富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在肿瘤中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)是肿瘤微环境中重要的基质成分,它作为正常细胞恶变和肿瘤发生发展过程中一个重要的分子,能够调节多种肿瘤相关细胞因子及其受体的相互作用,并调节多种信号通路以及蛋白水解酶的表达水平。由于它抑制和促进肿瘤进展的能力取决于细胞类型、肿瘤分期等,因此在多种类型的肿瘤中差异表达,并可能成为肿瘤早期诊断的新型生物标记物以及治疗的新靶点。本文就近年来SPARC在肿瘤研究中的进展作一综述。

微小核糖核酸-451a在人参养荣汤治疗鼻咽癌放射性黏膜损伤中的机制研究

目的:通过检测微小核糖核酸-451a(miR-451a)和富含半胱氨酸的分泌性酸性蛋白(SPARC)mRNA的表达,推断人参养荣汤治疗鼻咽癌(NPC)放射性黏膜损伤的疗效及作用机制。方法:选择2022年3月—2023年5月收治的鼻咽癌放射性口腔黏膜损伤患者30例作为观察组,选择同期健康者30例作为对照组。采用辨证论治拟人参养荣汤加减治疗,比较观察组治疗前后患者中医症候积分量表和口干程度、口咽疼痛程度、黏膜损伤程度。检测治疗前后患者血清miR-451a和SPARC mRNA表达水平。结果:人参养荣汤可以有效降低患者主症和次症严重程度、Ⅲ级和Ⅳ级口腔黏膜损伤程度、口咽疼痛程度以及口干程度,使患者血清中miR-451a表达下降,促进SPARC mRNA蛋白翻译增强(P<0.05)。治疗前后,miR-451a与中医症候积分均呈正相关(P<0.05)。结论:人参养荣汤对鼻咽癌放射性黏膜损伤具有一定的临床疗效,可降低miR-451a表达水平,升高SPARC mRNA表达水平;miR-451a抑制了SPARC mRNA的翻译,可为将来的中西医结合治疗提供理论依据。

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在心血管疾病中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)为典型的基质细胞蛋白,参与组织发育和修复,通过调节细胞黏附、增殖和生长因子信号转导,以及细胞外基质与细胞的相互作用,在心肌损伤过程发挥重要作用。该文介绍SPARC在高血压、冠状动脉粥样硬化性心脏病、心力衰竭、病毒性心肌炎等心血管疾病中的相关研究进展。

二甲双胍对2型糖尿病患者血清富含半胱氨酸酸性分泌蛋白水平的影响

目的探讨2型糖尿病患者血清富含半胱氨酸酸性分泌蛋白(SPARC)水平及二甲双胍对其水平的影响。方法初发2型糖尿病患者78例随机分为二甲双胍治疗组(40例)和运动饮食控制组(38例),53例年龄匹配的正常体检者为对照组。二甲双胍治疗组给予盐酸二甲双胍肠溶片500 mg/次,3次/d,治疗16 w,运动饮食控制组参照《中国2型糖尿病防治指南/2010年版》进行生活方式干预16 w。比较各组干预前后的体重、体重指数(BMI)、血脂及胰岛素抵抗相关指标,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清SPARC浓度并比较不同干预前后的水平变化。结果二甲双胍治疗组、运动饮食控制组血清SPARC水平均显著高于对照组(P<0.05)。二甲双胍治疗组、运动饮食控制均能引起血清SPARC水平下降,与治疗前差异均有统计学意义(P<0.05),但二甲双胍治疗组降低血清SPARC幅度与运动饮食控制组比较差异无统计学意义(t=1.907,P>0.05)。结论 T2DM患者空腹血清SPARC水平较正常人增高。二甲双胍降低了血清SPARC水平,其作用与饮食及运动治疗相当。

