酸性富含半胱氨酸分泌型蛋白的表达与食管鳞状细胞癌患者临床特征的关系

目的:观察食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中酸性富含半胱氨酸分泌型蛋白(secreted protein acidicand rich in cysteine,SPARC)的表达与患者临床特征的关联.方法:收集90例诊断为ESCC患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用免疫组织化学检测肿瘤组织及癌旁组织中SPARC的表达,并探讨其表达与食管癌患者临床特征的关系.结果:肿瘤组织中有73例SPARC表达阳性,阳性率81.11%,癌旁组织中SPARC表达均为阴性.肿瘤组织与癌旁组织SPARC表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05).72.22%(65例)SPARC阳性表达均位于细胞间质,少量(8.89%,8例)位于细胞质.肿瘤组织中SPARC表达与肿瘤分期、转移与否密切相关(P<0.05).结论:对ESCC患者进行SPARC检查,可以作为预测食管鳞癌分期、转移的重要指标.

脾虚大鼠壁细胞酸分泌机制的实验研究

目的:观察脾虚模型大鼠酸分泌的异常及补中益气汤对其的调节作用,探讨脾虚状态的酸分泌机制。方法:采用大黄脾虚模型,透射电镜观察离体壁细胞形态、双波长荧光分光光度计测定胃泌素刺激后壁细胞内[Ca2+]i变化及整体胃灌流实验。结果:电镜观察脾虚大鼠壁细胞分泌小管扩张,处于分泌状态;经胃泌素刺激后脾虚大鼠壁细胞内[Ca2+]i增高幅度明显高于正常组;胃灌流实验表明脾虚大鼠基础胃酸量显著低于正常组,而经组胺刺激后酸分泌增高幅度明显高于正常组,补中益气汤对其有调节作用。结论:脾虚大鼠存在酸分泌敏感性相对增高,胃黏膜易损性增强的反应。健脾益气方补中益气汤对其有一定的调节作用。

蛇毒富含半胱氨酸分泌蛋白

富含半胱氨酸分泌蛋白(cystein-rich secretory protein,CRISP)家族包括众多不同起源的蛋白质,其大部分成员功能未知。近来研究表明,CRISP也是蛇毒中进化上十分保守的成分,已有多种蛇毒CRISP的晶体结构被解析。蛇毒CRISP可阻断Ca2+通道、K+通道及环核苷酸门控通道,因此是研究离子通道的潜在工具。本文综述近年来蛇毒CRISP结构和功能等方面的研究。

酸性富含半胱氨酸分泌型蛋白表达与食管鳞癌术后预后的相关性

目的探讨食管鳞癌患者中酸性富含半胱氨酸分泌型蛋白(SPARC)表达与术后临床特征及预后的相关性。方法随机选择在郑州大学附属肿瘤医院行手术治疗的初诊食管鳞癌患者89例,收集肿瘤标本和癌旁正常组织,应用免疫组织化学法检测SPARC蛋白的表达,统计分析其与患者临床特征和预后的相关性。结果食管鳞癌组织SPARC蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(65.17%vs.8.00%,P=0.000),SPARC蛋白优势定位于肿瘤细胞间质中。SPARC蛋白表达与术后淋巴结转移呈负相关(OR=0.369,P=0.038),与病理大体形态、肿瘤分化程度和其他临床特征无关。食管鳞癌患者术后生存与SPARC蛋白表达无关(HR=0.80,P=0.691),而与肿瘤部位(HR=0.34,P=0.037)、分化程度(HR=4.12,P=0.000)和分期(HR=6.36,P=0.017)有关。结论 SPARC蛋白在食管鳞癌间质中高表达,与淋巴结转移负相关,与食管鳞癌术后生存无关。

