应用酶链免疫吸附法检测麻疹IgG、IgM抗体的实验报告

麻疹免疫检测常规使用的血凝抑制法,虽然简便快速,但由于猴血球来源困难,保存期短,使许多基层单位难于开展这项工作。我们应用酶链免疫吸附测定(ELISA)法检测血清标本中的麻疹IgG抗体,并应用ACELISA-IgM法检测疑拟病人血清麻疹IgM抗体,现报告如下。1 材料与方法 试验所用的麻疹病毒抗原、细胞对照抗原、HRP(辣根过氧化物酶)-马抗人IgG、羊抗人IgMu链抗体、麻疹单克隆抗体、HRP-羊抗鼠IgG,均由中国预防医学科学院病毒研究所供给。

实时荧光定量聚合酶链反应与酶链免疫法检测儿童疱疹病毒感染的临床评价

目的：比较实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）与酶链免疫法（ELISA）两种不同方法检测传染性单核细胞增多症儿童及正常儿童疱疹病毒（EBV）感染与临床符合情况。方法：应用实时荧光定量PCR与ELISA法同步平行检测我院2006年1月至6月期间125例被临床诊断为传染性单核细胞增多症的儿童发烧第7天及50例门诊体检健康的儿童血标本中EBV的检出率。结果：125名传染性单核细胞增多症儿童中，其中l周岁以下20名，4周岁～10周岁105名，PCR法检出124例，阳性符合率99．2％。ELISA法检出107例阳性符合率85．6％，但1周岁以下的20名儿童，PCR法检出19例，阳性符合率95％，而ELISA法检出10例，阳性符合率仅为50％；50例健康儿童。PCR法检出49例，阴性符合率98％，ELISA法检出42例，阴性符合率84％。结论：PCR法与ELISA法比较，前者的阳性及阴性检出率均明显优于后者，特别是对于1周岁以下的儿童。与ELISA法相比PCR法是一个快速、敏感、特异的检测方法，可帮助临床明确诊断及早治疗。

质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测沙眼衣原体

目的:建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)检测沙眼衣原体(Chlamy-diatrachomatisCT)。方法:根据CT共有隐蔽性质粒设计并标记4条寡核苷酸探针,对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病原菌行Gap-LCR-ELISA。结果:质粒Gap-LCR-ELISA可检测出6型CT,并与其他病原体无交叉反应,其最低检测限为2.5个原体(elementarybodiesEB)比PCR敏感10倍。结论:质粒Gap-LCR-ELISA对检测CT感染具有极高的灵敏度和特异度,适宜于我国进行大规模CT流行病学调查。

预制备抗体-DNA偶联物的免疫聚合酶链反应检测HBsAg

目的 探讨一种实用敏感的乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)检测方法。 方法 利用亲和素作为桥梁连接生物素化DNA和抗体 ,形成抗体 亲和素 DNA偶联物。在抗原抗体特异性反应的基础上 ,聚合酶链反应 (PCR)扩增抗体所连的DNA片段 ,通过检测DNA来判断相应抗原存在与否。结果 免疫PCR检测敏感度为常规酶联免疫试剂盒的 30 0倍。结论 预制备抗体

缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测孕妇沙眼衣原体感染

目的:用缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附(Gap-LCR-ELISA)法检测重庆地区孕妇沙眼衣原体感染,以了解围生期沙眼衣原体(CT)的感染现状。方法:以512名孕妇首段尿(FVU)及配对宫颈刮片为研究对象,按照扩大金标准,采用质粒探针和外膜蛋白探针Gap-LCR-ELISA法用于不同类型临床标本检测CT感染。结果:①孕妇的CT感染呈很强的隐匿性,由扩大金标准所确证的CT真阳性共42例,所检重庆地区孕妇的CT感染率为8.2%(42/512),其中88.1%(37/42)可同时从尿道和生殖道检出CT,而另9.5%(4/42)和2.4%(1/42)仅能单独分别从生殖道或尿道检出。②Gap-LCR-ELISA用质粒与外膜蛋白作为探针检测FVU中CT的敏感性分别为90.48%和71.43%(P<0.05),质粒Gap-LCR-ELISA用于宫颈刮片和FVU两种标本的敏感性分别为97.62%和90.48%(P>0.05),特异性均为100%。结论:质粒Gap-LCR-ELISA法用于孕妇FVU以检测围生期无症状CT感染患者,是一种非侵袭性的、高度敏感特异的、适合于发展中国家和地区进行大规模流行病学调查的方法。

