促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬酶-9 mRNA表达的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬酶9(caspase9)mRNA表达的影响。方法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,随机分为脑缺血再灌注组(A组)、EPO干预组(B组)。制模后A、B两组再分为6h、12h、24h、48h、72h5个亚组。在相应时间点断头取脑,逆转录聚合酶链反应技术检测大鼠皮质caspase9mRNA的表达,并与对照组(C组)比较。结果全脑缺血再灌注后,(1)A组caspase9mRNA的表达各时间点明显高于B组和C组(均P<0.05);(2)B组在6h、12h、24h、48h时caspase9mRNA的表达明显高于C组(均P<0.05),但72h时与C组比较差异无显著性。结论EPO对缺血再灌注损伤后神经元的保护机制之一与阻滞或下调凋亡通路中的caspase9的表达有关。

磷酸二酯酶-9A对评估冠状动脉粥样硬化病变程度的临床价值

目的:探讨血浆磷酸二酯酶-9A(PDE-9A)水平与冠状动脉(冠脉)粥样硬化病变严重程度的关系。方法:选择经冠脉造影确诊的冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)75例(单支病变33例、二支病变22例、三支病变20例)和同期行冠脉造影无血管病变的对照组25例,应用ELISA法测定血浆PDE-9A水平。以冠脉病变血管支数及Gensini积分评估冠脉粥样硬化程度,并与血浆PDE-9A水平进行相关分析。应用ROC曲线评估PDE-9A对严重冠脉病变的预测价值。结果:冠心病组血浆PDE-9A水平明显高于对照组[(29.50±7.77)ng/mL对(15.35±3.25)ng/mL,P<0.05)]。随冠脉病变血管支数增多,血浆PDE-9A水平也逐渐升高(P<0.05)。血浆PDE-9A水平与Gensini冠脉病变积分呈正相关(r=0.319,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血浆PDE-9A>24.73 ng/mL预测多支(二支和三支)血管病变的敏感性为78.6%,特异性为92.3%;预测严重冠脉粥样硬化(Gensini积分≥45)的敏感性为93.2%,特异性为94.8%。但logistic多因素回归分析提示,血浆PDE-9A水平不是冠脉病变的独立危险因素。结论:血浆PDE-9A水平对评估冠脉病变严重性具有一定的临床价值。

冬梅饮对早期糖尿病肾病大鼠肾组织基质金属蛋白降解酶-9和氧化应激的影响

目的:观察冬梅饮对糖尿病肾病大鼠肾组织基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinase-9,MMP-9)和氧化应激(OS)的影响,探讨冬梅饮防治早期糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法:STZ腹腔注射建立早期DN模型,将成模大鼠随机分成模型组、冬梅饮治疗组、缬沙坦治疗组,治疗8周。采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测肾组织MMP-9的含量并检测血清氧化应激指标。结果:与正常组比较模型组大鼠肾组织MMP-9含量减少,血清SOD、GSH-Px、CAT活力明显降低,血清MDA含量增多,与模型组比较冬梅饮组可明显增加肾组织MMP-9含量,调整氧化应激状态。结论:早期糖尿病肾损伤可能与基质金属蛋白酶异常变化及氧化应激有关,冬梅饮可能通过影响上述指标的变化而起到保护肾功能的作用。

创伤性脑损伤后脑组织核因子-κB和基质金属蛋白酶-9的表达

目的研究创伤性脑损伤(TB I)后损伤区脑组织核因子κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨其在继发性脑损害中的作用机制。方法采用自由落体撞击法造成大鼠右侧顶叶脑挫裂伤,W istar大鼠随机分为对照组、伤后3、12、24、72小时和7天组。采用EMSA测定NF-κB的活性,免疫组化测定MMP-9的表达。结果TB I后NF-κB的活性和MMP-9的表达逐渐增强,至伤后72小时达高峰,伤后7天仍保持在较高水平。NF-κB和MMP-9在表达时相和强度上呈正相关关系。MMP-9表达阳性细胞包括血管内皮细胞、神经胶质细胞和少数神经元细胞及侵入的中性粒细胞。结论TB I可引起损伤区脑组织NF-κB活性和MMP-9的表达明显增强,可能在脑组织的继发性损害中起重要作用。

