酶重量法-液相色谱法测定食品中总膳食纤维

本研究利用酶重量法-液相色谱法,测定含水溶性膳食纤维食品的总膳食纤维含量。采用酶重量法测定试样中不溶性膳食纤维(Insoluble Dietary Fiber,IDF)和高分子质量可溶性膳食纤维(Soluble Dietary Fiber,SDF)的含量,采用液相色谱法测定试样的低分子质量抗性麦芽糊精(Resistant Malto Dextrin,RMD)含量。液相色谱法的方法检出限为0.142%,定量限为0.474%,线性方程为y=1.207x+0.030,相关系数R^(2)为0.999,加标回收率为96.6%~99.7%,相对标准偏差(Relative Standard Deviation,RSD)为1.53%~1.69%(次数n=6)。精密度试验以酶重量法-液相色谱法测试样品6份,平均含量为65.78%,RSD为0.52%。实验结果表明,该方法灵敏度、准确率高,适用于添加抗性淀粉、含低分子质量的抗性糊精等水溶性膳食纤维的食品中总膳食纤维的测定。

5,5′-二硫硝基苯甲酸柱前衍生高效液相色谱法测定酶促反应液中的L-半胱氨酸

以5,5′ 二硫硝基苯甲酸(DTNB)为柱前衍生试剂对酶促反应液进行衍生化,用C18色谱柱在室温下采用二元梯度洗脱,于330nm波长下检测,同时以2 巯基乙醇和二硫苏糖醇(DTT)为对照,对L 半胱氨酸的分离峰进行确认,并对酶促反应液中的L 半胱氨酸进行分离测定。L 半胱氨酸浓度为5～950μmol/L时,其浓度与峰面积呈显著的线性关系。高、中、低浓度水平的L 半胱氨酸加标回收率为99 7%～100 5%,相对标准偏差小于1 3%,检测限为0 8μmol/L。方法简便、快速、可靠。用于样品分析,结果令人满意。

高效液相色谱法测定化妆品中3种α-羟基酸及其酯

建立了高效液相色谱法(HPLC)同时测定化妆品中葡糖酸、葡糖酸内酯和乳糖酸的含量,并结合高效液相色谱-串联质谱联用法(HPLC-MS/MS)对结果进行确证。样品经水超声提取,并在氢氧化钠的作用下将葡糖酸、葡糖酸内酯、乳糖酸转化为葡糖酸盐和乳糖酸盐,采用高效液相色谱法,以0.04 mol/L的磷酸氢二铵水溶液和乙腈为流动相进行洗脱,Comixsil HCS(4.6 mm×150 mm,3μm)色谱柱分离,二极管阵列检测器(214 nm)检测,外标法定量。采用高效液相色谱-串联质谱联用法,以0.1%甲酸水溶液和含0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,Waters T3-C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱分离,电喷雾电离,负离子多反应监测模式定性。结果显示,葡糖酸与乳糖酸在相应线性范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999。葡糖酸与葡糖酸内酯的方法检出限为100μg/g,乳糖酸的方法检出限为500μg/g。3种化合物4种基质样品加标平均回收率为90.8%~110.1%,相对标准偏差为0.3%~4.4%。该方法操作简便、准确度好、灵敏度高,适用于化妆品中葡糖酸、葡糖酸内酯和乳糖酸的测定。

高效液相色谱法测定一锅法制备的1-甲基-3,4,5-三硝基吡唑及其3种中间产物的含量

通过优化柱温、流动相、流量等色谱条件,采用高效液相色谱法测定一锅法制备的1-甲基-3,4,5-三硝基吡唑(MTNP)及中间产物1-甲基-4-硝基吡唑(4-MNP)、1-甲基-4,5-二硝基吡唑(4,5-MDNP)、1-甲基-3,5-二硝基吡唑(3,5-MDNP)的含量。反应液经乙腈稀释后,添加适量内标2-硝基甲苯,采用优化的色谱条件测定。以AT.C18色谱柱为固定相,在柱温30℃,流动相体积比45∶55的乙腈和0.1%(体积分数)乙酸溶液的混合溶液,流量1.0 mL·min^(−1)下等度洗脱分离4种目标物,在检测波长265 nm下采用内标法进行定量。结果显示:4种目标物的分离度大于2.5,其质量浓度分别在10.00~250.00 mg·L^(−1)(MTNP和4-MNP)和10.00~350.00 mg·L^(−1)(4,5-MDNP和3,5-MDNP)内和峰面积比值呈线性关系,检出限(3S/N)为0.40~0.80 mg·L^(−1),加标回收率为97.3%~105%,测定值的相对标准偏差(n=6)小于1.0%。

