酪氨酸蛋白激酶抑制剂对正常人角质形成细胞增殖的影响

目的 观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂 genistein对体外培养的正常人角质形成细胞增殖代谢的影响 .方法 将不同浓度的 genistein(GST)作用于体外培养的正常人角质形成细胞 ,测定 MTT值及 3 H- Td R参入量 ,并用流式细胞仪测定细胞周期的变化 .结果 以对照组 MTT和 A490 nm值作为百分之百 ,不同浓度的 GST(10 - 7,10 - 6,10 - 5m ol· L- 1 )的 MTT和 A490 nm值变化率分别为 (90 .8± 5 .2 ) % ,(76 .5± 4.8) %和(6 4.3± 5 .7) % (P<0 .0 1) ,cpm值的变化率分别为 (87.1±4.9) % ,(73.4± 5 .3) %和 (5 7.6± 5 .6 ) % (P<0 .0 1) .表明不同浓度的 GST可明显抑制角质形成细胞的代谢与 DNA合成 ,并存在着剂量效应 .与对照组相比 ,10 - 5mol· L- 1的GST作用 2 4h可使体外培养的正常人角质形成细胞 G1 期细胞比例明显增加 (4 0 .3% vs 71.6 % ,P<0 .0 1) ,而 G2 +S期细胞比例则明显下降 (5 9.7% vs2 8.4% ,P<0 .0 1) .结论 GST在体外能明显抑制体外培养的正常人角质形成细胞的增殖与代谢 .

酪氨酸激酶受体RON蛋白质在胃癌患者中的表达及其临床意义

目的探讨RON蛋白在人胃癌组织中表达及与预后关系。方法采用免疫组织化学技术检测胃癌、癌旁和正常胃黏膜组织的RON表达及用免疫印迹技术检测新鲜胃癌、癌旁、伴转移的淋巴结和正常对照组织的RON表达，并对胃癌术后患者进行随访（3～89个月）。结果（1）胃癌组织RON表达率为56．1％（55／98），癌旁组织为25．6％（8／29）（P〈0．01），而正常胃黏膜不表达；（2）RON表达与胃癌细胞浸润深度、有否伴淋巴结转移和临床病理分期有明显关系（均P〈0．05），而与Borrmann分型、组织学类型及是否伴远处转移无明显关系（均P〉0．05）；（3）RON阳性表达组与阴性组术后生存率差异无统计学意义（P〉0．05）；（4）新鲜胃癌组织，相应癌旁组织和伴转移的淋巴结中RON变异体（RONA165）均呈强表达，而正常胃黏膜和正常淋巴结未见RON变异体表达。结论RON在胃癌发生，发展和转移过程中扮演重要作用，其对评估胃癌生物学行为有一定参考价值。

黏着斑激酶siRNA抑制结肠癌细胞株侵袭的机制研究

目的研究胃泌素-胆囊收缩素2受体(CCK2R)-黏着斑激酶(FAK)信号通路在人结肠癌细胞侵袭过程中的作用,探讨通过FAK siRNA降低FAK表达抑制癌细胞侵袭的可行性。方法使用CCK2R的真核表达载体pCR3.1/CCK2R,转染人结肠癌细胞株Colo320,使用RT-PCR检测细胞CCK2R表达情况。设计并合成针对FAK的siRNA,转染细胞,抑制FAK表达;使用胃泌素刺激结肠癌细胞,免疫沉淀和蛋白质印迹法检测不同情况下FAK第397位酪氨酸(tyr-397)磷酸化表达情况;Boyden小室法检测相应细胞侵袭力变化。结果真核表达载体pCR3.1/CCK2R可以有效增加CCK2R表达,增加CCK2R可以增强胃泌素促FAK tyr-397磷酸化和细胞侵袭力作用。使用RNA干扰技术可以明显降低细胞内FAK tyr-397磷酸化,并抑制胃泌素促结肠癌细胞侵袭作用。结论胃泌素-CCK2R-FAK信号通路在结肠癌细胞侵袭和转移过程中发挥关键作用,阻断FAK表达可以有效抑制胃泌素促结肠癌细胞侵袭作用。