酸分泌抑制剂对颅脑损伤后应激性溃疡的预防作用

目的 :观察酸分泌抑制剂预防颅脑损伤后应激性溃疡的效果。方法 :将 112例颅脑损伤患者随机分成预防用药组(n =5 7)和对照组 (n =5 5 ) ;预防用药组根据使用药物不同再分成A组 (奥美拉唑 4 0mg·d-1)和B组 (西咪替丁 2 0～ 30mg·kg-1·d-1)。以呕血、胃液或粪隐血试验和空腹胃液的pH值等为观察指标。结果 :预防用药组应激性溃疡发生率 (17 5 4 % )和死亡率 (5 2 6 % ) ,与对照组 (4 5 .4 5 % ,18 18% )比较均有显著性降低 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ;A组应激性溃疡发生率 (6 90 % )与B组 (2 8 5 7% )比较明显减少 (P <0 0 5 ) ,但 2组死亡率比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :颅脑损伤后尽早使用酸分泌抑制剂能显著降低应激性溃疡的发生率和死亡率 ;

富含半胱氨酸分泌蛋白-1基因免疫避孕疫苗对小鼠生育抑制

目的:探讨pcDNA3.1-Crisp-1DNA疫苗的生育抑制效果。方法:选取6~8周龄SPF级BALB/c小鼠40只雌雄各半,随机将雌性小鼠分为观察A组和对照A组,雄性小鼠分为观察B组和对照B组每组10只,观察组经肌肉接种重组质粒pcDNA3.1-Crisp-1,对照组接种pcDNA3.1空载体,酶联免疫吸附试验检测血清富含半胱氨酸分泌蛋白-1(Crisp-1)水平;同时选取40只正常小鼠行避孕效果试验,HE染色观察卵巢、睾丸、附睾组织。结果:观察A组和观察B组血清Crisp-1抗体OD值(0.673±0.102、0.680±0.101)均高于对照A组和对照B组,小鼠妊娠率(30.0%、20.0%)低于对照A组和对照B组,每窝产仔数(5.6±0.3只、5.5±0.9只)低于对照A组和对照B组(均P<0.05);观察A组和对照A组小鼠卵巢组织结构正常,无萎缩。观察B组和对照B组小鼠睾丸、附睾基底膜完整,曲细精管直径正常,睾丸内有丰富的精子和各级精细胞,附睾有大量成熟精子。结论:pcDNA3.1-Crisp-1DNA疫苗有一定抑制生育作用,值得进一步研究。

酸分泌抑制剂以外的内科疗法

随着社会、经济的飞速发展，人们的生活模式发生了时代性转变──人口老龄化、饮食西化、肥胖者增加。随之而来的消化系统疾病，特别是食管领域疾病，越来越受到人们的瞩目。其中尤其胃食管反流病大有发病增多之势，值得引起各科医生的关注。面对这一新动向，本刊选译了２００１年第５０卷第７期《综合临床》杂志特集──胃食道逆流症ＧＥＲＤ，全集共载文２６篇。全集系统地、全面地讲述了胃食道反流病的病因、病理、诊断、治疗及其与各科的关连。本专辑全部由哈尔滨医科大学附属第二医院内科医生翻译，姚桢教授主审，颇值得临床一线的医生一读。

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在肿瘤中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)是肿瘤微环境中重要的基质成分,它作为正常细胞恶变和肿瘤发生发展过程中一个重要的分子,能够调节多种肿瘤相关细胞因子及其受体的相互作用,并调节多种信号通路以及蛋白水解酶的表达水平。由于它抑制和促进肿瘤进展的能力取决于细胞类型、肿瘤分期等,因此在多种类型的肿瘤中差异表达,并可能成为肿瘤早期诊断的新型生物标记物以及治疗的新靶点。本文就近年来SPARC在肿瘤研究中的进展作一综述。

微小核糖核酸-451a在人参养荣汤治疗鼻咽癌放射性黏膜损伤中的机制研究

目的:通过检测微小核糖核酸-451a(miR-451a)和富含半胱氨酸的分泌性酸性蛋白(SPARC)mRNA的表达,推断人参养荣汤治疗鼻咽癌(NPC)放射性黏膜损伤的疗效及作用机制。方法:选择2022年3月—2023年5月收治的鼻咽癌放射性口腔黏膜损伤患者30例作为观察组,选择同期健康者30例作为对照组。采用辨证论治拟人参养荣汤加减治疗,比较观察组治疗前后患者中医症候积分量表和口干程度、口咽疼痛程度、黏膜损伤程度。检测治疗前后患者血清miR-451a和SPARC mRNA表达水平。结果:人参养荣汤可以有效降低患者主症和次症严重程度、Ⅲ级和Ⅳ级口腔黏膜损伤程度、口咽疼痛程度以及口干程度,使患者血清中miR-451a表达下降,促进SPARC mRNA蛋白翻译增强(P<0.05)。治疗前后,miR-451a与中医症候积分均呈正相关(P<0.05)。结论:人参养荣汤对鼻咽癌放射性黏膜损伤具有一定的临床疗效,可降低miR-451a表达水平,升高SPARC mRNA表达水平;miR-451a抑制了SPARC mRNA的翻译,可为将来的中西医结合治疗提供理论依据。