柱切换-高效液相色谱法与均相酶免法检测艾司西酞普兰血药浓度的比较研究

目的:比较柱切换-HPLC和均相酶免法快速测定艾司西酞普兰血药浓度结果的准确性。方法:建立柱切换HPLC法和均相酶免法测定艾司西酞普兰的血药浓度的方法,并对两种方法进行方法学验证。收集本院住院患者60例病例,两种方法同时监测同一批患者的艾司西酞普兰血药浓度。结果:柱切换-高效液相色谱法与均相酶免法进行线性回归,回归方程为:y=0.9219x+0.0501(n=60,r=0.8999)。两种方法比较的结果进行T检验,同一患者测定结果无显著性差异(p>0.05)。结论:柱切换HPLC和均相酶免法均可测定艾司西酞普兰血药浓度,但是均相酶免法测定复杂,成本高,柱切换HPLC法具有灵敏度高、简单、方便、且显著降低检测成本等优点,可适用于医院检验科和临床药学的应用。

制备液相色谱法在辅酶Q10分离纯化中的应用研究

目的 :旨在探究制备液相色谱法在辅酶Q10(Coenzyme Q10,简称CoQ10)的分离纯化过程中的应用,以提高其纯度和产率,为辅酶Q10的工业化生产提供新的思路和技术支持。方法 :我们采用了一种新颖的技术方法,旨在除去5-脱甲氧基辅酶Q10杂质,从而改善CoQ10的质量。首先,我们准备了辅酶Q10的混合样品,包括目标产物和杂质。接下来,我们运用液相色谱法,利用某特定参数,如流速、柱温和检测波长,以分离目标产物和杂质。该方法的关键在于对色谱条件的优化,以确保高效、精确地分离出CoQ10。结果 :实验结果表明,采用液相色谱法成功实现了对辅酶Q10的分离纯化。通过优化色谱条件,我们有效地去除了5-脱甲氧基辅酶Q10杂质,提高了CoQ10的纯度。同时,该方法也显著提高了CoQ10的产率,使其更具商业化价值。结论 :本研究验证了制备液相色谱法在辅酶Q10生产中的可行性和效果。该方法为提高CoQ10的质量和产量提供了可行途径,并为其工业化生产提供了新的思路。因此,液相色谱法可成为辅酶Q10分离纯化过程中的有力工具,有望推动辅酶Q10的广泛应用和市场推广。

2,4-二硝基苯肼柱前衍生高效液相色谱法测定1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数

利用含羰基化合物与2,4-二硝基苯肼在酸性条件下反应得到的产物腙对紫外-可见光有吸收的特性,采用柱前衍生高效液相色谱法测定了1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数。酶反应产物1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸在碱性磷酸酶的作用下生成去磷酸化产物1-脱氧-D-木酮糖,然后与2,4-二硝基苯肼衍生成腙。衍生化反应的适宜条件为:HClO4浓度为1.5%,反应温度37℃,反应时间60 min,2,4-二硝基苯肼与1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的摩尔比为6∶1。色谱条件:0～17 min,40%～80%甲醇;18～20 min,40%甲醇。结果表明,本方法具有较高的灵敏度和良好的线性关系,1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的检出限为1.0 mg/L,在0.005～1.0 g/L范围内线性相关系数为0.999,相对标准偏差小于5.0%(n=3),标准回收率为102.22%。用本方法测得的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数Km、Vmax和Kcat与文献报道一致。

高效液相色谱法测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶的抑制作用

目的对高效液相色谱法(HPLC)测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶(TACE)的抑制作用进行方法改进,以提高其准确度和普及性,并用于测定抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的抑制作用。方法TACE与多肽底物经37℃孵育15 min后,加入Ala-Dpa作为内标物,用高效液相色谱法进行分析。以55%甲醇水溶液为流动相,检测波长353 nm。根据剩余底物与内标物的色谱峰面积比,从校准曲线中得出底物的转化量,据此计算TACE的酶活性。结果底物与内标物的色谱峰面积比与底物浓度呈良好线性关系,相关系数为0.996 8,线性范围10μmol/L至400μmol/L。精密度试验表明,采用内标法定量,精密度得到显著改善。经测定,抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的半数抑制浓度IC50分别为317.5 nmol/L和175.8 nmol/L。结论以Ala-Dpa作内标物,HPLC测定TACE酶活性,为TACE抑制剂的筛选提供了一种更准确、更实用的方法。

酶联免疫吸附结合免疫亲和柱-高效液相色谱法检测大米中黄曲霉毒素B_1的研究

对大米中两种检测黄曲霉毒素B1方法的结合使用进行了研究,即采用酶联免疫吸附法对大米中黄曲霉毒素B1进行初筛,对可疑样品采用免疫亲和柱-高效液相色谱法进行验证。样品经甲醇水提取、免疫亲和柱净化、高效液相色谱分离、碘柱后衍生、荧光检测器测定。结果表明,黄曲霉毒素B1线性关系良好,相关系数为0.9999,检出限为0.50μg/kg,回收率为89.4%~95.2%,RSD值为1.88%~3.05%。两种方法的结合应用,适用于较大批量样品的检测。

