微量乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性的几个主要影响因素

对乳酸脱氢酶释放法测定小鼠脾脏 NK细胞活性中的酶促反应时间、效靶细胞比例、检测波长、细胞毒试验孵育时间、维持液中小牛血清 ( FCS)浓度等 5个重要的影响因素进行了探索。结果显示 ,酶促反应时间以 1 0 min最佳 ;效靶细胞比例以 1 5∶ 1为适宜 ;最适检测波长为 570 nm,其结果线性关系好 ;细胞毒试验孵育时间以 2 h为宜 ;维持液中小牛血清以低浓度为宜 ,其结果更接近自然杀伤百分率计算公式 ,并选用 2

乳酸脱氢酶释放法检测鸡自然杀伤细胞活性条件的优化

以肉仔鸡外周血自然杀伤(NK)细胞作为研究对象,探讨乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性中5个最为关键的影响因素,选用Yac-1淋巴瘤细胞作靶细胞.结果表明:效靶细胞比为15∶1,在含2%犊牛血清的RPMI 1640维持液中,效靶细胞于37℃、5%CO2条件下作用2 h,于37℃恒温条件下酶促反应10 min,检测波长为492 nm可获得满意结果;验证试验结果表明,优化的LDH释放法检测鸡外周血NK细胞活性的方法是可行的.

酶释放法用于细胞介导的细胞毒试验问题分析

目的 :检验分析酶释放法用于细胞毒试验存在的问题。方法 :用51Cr释放法和MTT比色法、NAG比色法 ,单独或相互比较 ,检验分析细胞毒试验中效靶细胞相互作用规律 ,酶在细胞代谢中分布情况 ,细胞死伤前后酶释放特点。结果 :以MTT为底物的酶在细胞代谢中主要分布在细胞膜表面 ,而以NAG为底物的酶分布在细胞内。细胞有自主释放酶的功能 ,正常细胞与受损伤细胞释放酶速度不同。细胞毒作用过程中效应细胞也有损伤 ,也有酶释放 ,与靶细胞死伤后释放的酶属于同一类 ,而且混合在一起 ,目前尚无可行的定量分离和鉴别方法。酶释放法用于细胞毒试验 ,对于不同状态的标本检验结果没有规律性 ,不能反映机体免疫功能状态。结论 :酶释放法不宜用于细胞介导的细胞毒试验。

特异性T细胞体外释放酶联免疫法检测结核病的临床应用

目的:探究特异性T细胞体外释放酶联免疫法检测结核病的临床应用价值。方法:选取疑似发生结核病患者128例进行临床研究,患者均在医护人员辅助下完成结核菌素皮肤试验、特异性T细胞体外释放酶联免疫法、结核分枝杆菌分离培养检验,以结核分枝杆菌分离培养结果为金标准,统计前两种方法的诊断结果与诊断效能。结果:结核分枝杆菌分离培养结果如下,阳性、阴性检出率分别是62.50%与37.50%。结核菌素皮肤试验、特异性T细胞体外释放酶联免疫法的阳性率、阴性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。特异性T细胞体外释放酶联免疫法的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值大于结核菌素皮肤试验(P<0.05)。结论:结核病临床诊断中应用特异性T细胞体外释放酶联免疫法,诊断效能较好,值得临床推广。

人结核分枝杆菌相关干扰素-γ释放酶联免疫法对结核病诊断价值的探讨

目的评价人结核分枝杆菌相关干扰素-γ体外释放酶联免疫免疫法(quantitative diagnostic kit for mycobacterium tuberculosis IFN-γrelease assay,TB-IGRA)在结核病的诊断价值。方法选择确诊肺内结核164例、肺外结核90例、肺部感染90例、结核性胸膜炎60例及体检正常人群107例为对照,分别采用TB-IGRA、结明三项等方法对结核分枝杆菌感染进行辅助诊断,并对全部病例进行血沉、CRP、血常规等项目的检测,对结果进行统计学分析评价,并通过ROC曲线评价特异性IFN-γ释放试验的辅助诊断价值。结果结核患者外周血细胞经结核分枝杆菌抗原刺激后释放入血浆中的IFN-γ的含量明显高于肺部感染组和健康对照组,且肺内结核组略高于肺外结核组,差异均有统计学意义(P<0.05)。全部患者释放入血浆中IFN-γ的含量的高低与WBC、PLT计数无相关性,且与ESR和CRP水平呈负相关,但无统计学意义。用血清结核抗体检测试验诊断结核病的灵敏度为78.03%,特异性为37.06%,而TB-IGRA则为76.43%和84.77%。ROC曲线显示,以youden指数最大处的31.84pg/m L为诊断临界点,TB-IGRA诊断结核病的灵敏度为68.8%,特异性为93.4%。结论 TB-IGRA检测肺内、肺外结核病,特异性高,操作简便、快速,准确有效,值得临床推广应用。