富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白在IgA肾病患者血、尿中的含量及肾组织中的表达

目的:测定富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(SPARC)在IgA肾病患者血液、尿液中的浓度,并观察其在肾组织中的分布和表达。方法:采用夹心ELISA法对IgA肾病患者和正常人血清和尿液中SPARC、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)进行定量检测;应用夹心ELISA法检测IL-6处理后的人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞(HKC)SPARC蛋白的分泌水平;运用免疫组织化学SP法检测SPARC在IgA肾病患者及正常人肾组织中的表达及分布。结果:IgA肾病患者血液及尿液SPARC、TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均显著高于正常对照组(P<0.01或P<0.05);IgA肾病患者尿液SPARC浓度显著高于血液浓度(P<0.01)。IL-6(50 pg/ml)分别作用HMC、HKC 96 h后,SPARC蛋白的表达量明显高于对照组(P<0.01),而且HKC组SPARC蛋白的表达量明显高于HMC组(P<0.01)。在正常肾组织中,SPARC在远端小管细胞仅有极微弱表达,在IgA肾病肾组织小管上皮细胞中SPARC蛋白表达较正常肾组织肾小管细胞明显增强。结论:IgA肾病时,增多的炎症因子可刺激肾小管细胞产生和分泌SPARC蛋白增加,引起血清SPARC浓度升高,可能起到一种保护性反馈抑制系膜细胞增殖的作用。

富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白2.1肽段对体外培养人系膜细胞超微结构及其分泌细胞外基质的影响

目的:观察富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白(SPARC)2.1肽段对体外培养人肾小球系膜细胞(HMC)超微结构及其分泌细胞外基质的影响。方法:50μg/mlSPARC2.1肽段作用48h、96h后,倒置显微镜下观察HMC形态变化,透射电镜观察其超微结构,以正常培养的HMC作空白对照组。荧光定量RT-PCR法检测空白对照组和50μg/mlSPARC2.1肽段作用96h后HMC分泌细胞外基质[Ⅰ型和Ⅳ型胶原(ColⅠ、ColⅣ)、层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)]相关基因mRNA表达的变化;ELISA法比较两组HMC培养上清中细胞外基质(ColⅠ、ColⅣ、LN、FN)的蛋白含量。结果:空白对照组HMC无明显变化;50μg/mlSPARC2.1肽段作用48h电镜可见少数HMC发生凋亡早期改变;96h可见较多细胞发生典型凋亡改变,电镜下可见典型的凋亡小体。与空白对照组相比,SPARC2.1肽段作用96h后,HMC的ColⅠ、ColⅣ、FNmRNA和蛋白含量显著下调(P<0.01,P<0.05),LNmRNA及其蛋白含量无明显变化。结论:SPARC2.1肽段可在体外诱导HMC细胞的凋亡,超微结构可见典型凋亡小体,并抑制其分泌细胞外基质。

原发性高血压老年患者血清富含半胱氨酸酸性分泌蛋白、DFR、半乳糖凝集素-3与颈动脉粥样硬化的相关性分析

目的研究原发性高血压老年患者血清富含半胱氨酸酸性分泌蛋白(SPARC)、D-二聚体与纤维蛋白原之比(DFR)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)与颈动脉粥样硬化的关系。方法将2019年8月—2020年8月于河北医科大学第二医院收治的原发性高血压患者132例设为观察组,将同期健康体检合格者90例设为对照组,检测并比较2组血清SPARC、DFR和Gal-3水平,比较高血压分级及颈动脉粥样硬化分级不同患者的血清SPARC、DFR和Gal-3水平,领动脉内膜中层厚度(CIMT)及斑块面积,分析血清SPARC、DFR与Gal-3水平与高血压分级及颈动脉粥样硬化分级的相关性。结果观察组SPARC、D-二聚体、纤维蛋白原、DFR和Gal-3检测值均显著高于对照组(P<0.05);IMT、斑块面积及血清SPARC、DFR和Gal-3水平均随着高血压分级的增高而上升(P<0.05);颈动脉粥样硬化分级中,2~3级患者血清SPARC、DFR和Gal-3水平均显著高于0~1级患者(P<0.05);相关性分析提示,血清SPARC、DFR、Gal-3水平与高血压分级及颈动脉粥样硬化分级均呈正相关(P<0.05)。结论SPARC、DFR和Gal-3在原发性高血压老年患者血清中呈高表达水平,并与颈动脉粥样硬化关系密切。

