遗传易感因素。

三种AmpC酶表型检测方法临床比较分析

目的分析比较氯唑西林（CLO）、三维试验、改良Hodge试验三种AmpC酶表型的检测方法,总结其临床应用价值。方法选取我院2008年12月~2010年12月筛选的198株革兰阴性杆菌,以AmpC基因聚合酶链反应（PCR）检测结果作为金标准,设为对照组,分别采取氯唑西林（CLO）、三维试验、改良Hodge试验,分别设为观察组A、B、C,观察对比其检测结果。结果三组检出阳性率比较存在明显差异（P〈0.05）,具有统计学意义。以观察组C参照对照组的符合率最高,明显高于其它两组（P〈0.05）,具有统计学意义。结论 CLO对于AmpC酶表型的检测的敏感度与符合率均较低,采取改良Hodge试验的敏感度与特异性均良好,符合率最高,属于AmpC酶表型的检测中较为简便、快速、有效的手段,具有重要的临床实用意义。

重症监护病房老年患者泌尿道感染病原菌药敏及碳青霉烯酶表型分析

目的分析重症监护病房(ICU)老年患者泌尿道感染病原菌分布、药物耐药情况及碳青霉烯酶表型,为院内感染的防控及此类患者临床抗生素经验用药提供参考。方法回顾性分析2019年9月至2021年8月,南京某老年医院ICU收治的年龄65周岁以上泌尿道感染患者中段尿培养结果信息,分析患者致病菌分布及药物耐药情况。结果共收集到符合诊断标准的合格中段尿标本400份,其中262份阳性,阳性率为65.50%;革兰阴性杆菌占63.36%,以大肠埃希菌为主,占24.81%;革兰阳性球菌占32.82%,以金黄色葡萄球菌为主,占17.56%;真菌3.82%,以白色念珠菌为主,占2.29%;革兰阴性杆菌对阿米卡星、美罗培南敏感性较好,对环丙沙星敏感性最差;革兰阳性球菌对万古霉素、利奈唑胺均敏感,对红霉素敏感性最差;真菌对所测药物均敏感;耐碳青霉烯类肠杆菌(CRE)占肠杆菌目细菌27.85%,以肺炎克雷伯菌为主;耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP)以产A类丝氨酸碳青霉烯酶为主,对头孢他啶-阿维巴坦敏感性好,耐碳青霉烯酶大肠埃希菌(CREi)以产B类金属β内酰胺酶为主。结论老年患者泌尿道感染病原菌以革兰阴性杆菌为主,多重耐药菌检出率较高,应根据药物敏感性试验结果及时调整治疗方案。

UPLC-MS/MS研究披针灰叶素B在不同种属肝微粒体中的代谢稳定性及代谢酶表型

应用体外肝微粒体孵育体系,研究披针灰叶素B(lanceolatin B)在大鼠、人、比格犬、猴肝微粒体中的代谢稳定性及体外代谢参数,确定主要代谢披针灰叶素B的CYP酶表型。将披针灰叶素B与不同种属肝微粒体共同孵育,应用UPLC-MS/MS检测孵育液中披针灰叶素B的含量,考察其代谢稳定性与体外代谢动力学参数。将披针灰叶素B与各CYP450同工酶CYP2E1,2C19,1A2,2D6,2C9,3A4,2A1的特异性抑制剂共同孵育,确定其代谢酶表型。研究结果显示,披针灰叶素B在人、比格犬肝微粒体中不代谢,而在大鼠与猴肝微粒体中可代谢,它们的体外半衰期(T_(1/2))与固有清除率(CL_(int))分别为11.57,8.07min和0.12,0.17 m L·min-1·mg-1,结果没有显著性差异;披针灰叶素B在肝微粒体中的代谢存在种属差异,在大鼠肝微粒体中由多个酶共同参与代谢,其中CYP1A2酶的作用最强,是主要代谢披针灰叶素B的酶。