干扰素释放酶联免疫法（TB-IGRA）与蛋白芯片法检测结核分枝杆菌的方法比较

目的：比较干扰素释放酶联免疫法（TB-IGRA）与蛋白芯片两种方法检测结核分枝杆菌的特异度、敏感度，评价其在结核病诊断中的价值。方法选取2013年10月-2014年3月收集共计78例临床诊断结核病及正常人外周血标本，分别采用TB-IGRA试剂盒和结核分枝杆菌 IgG抗体检测试剂盒（蛋白芯片）进行检测，并对检测结果进行分析比较。结果蛋白芯片法、TB-IGRA法检出结核分枝杆菌的灵敏度分别为34.5％及89.7％，差异有统计学意义（χ2＝26.95，P＜0.05）；二者的特异度分别为90.0％及95.0％，差异无统计学意义（χ2＝1.64，P＞0.05）。TB-IGRA法在肺结核和肺外结核患者阳性率分别为90.5％，89.2％，均高于蛋白芯片法（芯片法在肺结核和肺外结核患者阳性率分别为42.9％，29.7％）。结论 TB-IGRA法与蛋白芯片法比较，无论是诊断肺结核或肺外结核均具有阳性率高、敏感度较高的优点，可广泛用于结核病的早期筛查。

干扰素体外释放酶联免疫法在孤立性肺结节诊断中的价值

目的评价干扰素体外释放酶联免疫法(TB-IGRA)在以孤立性肺结节病灶为主要表现的结核病中的临床应用价值。方法选取60例经病理确诊为结核病和90例确诊为肺恶性肿瘤的肺内孤立性结节患者,作为结核组和非结核组。采用TB-IGRA检测结核感染T细胞的IFN-γ释放量,同时对患者进行结核菌素皮肤试验(TST)。以病理结果作为金标准,对TB-IGRA和TST的检测结果进行分析,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,比较两种方法的诊断价值。结果TB-IGRA检测结核的灵敏度为80.0%,特异度为87.78%,阳性预测值为81.36%,阴性预测值为86.81%,均显著高于TST(P<0.001),ROC曲线下面积为0.923(95%CI:0.881~0.964)。结核组的IFN-γ释放量明显高于非结核组(P<0.001)。结论 IGRA在判定肺结节病灶是否为结核病方面的准确性明显优于TST。

干扰素释放酶联免疫法(TB-IGRA)与蛋白芯片法检测结核分枝杆菌的方法比较

目的探讨干扰素释放酶联免疫法(TB-IGRA)与蛋白芯片法检测结核分枝杆菌的方法。方法选取我院80例结核病患者采用干扰素释放酶联免疫法(TB-IGRA)与蛋白芯片法进行检测。结果 TBIGRA法的检测结果显著优于蛋白芯片法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结核分枝杆菌采用TBIGRA检测的灵敏度和阳性率均显著高于蛋白芯片。

LDH释放法检测肿瘤患者PBMC和CIK细胞的细胞毒活性

目的建立检测细胞毒活性的乳酸脱氢酶(LDH)测定法,了解肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的抗肿瘤活性,为肿瘤的免疫细胞治疗提供参考。方法采集肿瘤患者和健康成人外周血,常规分离PBMC,体外进行CIK的培养,用LDH释放法分别检测PBMC和CIK对肿瘤细胞K562的细胞毒活性。结果肿瘤患者PBMC对K562的杀伤活力比正常人显著降低(P<0.05)。经多种细胞因子诱导培养7～10d后,健康人和肿瘤患者的CIK对K562的杀伤活力都有显著提高(P<0.01),肿瘤患者CIK杀伤活力接近于健康人。结论肿瘤患者PBMC细胞毒活性显著降低,但经诱导培养成CIK后则显著提高。用LDH释放法检测肿瘤病人CIK细胞毒活力,有助于CIK疗法适应病人的选择及个体疗效观察。