酸性富含半胱氨酸分泌型蛋白的表达与食管鳞状细胞癌患者临床特征的关系

目的:观察食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中酸性富含半胱氨酸分泌型蛋白(secreted protein acidicand rich in cysteine,SPARC)的表达与患者临床特征的关联.方法:收集90例诊断为ESCC患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用免疫组织化学检测肿瘤组织及癌旁组织中SPARC的表达,并探讨其表达与食管癌患者临床特征的关系.结果:肿瘤组织中有73例SPARC表达阳性,阳性率81.11%,癌旁组织中SPARC表达均为阴性.肿瘤组织与癌旁组织SPARC表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05).72.22%(65例)SPARC阳性表达均位于细胞间质,少量(8.89%,8例)位于细胞质.肿瘤组织中SPARC表达与肿瘤分期、转移与否密切相关(P<0.05).结论:对ESCC患者进行SPARC检查,可以作为预测食管鳞癌分期、转移的重要指标.

白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的纯化与性质

利用硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sephacel离子交换层析从白色念珠菌WD27培养液中提纯得到一种蛋白酶,纯化倍数为25.4,收率为5.2％。其活性可被抑胃肽特异抑制,初步鉴定该酶为天冬氨酸蛋白酶。该酶在酸性范围内有水解蛋白活性,最适作用pH为4.0,最适温度为37℃。酶在pH5.0～6.0、45℃以下较稳定,该酶具有较广的底物作用范围,对牛血红蛋白最敏感。酶作用于牛血红蛋白的米氏常数Km为0.814mmol/L。

富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白在病理性瘢痕中的表达及其意义

目的观察富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(Secreted protein,acidic and rich in cysteine,SPARC)在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达规律及其意义。方法瘢痕患者的瘢痕疙瘩和3～12个月增生性瘢痕组织各26例;另取手术剩余的正常成人皮肤组织5例;所有标本用40 g/L甲醛固定,行连续切片,厚4μm,应用链菌素生物素-过氧化物酶标记物免疫组织染色法染色。同时设正常对照(正常皮肤)、阳性对照(胃癌癌变组织)、阴性对照(磷酸盐缓冲液代替一抗)。鼠抗人SPARC单克隆一抗浓度为1:200。结果正常成人皮肤中SPARC表达稀少,局限在真皮-表皮交界的乳头真皮,部分靠近基底膜血管和皮肤附件。SPARC在增生性瘢痕的真皮瘢痕组织、皮肤附件中低表达,且早期增生性瘢痕中表达无明显强于晚期增生性瘢痕(P>0.05)。在真皮中SPARC呈弥散性散在分布(同增生性瘢痕),阳性信号表达较低。增生性瘢痕及瘢痕疙瘩的SPARC较正常皮肤表达无差异(P>0.05)。结论SPARC在3～12个月增生性瘢痕中呈低表达,在瘢痕疙瘩中低表达。

白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶在口腔扁平苔藓患者唾液中的表达

研究白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)家族在扁平苔藓患者唾液中的表达,进而探讨白色念珠菌病与扁平苔藓的关系。选取白色念珠菌携带者、白色念珠菌病患者、携带白色念珠菌的扁平苔藓患者、伴有白色念珠菌病的扁平苔藓患者各20例,念珠菌培养阴性的扁平苔藓患者10例。从唾液标本中直接提取RNA,进行RT-PCR。白色念珠菌携带者唾液中有SAP2、SAP4-6、SAP7的不同表达,携带白色念珠菌的口腔扁平苔藓患者唾液中有SAP2、SAP4-6、SAP7、SAP8、SAP9的不同表达,所有携带者中均未表现SAP1、SAP3和SAP10的阳性扩增。白色念珠菌患病者及伴有白色念珠菌病的口腔扁平苔藓患者唾液中有SAP1-10的不同表达。念珠菌培养阴性的扁平苔藓患者均无SAP1-10的阳性扩增。SAP9与扁平苔藓密切相关。

