非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测方法的建立

为建立一种非洲猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测方法,以原核表达ASFV p72重组蛋白作为包被抗原,HRP标记的p72特异性单克隆抗体作为酶标抗体,建立了非洲猪瘟病毒抗体阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。结果显示,该方法中血清以1∶10稀释,酶标单抗以1∶6000稀释,临界值为50.12%。该方法特异性强,与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清无交叉反应。对强阳性血清的最低稀释度为1∶640,弱阳性血清的最低稀释度为1∶10,具有较高的敏感性;重复性好,批内和批间变异系数均小于5%。应用所建立的方法与商品化同类检测试剂盒对174份血清进行检测,ASFV抗体阳性符合率为100%,阴性符合率为96.75%,总符合率为97.28%。建立的阻断ELISA方法可用于非洲猪瘟病毒抗体检测。

液相阻断酶联免疫和正向间接血凝试验检测猪口蹄疫抗体

为分析猪口蹄疫免疫失败原因，建立合理的免疫程序，以广西壮族自治区昭平县莲昌生猪养殖场36头仔猪为试验材料，应用ELISA和IHA检测不同日龄猪口蹄疫抗体水平。结果表明：首免前母源抗体对抗体水平影响很大，由抗体水平低的经产母猪喂养的仔猪，其抗体水平较低；断奶后母源抗体影响逐渐被疫苗免疫取代，而对不同疫苗免疫10-70日龄仔猪的抗体变化观察中，2种疫苗的抗体水平都处在稳定的状态，无较大差别。

血管紧张素转换酶抑制剂和β受体阻断剂联合应用治疗高血压的协同作用

高血压是严重影响人民健康和生活质量的常见病、多发病,是引起脑梗死、冠心病、肾衰竭的重要危险因素。探讨药物的合理使用、有效控制血压依然是一个极其重要的问题。近年关于高血压药物治疗的新观念要点之一是主张联合用药,初始就加入新的药物,而告别传统的只用一种药物的治疗法。联合用药的观点已被明确写入多个高血压治疗的最新指南〔1〕。随着新的β受体阻断剂（βB）的问世以及研究工作的不断进展,

阻断酶联免疫吸附试验检测赤羽病

赤羽病(Akabane disease)又称阿卡斑病,是牛、羊的一种以流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊、新生胎儿发生关节弯曲积水性无脑综合症为特征的病毒性传染病.本病的病原赤羽病病毒是布尼安病毒科(Bunyaviridae)、辛波(Simbu)病毒群的成员之一.最早在澳大利亚暴发,后在日本、美国、韩国等国也分离到该病毒.本病的流行对养牛、养羊业的发展构成巨大的威胁,因此该病是我国从澳大利亚进口奶牛必须检测的七种疫病之一.

联合固氮酶活性测定中酶促反应时间的控制方法研究

乙炔还原法是国际上普遍公认的测定生物固氮活性的方法,该法具有简便、快速、灵敏度高等优点.乙炔还原反应的温育时间不同,直接影响乙炔还原法测定固氮酶活性结果的可比性.为确保大批量的联合固氮酶活性测定条件的一致性,有必要选择一种固氮酶活性阻断剂,使联合固氮体系中的乙炔还原反应维持在特定时间后予以阻断.本文比较了3种灭菌剂对2株联合固氮菌的抑菌效果及其对水稻根际联合固氮酶活性阻断效果,结果表明,3.5%甲醛水溶液是一种理想的联合固氮酶活性阻断剂.