基质金属蛋白酶-9在甲状腺良恶性病变组织中表达及临床意义

目的:探讨甲状腺良恶性病变组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及其临床意义。方法:应用微波-LSAB免疫组化法检测50例甲状腺癌、45例甲状腺腺瘤和20例癌旁甲状腺组织中MMP-9的表达。结果:甲状腺癌中MMP-9表达阳性率(64.0%)显著高于甲状腺腺瘤(37.8%)和癌旁甲状腺组织(25.0%,P<0.05)。MMP-9表达阳性率与甲状腺癌组织类型无关;有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者(P<0.05);病理分期Ⅲ～Ⅳ期病例显著高于Ⅰ～Ⅱ期病例(P<0.05);MMP-9阳性的甲状腺癌复发及病死率显著高于阴性者(P<0.05)。结论:MMP-9表达对甲状腺癌恶性程度判断、生物学行为预测和预后评估有一定价值。

灯盏细辛对糖尿病大鼠肾组织中基质金属蛋白酶-9表达及活性的影响

目的研究灯盏细辛对糖尿病大鼠肾组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及活性的影响,探讨该药防治糖尿病肾病(DN)的机制。方法采用腹腔注射STZ制备糖尿病动物模型,将大鼠随机分为正常组、模型组、灯盏细辛组、苯那普利组,分别于4、8周处死,经免疫组化及酶谱法(Zymography法)观察各组肾组织MMP-9的表达部位及其活性水平。结果灯盏细辛能增加MMP-9的蛋白表达,提高其活性水平(P<0.05),与苯那普利组比较,两组的血清生化指标和MMP-9的蛋白表达水平相似。结论MMP-9在DN发生发展中起重要作用,灯盏细辛通过上调MMP-9在肾组织的蛋白表达达到治疗DN的目的。

成釉细胞瘤中RECK基因，基质金属蛋白酶-9的表达及相互关系

目的研究RECK,基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在成釉细胞瘤(AB)中及牙源性角化囊肿(OKC)中的表达,探讨其在成釉细胞瘤中的发生发展中的作用。方法应用免疫组化SP法检测40例AB,16例OKC中RECK、MMP-9的表达。结果RECK在AB中低表达(30%),并随AB的复发而降低(P<0.05)。MMP-9在AB中高表达(82.5%),并随AB的复发而增高(P<0.05)。AB中RECK与MMP-9的表达呈负相关(P<0.001)。结论RECK的低表达与MMP-9过表达与AB浸润、转移有关,可以作为评估AB发生及恶性程度的重要指标。RECK/MMP-9之间的表达失衡可能是理想的预后标记物和潜在的分子抗癌药物靶点。

基质金属蛋白酶-9在子宫平滑肌瘤中的表达及意义

目的研究子宫平滑肌瘤患者正常子宫平滑肌及子宫肌瘤平滑肌中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,探讨子宫平滑肌瘤可能的发病机制。方法取38例子宫肌瘤患者的肌瘤组织和该肌瘤邻近的正常平滑肌组织,分别命名为正常子宫平滑肌组和子宫肌瘤平滑肌组。免疫组化SP法检测两组平滑肌中MMP-9蛋白的表达。结果 MMP-9蛋白在正常子宫平滑肌及子宫肌瘤平滑肌中均有表达,且子宫肌瘤平滑肌(0.245±0.048OD值)中的表达水平显著性高于正常子宫平滑肌(0.123±0.019OD值)(P<0.01)。结论 MMP-9蛋白在子宫平滑肌瘤的表达增加,可能参与子宫平滑肌瘤的发病机制。

冠心病患者二肽基肽酶-4、前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶-9、同型半胱氨酸水平与冠状动脉病变严重程度的相关性分析

目的分析冠心病患者二肽基肽酶-4(DPP-4)、前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶-9(PCSK-9)、同型半胱氨酸(Hcy)水平与冠状动脉病变严重程度的相关性。方法选择2018年1月至2019年12月在宁波大学附属人民医院与宁波市医疗中心李惠利医院接受诊治的冠心病患者120例作为冠心病组,另选择60例同期行体检的健康人群作为对照组,比较冠心病组与对照组DPP-4、PCSK-9、Hcy水平差异。根据SYNTAX积分将冠心病组患者分为低危组42例、中危组38例、高危组40例,比较不同冠状动脉病变程度患者DPP-4、PCSK-9、Hcy水平差异。另采用Spearman法对冠心病患者DPP-4、PCSK-9、Hcy水平与冠状动脉病变程度进行相关性分析。结果冠心病组患者DPP-4、PCSK-9、Hcy水平均明显高于对照组(t=8.601、10.009、13.654,P<0.05)。低危组、中危组和高危组间比较差异有统计学意义(F=57.224、17.562、153.047,P<0.05)。冠心病患者DPP-4、PCSK-9、Hcy水平与冠状动脉病变程度呈正相关(r=0.709、0.487、0.839,P<0.05)。结论冠心病患者血清DPP-4、PCSK-9、Hcy水平随冠状动脉病变严重程度的增加而升高,可用于评估冠状动脉病变的严重程度。