结核菌素皮肤试验、干扰素释放酶联免疫法及核酸分子检测技术在结核病中的诊断价值

目的探讨结核菌素皮肤试验(TST)、干扰素释放酶联免疫法(TB-IGRA)及核酸分子检测(NAT)3种检测方法诊断结核病的价值及差异。方法选取2021年1-12月海口市人民医院(中南大学湘雅医学院附属海口医院)收治的206例疑似结核病患者,206例中确诊为结核病的106例患者为研究组(其中新收治患者17例,治疗1~2个月患者89例),其他肺部疾病患者100例为对照组。两组患者均进行了TST、TB-IGRA及NAT,以临床诊断结果为参考,分析这3种检测方式的临床应用价值。结果研究组3种检测方式阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与TST相比,研究组TB-IGRA、NAT的阳性率更高,对照组TB-IGRA、NAT的阳性率更低,差异有统计学意义(P<0.05);TB-IGRA、NAT检测新收治和治疗1~2个月患者结果无统计学意义(P>0.05);TB-IGRA、NAT符合率、敏感度、特异度、均高于TST检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TB-IGRA、NAT结核病诊断符合率高,均具有较高的敏感度和特异度。

干扰素体外释放酶联免疫法在结核潜伏感染诊断分析

目的探讨干扰素体外释放酶联免疫法(TB-IGRA)在结核潜伏感染中的诊断分析。方法对接受调查的140例健康者资料进行分析,这些健康者在调查前对其进行结核菌素皮试,并采用不同的方法进行IFN-γ平行检测。结果140例健康者中,WT试剂阳性率为25.7%(36/140);QFT试剂阳性率为21.4%(30/140)均高于PPD3+~4+(阳性率为14.3%(20/140));28例密接者中,PPD3+~4+阳性率为39.3%(11/28)低于WT试剂和QFT试剂阳性率(46.4%(13/28)、67.8%(19/28))。结论干扰素体外释放酶联免疫法(TB-IGRA)在结核潜伏感染中检测效果较好,诊断价值要比PPD皮试高,值得推广使用。

体外释放酶免疫技术检测结核分枝杆菌的临床应用

目的评价体外释放酶免疫技术在检测结核分枝杆菌中的临床应用。方法选择临床病例201例包括肺内结核81例、肺外结核25例、不明原因发热95例(其中45例为肺结核),另选健康人群30例,采用体外释放酶免疫技术(TB-IGRA)、胶体金法(TB-Ab)、痰涂片抗酸染色镜检及聚合酶链式反应(TB-PCR)检测。结果 TBIGRA检测肺内结核组、肺外结核组以及不明原因发热组的阳性率明显高于其他检测组,4种检测方法在肺内结核组、肺外结核组、不明原因发热组与健康对照组间差异均有统计学意义(均<0.05);TB-IGRA、TB-AB、痰涂片镜检、TB-PCR的灵敏度分别为91.4%、43.1%、30.9%、23.8%,特异度分别为91.3%、90.0%、98.7%、97.5%;126例肺结核患者中,痰涂片39例阳性和87例阴性,TB-IGRA检测阳性率分别为92.3%、83.9%,两者差异有统计学意义(<0.05)。结论 TB-IGRA有更好的优越性和临床应用,可推广用于临床。

酪蛋白酶解产物对小鼠自然杀伤细胞杀伤效应的影响

以BALB/c小鼠脾细胞为效应细胞,SP20瘤细胞为靶细胞,采用乳酸脱氢酶释放法测定不同水解度及不同截留分子量范围酪蛋白酶解产物对NK细胞杀伤SP20瘤细胞活性的影响。结果发现酪蛋白酶解产物对NK细胞杀伤SP20瘤细胞的活性有一定影响,水解度为18.54%和24.02%的酶解产物较水解度为9.74%的酶解产物的作用效果显著(p<0.05),活性组分的分子量小于3 000Da。

细胞活性测定方法研究进展

细胞活性测定是体外筛选抗肿瘤药物和临床肿瘤药敏试验的重要方法之一;细胞活性的测定方法有MTT法、SRB法3、H-TdR掺入法、LDH法等,根据不同细胞系及其测定原理,它们有各自的优缺点及最适测定条件;概述了近年来细胞活性测定的几种常见方法、原理及应用特点。