聚合酶链反应-酶联免疫法筛选孢子丝菌特异性探针

目的筛选出对孢子丝菌结合效率相对较高的探针。方法以50株纯培养的孢子丝菌及标准株为样本,以毛霉、烟曲霉、念珠菌各1株为阴性对照,用聚合酶链反应-酶联免疫法(PCR-ELISA)对已报道的5个孢子丝菌特异性探针(U26852、U26866、U26866'、M85053及AF117945)进行筛选。记录各探针与合成DNA片段杂交底物显色与否及酶免疫测定指数(EI)值。结果 PCR产物测序证实5个探针均位于产物序列上;在相同的ELISA条件下,探针U26852显色最强,EI值最高。结论针对28Sr RNA的探针U26852是目前与孢子丝菌结合效率相对较高的探针。

聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸

目的 :评价聚合酶链反应 -酶联免疫吸附试验 (PCR- EL ISA)测定乙型肝炎病毒 DNA(HBV DNA)的临床应用价值。方法 :采用定量 PCR- EL ISA法和 EL ISA法分别检测 2 0 8例乙型肝炎患者血清的 HBV DNA和 HBV血清标志物(HBVm ) ,3 4份健康体检者作为阴性对照。结果 :血清 HBV DNA含量 >4× 10 6 拷贝 /ml分别是抗 HBc Ig M组、HBe Ag组、抗 HBc组、抗 HBe组和三抗体组 (抗 HBs、抗 HBBe、抗 HBc) ,其 HBV DNA阳性率分别为 10 0 % ,97.75 % ,62 .3 0 % ,41.67% ,16.0 0 %。结论 :PCR- EL ISA法定量检测 HBV DNA具有较强的特异性和灵敏度 ,为临床早期诊断 ,了解乙型肝炎病毒复制情况 。

生物素-链霉亲和素酶免疫法PSA测定的评价

目的评价生物素-链霉亲和素酶免疫分析法(BSA-ELISA)测定前列腺特异性抗原(PSA)并与化学发光法(CLIA)进行比较。方法根据EP9-A文件要求采集数据,并以相应软件分析这两种方法的相关性;同时对BSA-ELISA的测定范围,变异系数(CV),最小检测限进行测定。结果两种方法测定的结果具有较好的相关性,回归方程У=0.985Х-0.131,相关系数(r)=0.997。PSA的批内平均CV为2.21%,批间平均CV为3.08%。测定范围为1.50～85.00μg/L。最小检测限为0.30μg/L。结论采用全自动酶免疫分析仪的BSA-ELISA与CLIA自动分析仪测定PSA的相关性好,结果稳定,偏差小,可以在临床上常规应用。

质粒缺口-连接酶链反应-ELISA法检测重庆地区围生期孕妇沙眼衣原体感染及基因分型

目的:用质粒缺口-连接酶链反应(Gap-LCR)-ELISA法研究重庆地区围生期孕妇沙眼衣原体(CT)感染的现状及流行的主要基因型别,为其疫苗的研制提供分子流行病学依据。方法:以512例孕妇的首段尿(FVU)及其配对新生儿的鼻咽拭子为标本,用质粒Gap-LCR-ELISA法检测CT感染者,对阳性母、婴配对标本DNA行omp1-VS4-PCR扩增,产物行双链DNA直接测序并作基因分型。结果:所检重庆地区孕妇CT感染率为7.42%,母婴垂直传播率为15.79%,以阴道分娩为主要传播途径。6对阳性母婴配对标本的CT基因序列一致,其中5对为E型,1对为H型,再次证实了CT的垂直传播途径。结论:质粒Gap-LCR-ELISA法可用于围生期无症状CT感染孕妇的大规模流行病学调查。重庆地区围生期CT流行型别仍以E型为主。