禽流感病毒NS1抗体间接阻断ELISA检测方法的建立

以禽流感病毒(AIV)重组NS1蛋白作为检测抗原,兔抗NS1血清为阻断抗体,建立了检测AIVNS1抗体的间接阻断ELISA方法。经筛选确定,抗原的最佳包被浓度为0.6μg/mL,阻断抗体的最佳稀释度为1∶10000,待检血清最佳稀释度为1∶10。用该方法对42份AIV感染禽类血清样本和50份用AIV灭活疫苗免疫的禽类血清样本进行检测,结果显示,该方法的敏感性为95.2%,特异性为90.0%。交叉反应试验证明,该方法与新城疫等8种其他禽病阳性血清不发生交叉反应。临床检测结果显示,186份AIV灭活疫苗免疫禽血清样本的阴性率为89.2%,20份基因工程疫苗免疫禽血清样本的阴性率为95.0%,42份健康非免疫禽血清样本的阴性率为100%。表明,建立的间接阻断ELISA方法可用于区分AIV自然感染禽和疫苗免疫禽。

禽流感病毒M1抗体间接阻断ELISA检测方法的建立

以禽流感病毒(AIV)重组M1蛋白作为检测抗原,兔抗M1血清为阻断抗体,建立了检测AIVM1抗体的间接阻断ELISA方法。经筛选确定,抗原最佳包被浓度为0.78μg/mL,阻断抗体最佳稀释度为1∶15000,待检血清最佳稀释度为1∶10。用该ELISA方法对38份AIV阳性禽类样本和26份AIV阴性禽类样本进行检测,结果显示,该方法的敏感性为97.37%,特异性为96.15%。交叉试验证明该方法与新城疫等8种其他禽病阳性血清不发生交叉反应。用该ELISA方法对268份已知HI效价的临床样品进行检测,结果与HI的符合率达92%以上。表明,建立的间接阻断ELISA方法可用于AIV抗体的检测和禽流感的流行病学调查。

PCR阻断联合荧光探针检测HBV基因前C区G1896A突变株

目的研究和评估PCR扩增阻断联合荧光探针检测乙型肝炎病毒(HBV)基因前C区1896位点突变的新方法。方法根据HBVDNA前C区1896位点的突变设计一系列引物,引物3′末端位于1896位,并与突变模板1896位碱基互补.在引物的倒数第2及第3位碱基设计为错配碱基,以增加反应的特异性。结果以2个错配碱基的突变型引物对野生型质粒进行PCR扩增,具有显著的阻断作用,对1896位突变型质粒无阻断作用,而且对其检测的最低拷贝数可达5×103拷贝/ml。选用该引物对95例随机采集的HBV阳性标本进行HBV前C区G1896A位碱基突变的检测,8例为阳性,其突变率为8.4%。结论本法在临床标本检测中是一种有效的和简便的方法。

血管紧张素转换酶2在新型冠状病毒感染及治疗中的作用概述

血管紧张素转换酶2(ACE2)是肾素-血管紧张素系统(RAS)重要的组成部分,能够下调RAS,具有抗炎、抗纤维化等作用。同时ACE2还是新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的受体,与SARS-CoV-2感染及感染后的临床表现密切相关。血管紧张素转化酶抑制药/血管紧张素Ⅱ受体阻断药(ACEI/ARB)在SARS-CoV-2感染中的作用,目前研究尚有争议。本文对ACE2及ACEI/ARB类药物在SARS-CoV-2感染中的作用作一综述。基于目前的研究证据,建议感染前已使用ACEI/ARB类药物的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者继续用药,但目前尚不建议将ACEI/ARB类药物用于COVID-19患者的治疗。

不同品牌试剂盒检测猪口蹄疫O型、A型抗体水平对比评估

目前,商品化口蹄疫检测试剂盒众多,但质量评估方法并不完善,只是在使用时通过主观判断或者简单的数据对比来评估试剂盒的检测效果。采用细胞中和抗体和O型、A型口蹄疫液相阻断ELISA方法,对不同品牌试剂盒的符合率、敏感性和特异性进行检测,从中筛选优质试剂盒应用于临床,同时为制定相应的免疫程序提供科学依据。对6种试剂盒的敏感性符合率、特异性进行数据对比发现,试剂盒E的试剂盒符合率最高,中和抗体效果表现为E试剂盒>C试剂盒>B试剂盒>A试剂盒>F试剂盒>D试剂盒;以兰州兽医研究所研制的O、A型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒为标准,结果表现为a试剂盒>b试剂盒>d试剂盒>c试剂盒>e试剂盒,试剂盒a与兰州兽医研究所试剂盒阳性符合率一致性最高。