2型糖尿病大鼠肺组织基质金属蛋白酶-2、9及其抑制因子-1的表达变化

目的通过检测2型糖尿病大鼠肺组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的表达变化,探讨MMP-2、MMP-9及TIMP-1在糖尿病肺损伤中的作用。方法通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法 ,建立2型糖尿病大鼠模型,采用光镜动态观察12周、24周时对照组、糖尿病组的大鼠肺组织的形态学改变,用Masson三色染色观察肺组织胶原沉积情况,应用免疫组织化学方法检测2组大鼠肺组织MMP-2、MMP-9及TIMP-1的动态表达变化情况。结果糖尿病大鼠肺组织胶原含量明显增多,糖尿病大鼠肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1表达增多,同时MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比例也增加。随病情进展,上述变化更加明显。结论糖尿病大鼠出现了肺间质纤维化,MMP-2、9及TIMP-1表达增多及其比例紊乱参与了糖尿病肺组织病变的发生发展,可能是糖尿病肺纤维化发生的机制之一。

α1-抗胰蛋白酶和蛋白溶解酶-9与AL型肾脏淀粉样变性病的相关性分析

目的研究肾脏淀粉样变性病患者α1-抗胰蛋白酶和蛋白溶解酶-9的表达特点,探讨其在本病进展中的作用。方法 2006年1月至2014年1月于黄石市中心医院肾内科治疗或诊断的AL型肾脏淀粉样变性病患者共60例(其中蛋白尿期42、肾病综合征期16例、尿毒症期2例),比较蛋白尿期与肾病综合征期患者血清肾功能,同时对两组肾脏切片做免疫组化观察,最后ELISA与Western blot法测定两组肾脏提取液中α1-抗胰蛋白酶与蛋白溶解酶-9表达,RT-PCR法测定mRNA表达。结果肾病综合征期患者血清血尿素氮、血肌酐、血尿素以及血尿酸明显高于蛋白尿期患者(P<0.05);肾脏切片免疫组化示,α1-抗胰蛋白酶与蛋白溶解酶-9 2个指标肾病综合征期患者明显少于蛋白尿期患者(P<0.05);ELISA以及Western blot显示α1-抗胰蛋白酶与蛋白溶解酶-9表达肾病综合征期患者均明显低于蛋白尿期患者(P<0.05),RT-PCR结果显示,α1-抗胰蛋白酶与蛋白溶解酶-9 mRNA表达肾病综合征期患者明显低于蛋白尿期患者(P<0.05)。结论α1-抗胰蛋白酶和蛋白溶解酶-9与AL型肾脏淀粉样变性病的发生与发展密切相关,今后或可作为一个治疗靶点。

锰对大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-9和凋亡抑制蛋白表达的影响

为研究锰对大鼠睾丸生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-9(caspase-9)、凋亡抑制蛋白(livin)表达的影响,将24只健康雄性清洁级SD大鼠随机分为3组,分别为对照(生理盐水)组和15、30 mg/kg氯化锰染毒组,每组8只。采用腹腔注射方式进行染毒,每天1次,每周5 d,连续染毒6周。采用免疫组化SP法检测睾丸生精细胞caspase-9、livin蛋白的表达情况。结果显示,与对照组比较,15、30 mg/kg氯化锰染毒组大鼠睾丸生精细胞caspase-9的阳性细胞率均升高,livin的阳性细胞率均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。且随着氯化锰染毒剂量的升高,大鼠睾丸生精细胞caspase-9的阳性细胞率呈上升趋势,livin的阳性细胞率呈下降趋势。提示锰可通过上调大鼠生精细胞caspase-9表达和下调livin表达诱导生精细胞凋亡。

醋酸铅对PC12细胞半胱天冬酶-6、-9活性的影响

目的 了解醋酸铅对PC12细胞半胱天冬酶(caspase)-6、-9活性的影响。方法 PC12细胞分别不同时间(12、24、36、48、60、72 h)暴露于不同浓度的醋酸铅(0、62.5、125.0、250.0、500.0 μmol/L),用比色法检测其caspase-6、-9的活性。结果 PC12细胞暴露于250.0μmol/L醋酸铅24 h可见caspase-6活性升高,48 h达高峰(为对照组的5.75倍,P<0.01),至72 h仍高于对照组(P<0.01)。PC12细胞暴露于250.0 μmol/L醋酸铅12 h,caspase-9活性已升高,36 h达高峰(约为对照组的7.48倍,P<0.01),至60 h已降至与对照组无差别的水平。PC12细胞暴露于不同浓度的醋酸铅48 h(caspase-6)和36 h(easpase-9),可见caspase-6、-9活性具有浓度依赖性的增加。结论 醋酸铅可引起caspase-6、-9活性的升高。