应用连接酶链反应检测沙眼衣原体DNA

目的 建立检测沙眼衣原体感染的具有高度敏感性和特异性的缺口 连接酶链反应 酶联免疫吸附测定法。方法 根据CT主要外膜蛋白稳定区设计 2对互补探针并分别对其两端标记生物素和地高辛 ,对 6种CT标准株、鹦鹉热衣原体标准株和其他细菌进行Gap LCR反应并以ELISA和EB染色电泳检测扩增产物以比较两者的检测限度。 结果 Gap LCR可检出 6种CT标准株并不与其他细菌发生交叉反应 ,ELISA可检出 1 0fgDNA模板的扩增产物 ,较EB电泳法敏感 1 0倍。结论 Gap LCR ELISA是一高度敏感特异的检测CT感染的核酸扩增技术 。

胆结石患者胆汁幽门螺杆菌免疫印迹检测分析

目的 研究幽门螺杆菌感染与胆石形成的关系。方法 采用酶链免疫法 (ELASA)对胆结石患者血清及胆汁免疫球蛋白IgG、IgA、IgM标本进行检测 ,对血清学及胆汁IgG均阳性患者的胆汁 ,采用免疫印迹法 (WesternBlot)进行幽门螺杆菌感染相关蛋白检测。结果 50例患者血清学阳性 35例 (70 .0 % ) ,胆汁阳性 2 9例 (58.0 % )。血清学及胆汁均阳性 2 4例 (48.0 % )。血清学及胆汁均阳性2 4例中 ,CagA检出 1 7例 (70 .8% ) ,VacA检出 1 1例 (45 .8% )。UreB及UreA分别为 1 8例 (75 .0 % )和 1 6例 (66 .7% )。同时检出幽门螺杆菌细胞空泡毒素 (VacA)相关亚单位 37kD、35kD糖蛋白。结论 胆汁中存在多种幽门螺杆菌感染相关蛋白 ,并可能参与胆结石的形成。

肝癌患者外周血单个核细胞端粒酶活性表达与临床相关性研究

目的探讨原发性肝癌(HCC)病人外周血单个核细胞(PBMCs)端粒酶活性与临床的相关性。方法采用聚合酶链式反应-酶联免疫吸附测定(PCR-ELISA)检测肝癌、肝硬化、慢性肝炎病人及健康体检者PBMCs端粒酶活性。结果52例肝癌病人中44例端粒酶活性明显增高,阳性率为84.62%,端粒酶活性为(0.82±0.69)。端粒酶活性在肝硬化组为(0.19±0.12),肝炎组为(0.17±0.09),健康体检组为(0.12±0.06),均显著低于HCC组(P<0.01)。外周血单个核细胞端粒酶活性的阳性率显著高于血清AFP(34/52,65.38%,P<0.01)。结论端粒酶表达在HCC的发病机制中可能起着重要作用,HCC病人外周血单个核细胞端粒酶活性的测定,是一种灵敏、微创的早期诊断肝癌方法。

两种免疫学方法检测弓形虫感染的比较研究

目的研究聚合酶链-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)法检测弓形虫(TOX)感染的临床应用可行性。方法PCR-ELISA法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法同时对已确诊的TOX感染阳性、阴性孕妇进行TOX检测,比较两种方法的阳性检出率和阴性检出率。结果PCR-ELISA法和ELISA法的阳性检出率分别为84.21%和89.47%,差异无统计学意义(P>0.05);阴性检出率分别为92.00%和76.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PCR-ELISA法检测TOX感染假阳性率较高,尚不推荐应用于临床。