酶联免疫吸附法和免疫亲和柱-高效液相色谱法在检测饲料中黄曲霉毒素B_(1)含量中的比对研究

为了探讨酶联免疫吸附法检测饲料中黄曲霉毒素B_(1)含量的可行性,试验采用酶联免疫吸附法(ELISA法)比对免疫亲和柱-高效液相色谱法(IAC-HPLC法),对饲料中黄曲霉毒素B_(1)含量进行了检测,对检测结果的准确度、精密度和样品加标回收率进行了分析。ELISA法线性方程相关系数为0.9952,相对标准偏差(RSD)为1.6%~8.1%,平均加标回收率为105.6%~111.8%。结果表明,ELISA法的准确性、重现性、稳定性好;且ELISA法检测结果与IAC-HPLC法检测结果的相对标准偏差(RSD)为5.4%~19.2%,两种方法的检测结果的偏差可以接受,表明ELISA法能满足检测需求。

食品中总的、不溶性及可溶性膳食纤维的酶-重量测定法

为了分析测定膳食纤维的不同组分 ,参照AOAC推荐的酶 重量法建立了分别测定总的、不溶及可溶性膳食纤维含量的方法。结果表明本方法可以分析不同种类的食物样品 ,批间和批内RSD分别为 2 0 4%～ 7 85 %和 3 42 %～ 5 2 3%。提示该方法的重复性较好 ,适用范围广。

雨生红球藻中虾青素的C_(30)-反相高效液相色谱法测定

建立了雨生红球藻中虾青素的C扩反相高效液相色谱测定方法。雨生红球藻经二氯甲烷一甲醇（体积比25：75）研磨和超声提取后，在0．5mL0．1mol／LNaOH甲醇溶液中于5℃避光皂化12h，在YMc—Ca—rotenoidc，。色谱柱（250mm×4．6mm×5μm）上以甲醇（A）、叔丁基甲基醚（B）、1％磷酸溶液（C）为流动相梯度洗脱，采用紫外检测器在474nm测定。在优化实验条件下，雨生红球藻中的虾青素酯可以很好地转化为游离虾青素。实验以虾青素酯和虾青素在C30色谱柱上不同的出峰时间作为判断是否皂化完全的依据。在0．1～5mg·L。时峰强度与虾青素质量浓度呈良好线性（r=0．9997），方法的定量下限为2mg／kg，平均回收率为95％～108％，相对标准偏差为3．5％～14．7％。方法准确可靠，适用于雨生红球藻中虾青素含量的测定。

四-(对甲基苯基)-卟啉柱前衍生,高效液相色谱法测定食品中痕量铅、镉、汞

研究了用四-(对甲基苯基)-卟啉柱前衍生,高效液相色谱法测定食品中痕量铅、镉、汞的方法。食品样品用湿法消化后,消化液中的铅、镉、汞用四-(对甲基苯基)-卟啉(T4MPP)柱前衍生,然后用甲醇(内含0.01mol/L四氢吡咯-醋酸缓冲盐)和四氢呋喃(内含0.01mol/L四氢吡咯-醋酸缓冲盐)为流动相梯度洗脱,WatersXterraTMRP18(3.9150mm,5μm)色谱柱为固定相分离铅、镉、汞的T4MPP络合物,用二极管矩阵检测器检测,铅、镉、汞含量在0.01～3mg/L范围内与峰面积成线性关系,根据信噪比(S/N=3),方法检测限为:铅2.3μg/L、镉1.8μg/L和汞2.5μg/L,方法相对标准偏差为2.1%～3.5%,标准回收率为93%～106%,该方法用于测定食品中的铅、镉、汞,结果令人满意。

高效液相色谱法与快速酶免疫法检测食品中黄曲霉毒素的比较

对黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2含量的2种检测方法进行了比较，结果表明，快速酶免疫法灵敏度高，特异性强，操作方便，适合初筛。IAC-HPLC法准确，回收率平均值在93％～97％之间，适合确证、定量。

高效液相色谱法和化学发光酶免疫法测定万古霉素的血药浓度

目的采用高效液相色谱法和化学发光酶免疫法测定万古霉素血药浓度,比较两种方法测定万古霉素血药浓度的差异。方法取30例静脉滴注万古霉素的患者用药前后的血清样本,应用高效液相色谱法和化学发光酶免疫法测定血药浓度,并分析两种方法测定值的相关性。结果高效液相色谱法在5.0～80.0μg/mL质量浓度内线性关系良好,回收率为97.70%～103.00%,日内、日间RSD分别为4.94%～5.83%和4.53%～5.75%;化学发光酶免疫法的线性范围在5.0～100.0μg/mL,回收率为98.72%～102.70%,日内、日间RSD分别为4.48%～5.62%和6.48%～7.96%。两法测定值相关性良好,r=0.987 1。结论两法测定结果并不需要相互校正,临床治疗药物监测工作中可以根据监测要求和监测目的灵活运用。