奶牛胎次对乳中CLA含量和△^9-去饱和酶指数的影响

选择235头健康的中国北方荷斯坦奶牛为研究对象，为避免日粮和季节的影响，奶牛饲喂同种日粮，采集同一天的乳样，测定奶牛泌乳性能和乳脂肪酸组成，研究胎次对乳中CLA含量和△^9-去饱和酶指数的影响。研究结果表明：乳中c9，t11 CLA含量平均为5．14mg／g脂肪酸，变化范围1．5～10．5mg／g脂肪酸。初产奶牛的c9，t11 CLA平均含量为5．19mg／g脂肪酸，而经产奶牛的c9，t11 CLA平均含量为5．11mg／g脂肪酸，但二者间差异不显著（P〉0．05），初产与经产奶牛之间的c9 C14：1去饱和酶指数和c9 C16：1去饱和酶指数差异显著（P〈0．05）。初产奶牛的c9 C18：1去饱和酶指数和c9，t11 CLA去饱和酶指数与经产奶牛的差异不显著（P〉0．05）。

产奶量对乳中c9,t11CLA含量和乳腺△^9-去饱和酶指数的影响

以北方荷斯坦奶牛为研究对象,研究产奶量对乳中c9,t11CLA含量的影响。选择饲喂同种饲料的235头健康荷斯坦奶牛,采集同一天的乳样,避免日粮和季节的影响。通过线性分析,探讨产奶量对乳中c9,t11CLA含量和乳腺△9-去饱和酶指数的影响。结果表明,奶牛产奶量与乳中c9,t11CLA含量和乳腺△9-去饱和酶指数的线性模拟发现,其R2值均小于0.01。结论:奶牛产奶量对乳中c9,t11CLA含量和△9-去饱和酶指数影响很小,所以想提高乳中共轭亚油酸含量,不需要考虑产奶量的不同。

花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因启动子的克隆及功能分析

Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶（SAD）是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因（Ah SAD）起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5＇RACE方法获得了该基因的5＇UTR序列,通过序列比对确定720 bp片段为Ah SAD启动子区域。PLACE在线启动子预测分析表明,该序列具有真核生物启动子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,含有多个与光诱导和激素响应相关顺式序列元件。将Ah SAD启动子片段替换pBI121质粒中的CaMV35S启动子驱动下游GUS基因表达,构建植物表达载体pBI-PAh SAD。通过农杆菌介导法转化拟南芥和在花生不同组织中瞬时表达,利用GUS组织化学染色研究其表达特性。表明在拟南芥和花生受体中,AhSAD启动子主要调控下游基因在根、茎、叶片和子叶中表达,在花生的果针中也检测到GUS活性;拟南芥的茎生叶只有叶脉中具有GUS活性,而花生整个叶片中都具有GUS活性。

前蛋白转化酶枯草溶菌素9通过肝源性巨噬细胞移动抑制因子调控动脉粥样硬化炎症反应的研究

目的利用人细胞株,系统研究PCSK9是否通过肝源性MIF调控单核/巨噬细胞炎症反应,进而为动脉粥样硬化(Atherosclerosis)等炎症性疾病的临床防控提供新的思路和依据。方法利用小干扰RNA(Small interfering RNA,SiRNA)介导的MIF基因转染THLE-3细胞,将实验分为MIF低表达组(Si-MIF-THLE-3)和MIF正常表达组(Con-THLE-3),通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测肝细胞中PCSK9、MIF mRNA表达。在Si-MIF-THLE-3组和Con-THLE-3组中分别给与PCSK9重组蛋白进行干预,通过Western Blot检测肝细胞中PCSK9、MIF蛋白表达,并用ELISA测定培养液中PCSK9及MIF的含量,并收集上述肝细胞的培养液,-80℃冻存。利用SiRNA介导的MIF基因转染THP-1细胞,将实验分为MIF低表达组(Si-MIF-THP-1)和MIF正常表达组(Con-THP-1),通过Western Blot检测MIF的蛋白表达。将收集的肝细胞培养液分别加入Si-MIF-THP-1和Con-THP-1组共培养48 h,其中PCSK9干预组另设TLR4特异性抑制剂TAK-242(1μM)(P+T)。通过ELISA检测炎症因子表达;Western Blot检测THP-1细胞株中TLR4—NF-κB信号通路的表达。结果①Si-MIF-THLE-3组较Con-THLE-3组的MIF mRNA表达显著降低,而PCSK9的mRNA表达升高(P均<0.05)。②PCSK9干预后肝细胞MIF蛋白的表达以及分泌至培养液中的含量升高,而PCSK9蛋白的表达以及培养液中的含量不变(P均<0.05)。③Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组的MIF蛋白表达显著降低(P均<0.05)。④Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组炎症因子的表达低,PCSK9干预组较正常组和P+T组的炎症因子表达升高;PCSK9干预组较正常组和P+T组的TLR4蛋白表达升高;Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组的IKBα蛋白表达高,PCSK9干预组较正常组和P+T组的IKBα蛋白表达低;PCSK9干预组较正常组和P+T组的P65/P50蛋白表达高(P均<0.05)。结论PCSK9可诱导肝细胞MIF的合成与分泌,肝细胞分泌的MIF可与巨噬细胞表面受体TLR4结合,激活下游NF-κB炎症信号通路,促进TNF-α、白介-6、白介-1β、单核细胞驱化因子-1等炎症因子的分泌,激发炎症效应。