PCR-ELISA定量检测as-hTERT对HepG2.2.15细胞端粒酶活性的抑制作用

目的 :采用PCR ELISA方法探讨人类端粒酶催化亚单位 (hTERT)基因关键区段的反义寡核苷酸 (as hTERT)对HepG2 .2 .1 5细胞端粒酶活性的抑制作用。方法 :通过PCR合成as hTERT及无关对照序列 ,体外作用于HBVDNA转染的HepG2 .2 .1 5细胞 ,用PCR ELISA定量检测反义核酸作用后的端粒酶活性 ,MTT法观察as hTERT对细胞生长的抑制作用 ,ELISA法检测as hTERT对HBsAg和HBeAg表达的影响。结果 :as hTERT作用浓度为 1 0 μmol/L时 ,定量检测端粒酶活性 ,A450 nm值为 0 .42 ,低于无关序列与生理盐水对照的A450 nm值 (分别为 1 .46、1 .49) ,as hTERT可抑制细胞生长 ,对HBsAg和HBeAg的最佳抑制率分别为 76%和5 6%。结论 :as hTERT在体外可明显降低HepG2 .2 .1 5细胞的端粒酶活性 ,抑制细胞的生长 ,并可影响HBV抗原表达。

胸腔积液端粒酶活性检测及其临床意义

目的 :探讨端粒酶活性测定对恶性与良性胸腔积液的诊断与鉴别诊断价值。方法 :采用聚合酶链反应 -酶联免疫吸附分析法 (PCR ELISA)检测 4 3例恶性胸腔积液和 2 4例良性胸腔积液的端粒酶活性 ,并与胸腔积液细胞学及癌胚抗原 (CEA)测定结果进行比较。结果 :恶性胸腔积液组端粒酶阳性率为 74 .4 2 % ,良性胸腔积液组阳性率为 1 2 .5 0 % ,差异有显著性 (P <0 .0 0 5 ) ;端粒酶活性检测对恶性胸腔积液诊断敏感性为 74 .4 2 % ,特异性为 87.5 %。恶性胸腔积液组胸腔积液细胞学检查与CEA测定阳性率分别为 5 1 .1 6 %和 4 6 .5 1 % ,均低于端粒酶活性检测 (P <0 .0 1 )。结论 :胸腔积液端粒酶活性检测对恶性胸腔积液诊断有重要价值 ,与细胞学检查。

端粒酶和CYFRA 21-1测定对良恶性胸腔积液的诊断价值

目的研究胸腔积液端粒酶活性及CYFRA21-1在良、恶性胸腔积液中的诊断价值。方法用聚合酶链反应—酶联免疫吸附分析法(PCR-ELISA)检测胸腔积液端粒酶活性,用免疫放射分析法(IRA)测定胸液CYFRA21-1水平,并与细胞学诊断结果进行比较,根据最终的诊断结果,67例患者分成2组:(1)非恶性胸腔积液35例;(2)恶性胸腔积液32例。结果非恶性胸腔积液中端粒酶阳性2例(5.7%),恶性胸腔积液阳性26例(81.3%),端粒酶活性测定诊断恶性胸腔积液的灵敏度为81.3%,特异度94%,正确率93%。CYFRA21-1诊断灵敏度68.8%,特异度87%,正确率73%。端粒酶和CYFRA21-1均阳性者与细胞学诊断符合率57.0%。结论胸腔积液端粒酶活性和CYFRA21-1对鉴别良恶性胸腔积液均有一定的价值,联合检测能提高诊断的准确率。

免疫套式PCR鉴定HBV标志物阴性肝炎中的乙型肝炎病毒感染

采用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测血清HBV DNA,一般都用常规法,即血清标本不经任何处理,就直接加裂解液裂解,扩增时也只用一对引物。该法虽然比分子杂交法敏感,但我们在日常工作中也常发现。

不同病期慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞端粒酶活性的变化

为探讨慢性粒细胞白血病临床分期与端粒酶活性的关系,采用聚合酶键反应-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)测定骨髓细胞端粒酶活性。结果发现,正常骨髓细胞端粒酶活性低,慢性粒细胞白血病各期端粒酶活性均高于正常骨髓组(P<0.05),加速期和急变期高于慢性期(P<0.05),但加速期和急变期两组无差别。结论提示,端粒酶活性可做为慢性粒细胞白血病分期和判断预后的有用指标。