酶软剂和鼓液蛋白质水解活力分析方法的优化

不久前，本实验室发表了两篇论文，对以蓝皮粉（ＨＰＡ）为底物，测量酶软剂和鼓液（含酶软剂）的蛋白质水解活力的方法进行了探讨。在此之后，我们发现，在储存过程中，ＨＰＡ有时会大大丧失对于蛋白质水解酶的敏感性。这促使我们对于实验采用的底物和影响分析的各个因素又进行了深入研究，从根本上改进了分析方法。在使用ＨＰＡ之前，先对其进行活化处理，活化过程包括减小底物粒子大小和温和的加热处理。每次分析采用２００ｍｇ底物，而非原来的５０ｍｇ。将被分析试样的溶液澄清后放入培育试管（２５ｍｍ×１５ｍｍ的螺帽试管），而不像原来那样，采用未经净化的材料。由于还发现温度每变化１℃，蛋白质水解活力改变１０～１５％，所以很好地控制温度也是必要的。在研究中，我们采用了振荡式水浴培养器，温度控制在３７℃，转速为４００转／分。在环境温度下（大约２５℃），培养时间从２０分钟减少到１０分钟，而在３７℃下，减到只需５分钟。这些改进是成功的，不仅提高了测试的灵敏度，而且测得的颜色与酶的浓度成线性关系，还提高了实验的重现性。