固始-安卡鸡F_2资源群△-9脂肪酸脱氢酶基因第4、5、6外显子SNP及其与脂肪酸相关性研究

利用PCR-SSCP(single strand conformation polymorphism)方法,对固始-安卡鸡F2代资源群△-9脂肪酸脱氢酶基因第4、5、6对外显子多态性进行分析,发现存在一个单核苷酸多态(SNP,single nucleotide polymorphisms)位点。在△-9脂肪酸脱氢酶基因第4外显子编码区(89nt)发生了碱基的转换突变(G→A)。在整个F2代资源群中进行了该多态位点与脂肪酸性状的相关分析,结果表明:在8个脂肪酸性状中,AA型个体十六碳二烯酸(C16∶2)含量显著高于GG型和GA型个体(P<0.05);家系1中AA型的C16∶0、C16∶2、C18∶0含量均显著高于GG型和GA型(P<0.05);家系3中AA型的C14∶0含量显著高于GG型和GA型(P<0.05)。

猫爪草酰基-Δ9脱氢酶基因植物表达载体的构建及瞬时表达

猫爪草种子能高水平积累棕榈油酸(C16∶1Δ9)和顺式-11-十八碳烯酸(C18∶1Δ11)等具有食品、医药和工业应用价值的ω-7脂肪酸(ω-7 FA)。酰基-Δ9脱氢酶(acyl-Δ9 desaturase,Δ9D)底物特异性决定着植物细胞合成单烯脂肪酸的种类。为检测来自猫爪草的酰基-ACP-Δ9脱氢酶(MucACP-Δ9D)是否可异源表达用于在其他植物合成ω-7 FA,文章构建了MucACP-Δ9D基因植物表达载体,并通过农杆菌介导在本氏烟草叶组织瞬时表达。用气相色谱(GC)检测烟叶脂肪酸成分,结果显示,野生型及空载体对照的ω-7FA总含量仅为0.4%;然而,MucACP-Δ9D瞬时表达的烟叶组织ω-7 FA总含量提高到14.2%,其中,C16∶1Δ9和C18∶1Δ11含量分别达8.8%和5.4%。研究表明,MucACP-Δ9D可在异源组织催化棕榈油酸合成,可进一步用于其他油料作物的油脂遗传改良,以富集ω-7 FA。

3-甾酮-9α-羟基化酶基因的表达及其催化合成9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮

研究应用于甾体9α-羟基化的高效催化剂和催化体系是实现甾体药物9α位羟基高效合成的关键。本文中,笔者对来源于分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis) H37Rv和红平红球菌(Rhodococcus erythropolis) SQ1的3-甾酮-9α-羟基化酶基因(reksh A,mtksh A)进行优化,并对2个基因的催化活性进行检测。通过构建工程表达菌株,以雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)为底物,对制备9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮(9α-OH-AD)的催化反应进行了探索。结果表明:基因序列优化显著提升了Re Ksh A和MtKshA蛋白的可溶性表达,其中Re Ksh A具有较好的雄甾-4-烯-3,17-二酮9α位羟基化活性。用TB培养基培养Re Ksh A的工程表达菌株BL21(DE3)-p ET28a-reksh A-yh,在30℃、500μmol/L底物浓度、0. 8%(体积分数)乙醇为助溶剂、0. 1 mmol/L IPTG诱导浓度、底物与诱导剂同时加入到工程菌液中的条件下,9α-OH-AD得率达到97. 09%。