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在喉癌和下咽癌间质组织中表达及功能

目的:通过研究富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)在喉癌及下咽癌的蛋白表达与相关功能,探讨SPARC对头颈鳞癌发展所起的作用。方法:免疫组织化学染色检测SPARC在51例肿瘤组织中的表达,观察外源性SPARC对体外细胞系生长及迁移的影响。结果:免疫组化染色显示SPARC在46.3%(19/41)喉癌及60.0%(6/10)下咽癌的间质组织表达下调,外源性SPARC抑制头颈鳞癌细胞株的增殖及迁移。结论:肿瘤间质SPARC表达下调促进了喉癌及下咽癌细胞的增殖。

脾虚大鼠壁细胞酸分泌机制的实验研究

目的:观察脾虚模型大鼠酸分泌的异常及补中益气汤对其的调节作用,探讨脾虚状态的酸分泌机制。方法:采用大黄脾虚模型,透射电镜观察离体壁细胞形态、双波长荧光分光光度计测定胃泌素刺激后壁细胞内[Ca2+]i变化及整体胃灌流实验。结果:电镜观察脾虚大鼠壁细胞分泌小管扩张,处于分泌状态;经胃泌素刺激后脾虚大鼠壁细胞内[Ca2+]i增高幅度明显高于正常组;胃灌流实验表明脾虚大鼠基础胃酸量显著低于正常组,而经组胺刺激后酸分泌增高幅度明显高于正常组,补中益气汤对其有调节作用。结论:脾虚大鼠存在酸分泌敏感性相对增高,胃黏膜易损性增强的反应。健脾益气方补中益气汤对其有一定的调节作用。

分泌型天冬氨酸蛋白酶-2的研究进展

分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)-2是真菌生存所需的毒力因子,可以诱导抗体产生,参与白色假丝酵母菌的多方面致病过程。本文就Sap-2的命名、结构、生物化学特性、表达、影响因子、致病机制和应用等研究进展作一综述。

枯草芽孢杆菌subtilis str.168双精氨酸途径分泌蛋白预测及功能分析

[目的]对枯草芽孢杆菌subtilis str.168双精氨酸转运途径(Tat)分泌蛋白进行预测和功能分析。[方法]从NCBI中选取枯草芽孢杆菌subtilis str.168基因组注释的蛋白质氨基酸序列,然后用Signal P 4.0、Lipo P、Tat P、TMHMM 2.0软件分析该基因组中双精氨酸途径的分泌蛋白,同时采用COG功能数据库对预测的分泌蛋白进行功能注释和聚类分析。[结果]通过分析发现108个有motif没有酶切位点的Tat信号肽蛋白、25个有酶切位点没有motif的Tat信号肽蛋白、124个既有酶切位点也有motif的Tat信号肽蛋白,其中105个蛋白归为Tat途径的分泌蛋白。[结论]对枯草芽孢杆菌Tat途径分泌蛋白的基因组预测和功能分析,将为分析该菌胞外蛋白的分泌机制打下基础。

白念珠菌分泌的天冬氨酸蛋白酶6诱导人单核细胞凋亡

目的检测白念珠菌分泌的天冬氨酸蛋白酶6(Sap6)对人类单核细胞系(THP-1细胞)增殖的影响,明确Sap6蛋白是否具有诱导单核细胞凋亡的活性。方法用XTT比色法检测25、50μg/ml Sap6对THP-1细胞增殖率的影响;在流式细胞仪下用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒检测25、50μg/ml Sap6诱导THP-1细胞凋亡情况;用Con A-FITC/DAPI双染法在荧光显微镜下观察Sap6作用于THP-1细胞的位置。结果与25μg/ml比较,50μg/ml Sap6蛋白显著抑制人THP-1细胞增殖率(P=0.0001),并提高THP-1细胞早期凋亡率(P=0.0001);Sap6蛋白进入THP-1细胞内,结合于细胞核。结论白念珠菌分泌的Sap6在体外能够进入人单核细胞内,诱导凋亡,从而抑制细胞增殖率。