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在心血管疾病中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)为典型的基质细胞蛋白,参与组织发育和修复,通过调节细胞黏附、增殖和生长因子信号转导,以及细胞外基质与细胞的相互作用,在心肌损伤过程发挥重要作用。该文介绍SPARC在高血压、冠状动脉粥样硬化性心脏病、心力衰竭、病毒性心肌炎等心血管疾病中的相关研究进展。

小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1特异性抗体的抗生育作用机制

目的:体外观察小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1(mCRISP 1)抗体对受精过程中各环节的影响,探讨mCRISP 1特异性抗体的抗生育作用机制。方法:获取重组mCRISP 1蛋白疫苗免疫后8周小鼠的免疫血清,梯度稀释(1∶10,1∶50,1∶100,1∶200)后与生育功能正常的小鼠精子悬液共孵育,对照组采用未免疫血清。观察mCRISP 1抗体对精子存活率、活力、凝集反应、顶体反应及对精卵穿透试验的影响。结果:各组间精子的存活率、活力、顶体反应发生率均无显著差异(P>0.05),mCRISP 1抗血清与正常雄性小鼠精子共孵育后,精子无凝集现象;当抗血清浓度≥1∶100时,精卵融合率显著下降(P<0.05),但各组间每卵黏附精子数无显著差异(P>0.05)。结论:mCRISP 1抗体主要通过抑制小鼠精卵融合过程降低小鼠生育能力。

幽门螺杆菌及其培养上清液粗提蛋白对兔离体胃壁细胞酸分泌的影响

目的通过研究幽门螺杆菌（Hp）及其培养上清液粗提蛋白（BCF-P）对兔离体胃壁细胞酸分泌的影响，探讨Hp感染引起宿主胃酸分泌状态改变的可能机制。方法兔胃体黏膜经Ⅰ型胶原酶消化、离心淘洗后获得新鲜分离的壁细胞，并进行短期培养。提取Hp培养上清液粗提蛋白（BCF-P）并进行真空干燥浓缩，HeLa细胞以中性红摄取试验鉴定其细胞空泡活性。兔离体壁细胞与Hp及BCF-P（100μg／ml）分别共孵育2、16h和1、12h，应用^14C-氨基比林（^14C-AP）摄取法测定Hp和BCF-P对组胺（1．0×10^-4mol／L）刺激的壁细胞酸分泌的影响；同时应用RT-PCR方法分析Hp和BCF-P对壁细胞H^＋-K^＋ATP酶α亚基mRNA表达的影响。结果（1）BCF-P中含有细胞空泡毒素（VacA），对HeLa细胞表现出细胞空泡活性。（2）与Hp共孵育2h和16h均能抑制组胺刺激的壁细胞酸分泌（P〈0．05），抑制作用随孵育时间延长而增强，2h抑制率为81％，16h为94％；BCF-P作用1h和12h，均能抑制壁细胞酸分泌（P〈0．05），抑制作用也随孵育时间延长而增强，1h抑制率为24％，12h为58％。（3）尽管与Hp孵育2h能上调壁细胞H^＋-K^＋ATP酶α亚基mRNA表达（P〈0．05），但孵育16h则表现为下调其表达（P〈0．05）；BCF-P作用1h和12h，均抑制H^＋-K^＋ATP酶α亚基mRNA的表达（P〈0．05）。结论Hp及其分泌的VacA可能通过下调壁细胞H^＋-K^＋ATP酶表达水平来抑制组胺刺激的壁细胞酸分泌。