膀胱癌与乙酰基转移酶活性遗传表型关系的初步研究

研究了46名男性6(名有联苯胺接触史的膀胱癌患者,20名普通的膀胱癌患者和20名健康自愿者),以磺胺二甲基嘧啶(SMZ)为底物进行了乙酰基转移酶活性遗传表型的鉴定。每个受试者尿样和血样的鉴定结果表明凡尿样为慢型者,血样亦为慢型;反之亦然。结果表明,还显示,在6名有联苯胺接触史的膀胱癌患者中,3名的遗传表型为慢型,其慢型率显著高于健康志愿者(P<0.05),而20名普通膀胱癌患者中,表型为慢型者为5名,其慢型率虽为健康志愿者的5倍,但没有表现统计上的显著性。另外,全部26名膀胱癌患者中慢型率也显著高于健康志愿者(P<O.05)。结果同时表明,有联苯胺接触史的膀胱癌患者中的慢型率高于普通膀胱癌患者,但也无显著差异。 本研究结果提示,乙酰基转移酶活性遗传表型与膀胱癌的发生有密切关系,而且联苯胺接触可能会对遗传表型有某种程度的影响,但由于例数较少,尚难得出可靠的结论,尚须进一步扩大样本作深入研究。

鲍曼不动杆菌的同源性及碳青霉烯酶基因分析

目的:研究临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性演变、同源性、产碳青霉烯酶类型及碳青霉烯酶基因型。方法:收集临床分离的72株鲍曼不动杆菌,采用VITEK-II药敏分析系统对72株鲍曼不动杆菌进行18种抗菌药物的敏感性检测。采用肠杆菌科基因间一致重复序列聚合酶链技术(ERIC-PCR)进行基因分型和同源性比对。用改良Hodge试验检测杆菌的产碳青霉烯酶表型,对碳青霉烯酶基因blaOXA-23,blaOXA-40和blaOXA-58进行PCR扩增及序列分析。结果:72株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,为8.33%,其次是阿米卡星,对其余抗菌药物的耐药率均高达70%以上。ERIC-PCR技术将其分为7个基因型,同源性分析显示其中4个基因型在医院内流行。产碳青霉烯酶的菌株有56株,blaOXA-23扩增阳性的有61株,blaOXA-58扩增阳性的有1株。结论:鲍曼不动杆菌耐药严重,且存在院内感染传播的现象;产碳青霉烯酶的菌株较多,主要的碳青霉烯酶基因型为blaOXA-23;湖南省存在blaOXA-58阳性鲍曼不动杆菌株。

UFLC-MS/MS研究胡椒碱在不同种属肝微粒体中的代谢稳定性和代谢表型

应用体外肝微粒体孵育体系,考察胡椒碱在人、SD大鼠、小鼠、恒河猴和比格犬5个种属肝微粒体中的代谢稳定性,比较代谢的种属差异,确定其在人肝微粒体中的代谢表型。通过UFLC-MS/MS检测方法,测定胡椒碱在各个种属肝微粒体中孵育后的剩余浓度,考察他们的代谢稳定性及体外代谢动力学参数。采用化学抑制法考察胡椒碱在人肝微粒体中的代谢表型。结果表明胡椒碱在人、SD大鼠、小鼠、恒河猴和比格犬的肝微粒体中,半衰期T1/2分别为31. 36、48. 46、138. 60、147. 45、165. 00 min;体外固有清除率CLint分别为0. 0442、0. 0286、0. 0100、0. 0094、0. 0084m L/(m L·mg);在人肝微粒体中,胡椒碱主要被CYP3A4和CYP2C9酶代谢。推测胡椒碱在各种肝微粒体中的代谢均相对较稳定,其中大鼠和人的肝微粒体代谢性质最相近,在后续的实验中可以考虑用大鼠的代谢结果预测人的代谢结果;人肝微粒体中参与胡椒碱代谢的酶主要有CYP3A4和CYP2C9。

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌表型检测及其耐药性研究

目的了解耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)感染状况及其产酶类型。方法采用最低抑菌浓度(MIC)法分析肠杆菌科细菌的耐药情况。采用厄他培南纸片扩散法初筛产碳青霉烯酶菌株,对初筛阳性菌株分别采用改良Hodge试验、加硼酸或苯唑西林的改良Hodge试验、EDTA亚胺培南复合纸片法进行表型确证。结果肠杆菌科细菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为2.7%、2.3%。厄他培南纸片扩散法初筛阳性菌株11株,其中改良Hodge确证试验阳性(或弱阳性)菌株3株,包括产金属酶菌株1株,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)或AmpC酶菌株2株。2株改良Hodge确证试验弱阳性菌中未检出碳青霉烯酶基因,但检出AmpC、TEM、CTX-M基因,改良Hodge试验阳性菌中检出blaIMP基因。结论改良Hodge试验、加硼酸或苯唑西林改良Hodge试验及EDTA亚胺培南复合纸片法相结合进行碳青霉烯酶检测,在暂无条件开展基因分型的医院具有很好的应用前景。