均相酶扩大免疫分析法与高效液相色谱法测定癫痫患儿丙戊酸钠血药浓度比较研究

目的考察均相酶扩大免疫分析法(enzyme-multiplied immunoassay test,EMIT)和高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分别测定癫痫患儿丙戊酸钠血药浓度的相关性,为临床测定丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)血药浓度方法学选择提供依据。方法收集服用丙戊酸钠的癫痫患儿血样200例,分别用均相酶扩大免疫分析法和高效液相色谱法进行测定,对结果的相关性进行分析。结果以HPLC法测定结果(X)与EMIT法测定结果(Y)作回归方程如下:Y=1063.517X-331.351(r=0.933),此2种测定方法具有显著相关性(P<0.05﹚,EMIT法测定血浆VPA浓度较HPLC法偏高。结论均相酶扩大免疫分析法和高效液相色谱法测定癫痫患儿丙戊酸钠血药浓度结果具有显著相关性,临床在进行丙戊酸钠血药浓度测定中应根据实际情况选择方法。

反相高效液相色谱法对不同来源西红花药材中西红花苷-1、苷-2的定量分析

目的 :测定西红花药材中西红花苷 1、苷 2的含量。方法 :采用反相高效液相色谱 ,以Nova PakC18( 4 μm ,150mm×3 .9mm)柱为色谱柱 ,甲醇 水 ( 55∶45)为流动相 ,测定波长为 ( 4 4 0± 1)nm。结果 :西红花苷 1的平均回收率为 99.53 % ,日内、日间RSD分别为 1.0 % ,1.6 % ;西红花苷 2的平均回收率为 99.43 % ,日内、日间RSD分别为 1.3 % ,1.8%。进口西红花商品药材中有 2种未测出或只有痕量 ,3种含量较低 (西红花苷 1为 80 .9～ 10 2 .0mg·g- 1生药 ,西红花苷 2为 44.5～ 62 .3mg·g- 1生药 ) ,而国产西红花商品药材中含量最高 (西红花苷 1为 176 .2mg·g- 1生药 ,西红花苷 2为 10 8.5mg·g- 1生药 )。结论 :建立的RP HPLC法测定不同来源西红花药材中西红花苷 1、苷 -2的含量 ,操作简便 ,结果准确。

超高效液相色谱-质谱联用法及高效液相色谱法在人工虫草菌丝体中虫草素筛查及含量测定中的应用

目的建立超高效液相色谱-质谱联用法(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)及高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)对人工虫草菌丝体中虫草素进行快速筛查及定量测定分析方法。方法样品经水-甲醇(85:15,V:V)提取;超高效液相色谱-质谱联用法进行定性筛查,0.3%甲酸水溶液-甲醇梯度洗脱,正离子多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式扫描;高效液相色谱法进行定量测定,水-甲醇(85:15,V:V)等度洗脱后利用紫外检测器检测。结果确定252.0/136.0及252.0/69.0 2对离子对用于MRM定性分析,定性准确性高;定量测定方法中,虫草素在167~1337μg/mL浓度范围内线性关系良好(r^2=0.9997);最低定量限为2.64μg/g;3个不同浓度加标回收率为98.1%~101.0%,相对标准偏差为0.06%~1.24%;精密度、重复性良好。结论该研究结合了UPLC-MS和HPLC各自的分析优势,快速、高效、准确地对人工虫草菌丝体中虫草素进行定性和定量分析,提高了工作效率,大大缩短了分析时间,在样品量较大及探究人工菌丝体培育条件方面具有优势。

酶放大免疫分析法与二维高效液相色谱法监测万古霉素血药浓度的比较

万古霉素血药浓度个体差异较大,故临床需监测其血药浓度。本文分别建立酶放大免疫分析法(EMIT)、二维高效液相色谱法(2D-HPLC-UV)测定万古霉素血药浓度,2种方法的线性、准确度和精密度均符合生物样品检定要求。60份静脉滴注万古霉素患者的血浆样品测定结果显示,两种方法无统计学差异,且相关性好,回归方程为Y2D-HPLC-UV=0.9670×XEMIT-0.7029,Bland-Altman分析显示两种方法一致性良好。两种方法均可有效且可靠地监测万古霉素血药浓度,临床上应综合考虑监测目的、实验室条件和人员配置等,选择合适的测定方法。