口蹄疫LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度符合性研究

血清中和抗体滴度的大小反映血清对病毒感染的中和能力,其是评价疫苗免疫效果和病毒感染状况的重要指标,而液相阻断酶联免疫吸附试验(liquid phase block ELISA,LPB-ELISA)是一种通过ELISA检测抗体滴度的方法,因此研究LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度的关系对疫苗评价和理论研究有重要意义。本研究采用野外采集的90份牛血清进行了中和试验和LPB-ELISA试验,结果表明中和抗体滴度和LPB-ELISA抗体滴度具有相关性,相关系数为0.642,但是试验证明有41%中和抗体阴性样品会被LPB-ELISA检测为阳性,通过改变LPB-ELISA的阳性判断标准,采用抑制率>0.7的抗体滴度计算方法和1/8判定标准,可以使改进的LPB-ELISA的计算结果和中和试验结果更好的符合,降低假阳性率,使LPB-ELISA更适合进行口蹄疫血清学监测和普查。

犊牛口蹄疫O型灭活苗两种不同免疫程序的免疫效果比较

为了研究犊牛口蹄疫O型灭活苗不同免疫程序的免疫效果，本试验采用2种免疫方案对犊牛进行口蹄疫O型灭活苗免疫，即免疫程序A在口蹄疫O型母源抗体和免疫抗体监测值接近临界值时进行免疫，免疫途径为肌肉注射，免疫剂量按疫苗说明书要求；免疫程序B的首免和二免时间比免疫程序A提前一周进行，方法同免疫程序A。免疫后不同时间采用液相阻断酶联免疫吸附试验（LPB-ELISA）检测血清口蹄疫0型抗体水平。结果表明：A组犊牛在90日龄进行首免，免疫后14天抗体水平达到有效保护水平，免疫后28天部分犊牛抗体水平下降到临界保护水平之下；首免后1个月（120日龄）进行加强免疫，二免后的免疫抗体水平对牛群的保护一直维持到免疫后120天；二免后4个月（240日龄）进行三免，免疫保护期持续4个月。但首免前和二免前抗体效价相对较低，接近临界值。B组犊牛的免疫抗体变化规律同免疫程序A，但产生高效价抗体的时间提前，整个免疫期抗体水平均处于较高水平，可提供有效保护。说明免疫程序B的免疫效果优于免疫程序A。

两种O型口蹄疫ELISA检测试剂盒的对比

为比较哪种ELISA试剂盒能够更准确、简便、快捷地检测出口蹄疫病毒抗体,本研究使用液相阻断酶联免疫吸附试验(LB-ELISA)试剂盒和固相竞争酶联免疫吸附试验(SPC-ELISA)试剂盒,对2014年广西各市县动物疫病预防控制中心送检的已免疫过口蹄疫疫苗的猪、牛、羊血清共计1121份进行了检测,对比两种试剂盒的特异性、敏感性、阳性检出率及符合率。检测结果表明,两种口蹄疫ELISA试剂盒的阳性检出率不同,LB-ELISA的阳性检出率比SPC-ELISA高2.4%;LB-ELISA试剂盒对血清抗体滴度水平的要求相比SPC-ELISA试剂盒要低,因此LB-ELISA试剂盒更适合于口蹄疫病毒感染的检测。