油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量快速测定方法的研究

本研究对油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量的检测方法进行了研究和试验 ,将葡萄糖释放———酶鉴定法作为快速检测的首选方法。在试验中发现了葡萄糖释放———酶鉴定法和硫酸根离子沉淀法检测结果之间呈线性相关并建立了线性方程 。

干扰素体外释放酶联免疫法在痰涂片和痰培养均阴性肺结核诊断中的应用

目的探讨干扰素体外释放酶联免疫法(IFN-γrelease assay,IGRA)在痰涂片和痰培养均阴性肺结核快速诊断中的应用价值。方法用γ-干扰素检测试剂盒分别检测383例肺结核病患者(包括118例痰涂片或痰培养阳性肺结核患者和265例痰涂片和痰培养均阴性的肺结核患者)、75例其他肺部疾病患者和100例健康对照者结核感染情况并与结核抗体试验(Tuberculosis antibody,TB-AB)比较检测的灵敏度和特异性。结果 TB-IGRA法检测痰涂片和痰培养均阴性及痰涂片或痰培养阳性肺结核患者的阳性检出率分别为90.2%和90.7%,差异无统计学意义(P>0.05);TB-IGRA法和TB-AB试验检测肺结核病患者的灵敏度分别为90.3%和30.0%,TB-IGRA法的灵敏度明显高于TBAB试验(P<0.01)。TB-IGRA法和TB-AB试验的特异性分别为88.0%和89.7%,2种方法特异性差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TB-IGRA法检测痰涂片和痰培养均阴性肺结核具有快速和较高的灵敏度和特异性,值得临床推广应用。

干扰素体外释放酶联免疫法在结核病诊断中的临床应用

目的探讨干扰素体外释放酶联免疫法(IFN-γrelease assay,IGRA)在结核病诊断中的应用价值。方法采用北京万泰生产的γ-干扰素检测试剂盒分别检测493例结核病患者(包括391例肺结核和102例肺外结核)、108例其他肺部疾病患者和150例健康对照者结核感染情况,并与结核抗体试验(TB-AB)、痰菌培养及痰涂片比较检测的灵敏度和特异性。结果 TB-IGRA检测结核病患者的灵敏度为90.1%(444/493),肺结核和肺外结核的阳性检出率无显著性差异(P>0.05),TB-IGRA检测结核患者阳性检出率明显高于TB-AB试验、痰培养法和痰涂片法(P<0.01)。TB-IGRA方法的特异性为87.6%,与TB-AB方法特异性无显著性差异(P>0.05)。结论 TB-IGRA检测肺内结核、肺外结核具有快速和较高的灵敏度和特异性,值得临床推广应用。

干扰素释放酶联免疫法(TB-IGRA)用于检测结核分枝杆菌的优越性

目的评价TB-IGRA与常用几种结核分枝杆菌检测方法的优越性。方法选择确诊肺内结核70例,肺外结核33例及体检正常人群30例为对照,分别采用TB-IGRA、TST(PPD)、结核抗体、痰涂片及痰菌培养等方法检测结核分枝杆菌感染,进行统计学分析评价。结果结核分枝杆菌感染者TB-IGRA检出阳性率、敏感性、Youden指数(准确性)均比常规方法高,差异有统计学意义(P<0.01);正常对照组阳性检出率比常规方法低,差异亦有统计学意义(P<0.05)。表明TB-IGRA假阳性出现少,准确性高,且对肺内、肺外结核的检测同样准确有效。结论 TB-IGRA检测肺内、肺外结核病简便、快速、敏感、准确有效,值得临床推广应用。

4种因素对NK细胞杀伤活性的影响

为了探讨效应细胞与靶细胞的比例(效靶比)、孵育时间、显色时间以及小牛血清浓度对NK细胞杀伤活性的影响,采用乳酸脱氢酶释放法来测定不同因素对NK细胞杀伤活性的影响,结果表明,最佳效靶比和孵育时间分别为50∶1和2 h。在最优效靶比及孵育时间的基础上,显色0.5 h,小牛血清浓度为50 mL/L时NK细胞活性最高,证明4种因素对NK细胞杀伤活性均有不同程序的影响。