加拿大披碱草-野大麦三倍体杂种加倍植株同工酶分析

分析了加拿大披碱草-野大麦三倍体属间杂种F1加倍植株的同工酶酶谱特征。结果显示:同一生育阶段杂种自然加倍植株与加倍F1代植株在EST、POD和SOD酶带的数目、位点及强弱方面具有一致性和遗传稳定性,而与杂种F1代及亲本的酶带表型差异显著,从酶蛋白分子水平证明该杂种F1染色体加倍是真实的;加倍植株抽穗期旗叶的EST、POD酶谱中分别呈现9和4条酶带,分蘖期幼叶的EST、POD、SOD酶谱内分别呈现8、4和4条酶带,有多态性位点的特征酶带可作为杂种加倍后代育性恢复鉴定的遗传标记的候选位点;对供试材料不同生育阶段做同工酶酶谱对比分析,比单一生育阶段更能反映其酶带表型的遗传差异性,提高同工酶电泳技术鉴定结果的准确性。

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌同源性及碳青霉烯酶基因分析

目的研究云南省昆明地区碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的耐药性、同源性及碳青霉烯酶基因的携带情况。方法收集2009年10月-2010年10月云南省昆明地区临床分离的碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌215株。应用改良Hodge试验、EDTA双纸片增效试验筛选产碳青霉烯酶的菌株,PCR扩增分析碳青霉烯酶的基因型,随机扩增多态性技术(RAPD)分析菌株的同源性。结果 215株多重耐药鲍曼不动杆菌中,190株(88.4%)检出OXA-51基因;150株(69.8%)检测出OXA-23基因,其中140株OXA-23表达菌在改良Hodge试验中为阳性;12株(5.6%)检出VIM基因且EDTA协同实验均为阳性。RAPD技术将215株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌分为7个基因型,其中A型为主要克隆。结论 OXA-23和OXA-51是本地区碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的主要基因型,已出现VIM型碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌,且多重耐药鲍曼不动杆菌存在院内感染的现象。

抗肿瘤化合物E7在不同种属肝微粒体酶中的体外代谢研究

采用商品化的人、Beagle犬、食蟹猴、SD大鼠的肝微粒体酶,考察E7在4个种属肝微粒体中的代谢稳定性,比较代谢的种属差异。采用选择性化学抑制剂,测定不同抑制剂对E7代谢速率的影响,分析预测大鼠肝微粒中参与E7代谢的主要亚酶。实验结果显示E7在人、犬、食蟹猴和大鼠4个种属的肝微粒体中体外代谢半衰期T1/2分别为57.75,69.30,16.90,30.13min;体外固有清除率分别为0.004 8,0.004 0,0.016 4,0.009 2 m L·min^(-1)·mg^(-1)。推测E7在人和犬肝微粒体中代谢速率相近,均比较慢;在猴和大鼠肝微粒体中代谢速率相近,均比较快;代谢速率存在明显的种属差异。CYP2E1,CYP2A6,CYP1A2和CYP2D6均可能参与代谢E7,而多态性的CYP3A4对其的代谢贡献较小。

水黄皮素在大鼠肝微粒体中的代谢研究

目的研究水黄皮素在大鼠肝微粒体中的代谢稳定性,确定水黄皮素的代谢酶表型。方法将水黄皮素与大鼠肝微粒体于37℃孵育,应用UPLC-MS/MS法检测孵育液中水黄皮素的含量,考察水黄皮素的代谢稳定性。将水黄皮素与各细胞色素P450(CYP)酶中的各同工酶CYP2E1、2C19、1A2、2D6、2C9和3A4的特异性抑制剂共孵育,确定其代谢酶表型。结果在大鼠肝微粒体中,水黄皮素的t1/2=1.97 h、Cl=0.70 m L·h-1·mg-1,CYP1A2是其主要代谢酶。结论水黄皮素在大鼠肝微粒体中是由多个CYP同工酶介导代谢的,其中,CYP1A2酶的介导作用最强。