广东省猪群口蹄疫免疫抗体水平调查

采集广东省不同地区11个猪场的不同类型猪的血清样品3 108份,采用液相阻断-酶联免疫吸附法,以口蹄疫结构蛋白抗体滴度作为评估疫苗效力的指标。本试验共采集种公猪血清样品77份,结果显示平均抗体滴度为(1.859 1±0.078 1,1∶72);仔猪血清样品514份,平均抗体滴度为(1.793 3±0.027 9,1∶62);经产母猪血清样品604份,平均抗体滴度为(1.967 2±0.024 2,1∶92);后备母猪血清样品有1 913份,平均抗体滴度为(1.790 8±0.015 2,1∶61)。从统计结果来看,经产母猪的免疫状态是最好的,但总的来说,猪群的整体免疫水平不高,免疫形势不容乐观,口蹄疫的防治水平仍须提高。

口蹄疫检测能力比对试验的结果分析

对22份盲样采用R IHA、RT-PCR、LB-ELISA和3ABC-I-ELISA进行了检测。结果表明,在R IHA试验中,X079、X100、X232盲样分别为口蹄疫A型、O型和AsiaⅠ型抗原阳性;X136为猪传染性水泡病抗原阳性;X141、X165为阴性样本。在LB-ELISA中,L222、L271、L323、L431、L502盲样为O型口蹄疫抗体阳性;L283、L307、L457、L550、L557为阴性样本。在3ABC-I-ELISA中,Y067、Y123盲样为口蹄疫感染抗体阳性;Y167为阴性样本。在RT-PCR检测中,Z075盲样扩增出分子长为634bp、483bp和278bp 3条特异性的DNA片段,Z126盲样扩增出分子长为634bp和278bp 2条特异性的DNA片段,确定为口蹄疫病毒;Z087为阴性样本。

云南部分规模化种猪场猪瘟疫苗接种效果监测及分析

对2010年12月—2011年2月采集自昆明市、曲靖市、普洱市及红河州共6个规模化种猪场的303份疫苗免疫种猪血清及120份21日龄仔猪血清,采用抗体竞争性阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测猪瘟病毒特异性抗体效价。结果发现这些规模化种猪场的猪瘟抗体阳性检出率分别为63.6%(14/22),76.4%(68/89),61.9%(65/105),47.4%(37/78),83.3%(40/48),76.5%(62/81),其中有3个种猪场尚未达到国家猪瘟强制免疫抗体合格率全年应保持在70%以上的要求,提示应及时采取有力措施加强猪瘟免疫工作。针对调查结果,笔者还做了详细的原因分析并提出具体的改进建议。

口蹄疫检测能力比对试验的结果分析

用RIHA、RT-PCR、LB-ELISA和NSP-3ABCELISA方法对22份盲样进行检测。抗原检测结果显示:在RIHA试验中,X049,X226,X291盲样分别为口蹄疫O型、A型和AsiaⅠ型抗原阳性样品;X146为猪传染性水泡病抗原阳性;X073、X094为阴性样品。在RT-PCR试验中,Z025、Z147扩增出长度约为634bp、483bp和278bp3条特异性的DNA片段,确定为口蹄疫病毒样品;Z113为阴性样品。在LB-ELISA中,L052、L149、L262、L421、L451O型口蹄疫抗体滴度均为1∶256,均为阳性样品;L182、L184、L213、L235、L317均为阴性样品。在NSP-3ABCELISA中,Y019、Y036为口蹄疫感染抗体阳性样品;Y137为阴性样品。

2020年新疆规模化猪场猪O型口蹄疫病毒抗体检测与分析

为了解2020年新疆规模化猪场0型口蹄疫病毒抗体水平,本研究采用液相阻断酶联免疫吸附试验(LPB-ELISA)方法对采集的469份血清进行抗体检测。结果显示,猪0型口蹄疫病毒抗体平均阳性率为88.06% (413/469)。不同类别猪群抗体的阳性率均达到85.00%以上。结果表明,8个规模化猪场0型口蹄疫病毒抗体阳性率均达到国家标准(70%),但1个规模化猪场阳性率仅为56.70%,需要制定更加合理的免疫程序。