酸性哺乳动物几丁质酶和嗜酸性粒细胞趋化因子mRNA在鼻息肉中的表达及意义

目的探讨酸性哺乳动物几丁质酶(AMCase)和嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin-1)mRNA在鼻息肉中的表达及意义。方法选取45例行鼻内窥镜手术治疗的鼻息肉患者的鼻息肉组织作研究对象(观察组),15例行下鼻甲部分切除术治疗的鼻中隔偏曲代偿性慢性肥厚性鼻炎患者的下鼻甲黏膜作研究对象(对照组)。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结合半定量分析方法检测和比较两组AMCase、eotaxin-1的表达水平。结果 AMCase和eotaxin-1在观察组和对照组中均有表达,AMCase在观察组和对照组中的mRNA表达比率为42.24±12.85和5.46±1.17,eotaxin-1为11.93±2.89和2.43±1.37,观察组表达水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 AMCase和eotaxin-1 mRNA表达水平与鼻息肉相关,可能能作为预后判断的参考指标。

酸性哺乳动物几丁质酶早期诊断职业性尘肺病价值

目的观察酸性哺乳动物几丁质酶(AMCase)在矽肺模型大鼠肺组织和尘肺病患者支气管肺泡灌洗液(BALF)、血清中的表达,评价AMCase对尘肺病早期诊断的价值。方法 (1)将无特定病原体级成年雄性Wistar大鼠随机分对照组和模型组,每组15只;模型组大鼠采用动式吸入染尘法,予质量浓度为2 000.0 mg/m^(3)的游离二氧化硅粉尘每天染尘3 h,对照组大鼠不予染尘处理;2组大鼠分别于染尘第4、12和24周各处死5只。(2)采用随机数表法,选择191例进行大容量肺灌洗的职业性尘肺病患者为尘肺病组,选择12例进行大容量肺灌洗的粉尘作业人员为粉尘对照组,选择200名有粉尘作业史的健康煤矿工人为健康对照组。(3)采用蛋白免疫印迹法检测大鼠肺组织中AMCase、Ⅰ型胶原(COLⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)相对表达水平和人BALF中AMCase相对表达水平;采用酶联免疫法检测人血清AMCase水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清AMCase蛋白水平对于尘肺病的早期诊断价值。结果模型组大鼠肺组织AMCase、COLⅠ和α-SMA蛋白相对表达水均高于对照组(P值均<0.01)。尘肺病组和尘肺病壹期、贰期、叁期亚组人群BALF中AMCase蛋白相对表达水平均高于粉尘对照组(P值均<0.05),血清AMCase蛋白水平均高于健康对照组(P值均<0.05)。ROC曲线分析结果显示:采用血清AMCase蛋白水平预测尘肺病的ROC曲线下面积为0.78(95%可信区间为0.74~0.82);当血清AMCase蛋白水平截断值为466.0 ng/L时,灵敏性为73.8%,特异性为72.6%。结论血清AMCase蛋白对于尘肺病早期诊断具有一定价值,可能是潜在的尘肺病早期诊断生物标志物。

酸性哺乳动物几丁质酶的研究进展

酸性哺乳动物几丁质酶是食用燕窝中普遍且大量存在的活性蛋白质之一,是哺乳动物中常见的几丁质酶,能够在酸性环境下保持活性并水解几丁质。酸性哺乳动物几丁质酶主要在人体的呼吸系统和消化系统中表达,且在多种病理机制和免疫炎症中有调节作用。本文综述了酸性哺乳动物几丁质酶的理化性质与功能,包括其在人体各个系统和器官中发挥的多种作用及相关机制,以探究其对人类健康和疾病的影响。

小鼠AMCase基因突变体的cDNA克隆及序列分析

目的 克隆小鼠酸性哺乳动物几丁质酶（AMCase）,并进行序列分析。方法 从BALB/c小鼠胃组织中提取总RNA,逆转录成cDNA,运用PCR技术体外扩增获得AMCase基因，构建pMD18T／AMCase重组载体，测序后应用DNAMAN4.0软件与标准序列进行比较，并通过SignalP 3.0和TMHMM Serverv．2.0等服务器对等电点、氨基酸组成、信号肽和跨膜结构等特征进行分析。结果 所克隆基因共编码473个氨基酸,分子量为51．93kD。等电点为4．73。与AMCase同源性达99．57％，同属18家族的几丁质酶成员，由信号肽（氨基酸1～21）、催化区（氨基酸22～391）、铰链区（氨基酸392～425）和结合区（氨基酸426～473）组成。编码的蛋白质在催化区和铰链区分别发生了突变。292位氨基酸由Ala（丙氨酸）突变为Pro（脯氨酸），404位氨基酸由Thr（苏氨酸）突变为Ser（丝氨酸）。结论 所克隆的基因为AMCase的一个突变体。其相关生物学信息的明确,为今后运用分子生物学技术进一步深入研究其作用奠定了基础。

哮喘儿童支气管肺泡灌洗液中几丁质酶和真菌特异性抗体的检测水平及意义

目的探究哮喘患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中几丁质酶(AMcase)和真菌特异性抗体的表达及意义。方法收集2015年7月至2016年11月该院收治的96例支气管哮喘患儿作为研究对象,分为轻度组(54例)、中度组(26例)、重度组(16例),另选取30例支气管异物患儿作为对照组,收集BALF,对细胞进行计数、分类;酶联免疫法测定BALF上清液中特异性免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)含量;反转录PCR检测BALF中AMcase mRNA表达;Western blot检测BALF中AMcase蛋白表达。结果哮喘患儿中性粒细胞比例、巨噬细胞比例、嗜酸性粒细胞比例升高,淋巴细胞比例降低,青霉菌、曲霉菌、链铬孢、白色念珠菌中特异性IgE升高,IgA、IgG降低,BALF上清液AMcase升高,均与患儿病情程度有关(P<0.05)。结论 BALF中AMcase、真菌特异性IgE、IgA、IgG水平与患儿哮喘病情严重程度相关,可能参与哮喘病理过程。

大鼠变应性鼻炎鼻黏膜AMCase mRNA的表达

目的:研究变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜AMCase mRNA表达,探讨其与AR的关系。方法:30只SD大鼠,随机分为实验组和对照组。实验组20只,卵清白蛋白(OVA)隔日腹腔注射基础致敏2周,继之每日鼻腔局部激发1周,建立大鼠AR模型;对照组10只,生理盐水代替OVA进行实验。末次激发后根据鼻部症状累积评分评判AR造模是否成功,并取所有大鼠双侧鼻腔及中隔黏膜,常规苏木精-伊红染色病理明确AR诊断。提取鼻黏膜RNA,应用反转录合成cDNA,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测AMCase mRNA在大鼠AR鼻黏膜中的表达。结果:RT-PCR检测AMCase mRNA表达,显示实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.05);2AR组AMCase mRNA表达同鼻部症状评分正相关(r=0.411,P<0.05)。结论:大鼠AR鼻黏膜AMCase mRNA表达量增多,提示AMCase表达上调在变应性鼻炎的发病机制中起作用,抑制该酶活性可以成为AR治疗新的靶点。