富含半胱氨酸分泌蛋白生物学功能的研究进展

富含半胱氨酸分泌蛋白(cysteine-rich secretory proteins,CRISPs)包含众多不同起源的蛋白质,其大部分成员功能未知。近年来研究发现,哺乳动物中的CRISP家族各成员主要存在于生殖道中,在精子的成熟、精卵融合以及免疫系统中发挥着非常重要的作用,并且其表达水平的改变与人类多种重大疾病密切相关,有望成为某些疾病理想的生物标记物和药物靶点;而非哺乳动物中的CRISP家族成员则主要存在于腺体的分泌液中,能够阻断Na+、K+、Ca2+及环核苷酸门控通道,并与炎症反应密切相关。近来,作者所在实验室从低等无颌类脊椎动物七鳃鳗的口腔腺中分离纯化出富含半胱氨酸分泌蛋白,其与CRISP家族成员具有较高的同源性。该文针对CRISP家族成员生物学功能的最新进展做了分析归纳,并指出了相关研究的发展趋势。

小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1DNA疫苗免疫避孕效果的评价

目的:观察小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1(Crisp-1)DNA避孕疫苗免疫雌、雄性BALB/c小鼠后特异性抗体的表达及免疫避孕效果。方法:将雌、雄性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组雌鼠12只,雄鼠8只。每只动物经肌肉接种重组质粒pcDNA3.1-Crisp-1或pcDNA3.1空载体3次,ELISA测定小鼠血清中抗Crisp-1抗体水平的变化,Western blotting检测抗体的特异性。免疫结束后2周,将实验小鼠分别与未接种的正常雌、雄性小鼠合笼,记录每组雌鼠的妊娠率与每窝产仔数。结果:重组质粒pcDNA 3.1-Crisp-1可以在小鼠体内诱发特异性抗Crisp-1免疫应答,免疫后雌、雄性小鼠妊娠率和平均每窝产仔数均显著降低(P<0.05)。结论:重组质粒pcDNA3.1-Crisp-1具有一定的抗生育潜能。

小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

目的:构建小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1(Crisp-1)真核表达载体,并观察其在COS-7细胞中的表达。方法:从小鼠附睾组织中提取总RNA,RT-PCR扩增Crisp-1基因开放阅读框(ORF),将目的基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1上,经脂质体介导转染COS-7细胞,并利用间接免疫荧光和RT-PCR检测其在COS-7细胞中的表达。结果:酶切电泳鉴定结果显示Crisp-1基因克隆入载体中,测序结果证实克隆的基因序列与基因库(GeneBank)中的Crisp-1序列相符。脂质体转染后,间接免疫荧光和RT-PCR结果均表明重组质粒pcDNA3.1-Crisp-1能在COS-7细胞中表达。结论:成功获得了能在COS-7细胞中表达的小鼠Crisp-1DNA疫苗的真核表达质粒pcDNA3.1-Crisp-1,为后续研究其生物学活性及免疫避孕效应奠定了基础。

小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1原核表达载体的构建与表达

目的构建小鼠附睾富含半胱氨酸分泌蛋白-1（Crisp—1）基因的原核表达载体并在大肠杆菌中的表达。方法从小鼠附睾组织中提取总RNA，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）扩增实验所需的Crisp-1基因片段，将目的基因克隆至原核表达载体pET28a（＋）上，酶切和测序鉴定后，转化大肠杆菌ER2566，经IIYFG诱导表达，表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和免疫印迹法鉴定。结果重组表达质粒pET28a（＋）-Crispl经双酶切后，得到2条大小分别为5369bp和660bp的片段，测序结果证实克隆的基因序列与GeneBank中的Crisp-1序列相符。重组体转化大肠杆菌ER2566后，经IPTG诱导，可表达分子质量（Mr）为30×10^3的重组蛋门，与预期值相一致。IPTG诱导4h重组蛋白的表达量最高。SDS—PAGE电泳显示表达蛋白主要以包涵体形式存在于胞质中。包涵体经纯化和复性后，Western blot实验表明所获得的重组蛋白具有较好的抗原活性。结论成功构建重组蛋白Crisp-1，为进一步研究Crisp—1的功能奠定基础。