大麦醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的探索

以栽培大麦和中国近缘野生大麦为材料 ,用复合提取剂 (内含 2 5 % 2 -氯乙醇和 1 % 2 -巯基乙醇 )对其种子醇溶蛋白过夜提取后制备的样本液 ,在保持凝胶浓度 ( 1 8% )不变的基础上 ,通过改变交联度 ,催化剂用量 ,进样量以及电场强度和电泳时间所获得的不同电泳图谱 ,经比较分析可知 ,在酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系中 ,交联度为 3 .3 3 % ,催化剂 ( 0 .6%H2 O2 )用量在 2 6μL～ 3 0 μL之间 ,进样量控制在 5 μL～ 1 0 μL之间 ,室温下 5 0 0V稳压电泳 90min左右对醇溶蛋白分离效果好 ,电泳图谱清晰 ,分辨率高。实验结果亦表明 ,适当提高交联度和H2 O2 用量 ,有助于增加凝胶硬度 ,加快凝胶聚合速度 。

不同环境和时期印度小麦品种麦醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳带型分析

为了研究印度小麦品种的麦醇溶蛋白带型和遗传多样性，本试验采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，分析了印度近50年来培育的159个小麦品种麦醇溶蛋白带型。研究结果表明品种的麦醇溶蛋白带型存在广泛的多态性（遗传多样性指数（H）=0．875）。共鉴定出147条带型，其中ω麦醇溶蛋白区域有45条不同的带型；γ麦醇溶蛋白区域有42条；β麦醇溶蛋白区域有30条;

酸性天然凝胶电泳法研究HIV进入抑制剂ADS-J1的作用机制

目的ADS-J1是通过虚拟筛选从20000个化合物中获得的靶向HIVgp41的小分子HIV进入抑制剂。该研究探讨ADS-J1与gp41的结合位点和作用机制。方法采用酸性天然聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(AN-PAGE),研究ADS-J1与衍生于gp41不同功能区的多肽的结合。结果此前采用的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳(N-PAGE)等方法,由于不能显示衍生于gp41的N-端多肽,未能确定ADS-J1的作用位点。该研究建立的AN-PAGE技术,能直接显示N-端多肽的条带,证实ADS-J1能与gp41的N-端螺旋重复序列(NHR)复合螺旋核中的深穴结合,从而抑制gp41六螺旋束结构的形成,而且深穴中第574位的赖氨酸残基(K574)与ADS-J1的抑制作用密切相关。结论ADS-J1通过与gp41 NHR靶穴中的K574结合,抑制gp41六螺旋束结构的形成,从而抑制HIV进入靶细胞。此外,该研究建立的AN-PAGE技术,为研究靶向Ⅰ型包膜病毒的病毒进入抑制剂的作用机制提供了一个简便有效的实验方法。

大黄及其混伪品的种子蛋白电泳研究

利用A-PAGE技术对大黄及其混伪品的种子进行蛋白电泳分析。结果表明:除伪品大黄(河套大黄)未见有蛋白谱带外,正、混品大黄具有各自的鉴别谱带,且在谱带的级别、分布区域及数量上均有明显的区别。材料间平均遗传相似系数为0.522,变幅为0.294～0.706。聚类分析表明,药用大黄和掌叶大黄亲缘关系较唐古特大黄近,唐古特大黄种间遗传差异较明显。

L-乳酸菌酸菜发酵液中小肽类天然防腐剂的研究

对具有较长货架期的L-乳酸菌酸菜的发酵液进行浓缩和抑菌试验,验证L-乳酸菌酸菜发酵液中确实存在具有抑菌活性的非酸类物质;经酶解试验验证其具有蛋白质性质;经进一步分离提纯,获得抑菌物质的纯品;经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量,证明为肽类物质。

甘蓝型黄籽油菜种子酸性磷酸酯酶同工酶分析

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对黄籽油菜种子发育过程中籽粒的酸性磷酸酯酶同工酶进行分析。结果表明:种子发育过程中,不同黄籽油菜品系的酸性磷酸酯酶同工酶酶谱间存在明显差异,同一品系不同时期的酸性磷酸酯酶的活性随着油菜的发育先增长后下降。

酸胁迫对鼠伤寒沙门氏菌抗酸性、细胞膜及膜蛋白的影响

目的:以鼠伤寒沙门氏菌CGMCC 1.1190为对象,研究柠檬酸反复胁迫处理对其抗酸性、细胞膜及其膜蛋白的影响。方法:将CGMCC 1.1190分别在经柠檬酸调节到pH值为3.0、2.7、2.5的胰蛋白胨大豆肉汤培养基中胁迫处理并转接12次培养后,获得3株CGMCC 1.1190的抗酸性菌株,测定了这3株抗酸性菌株的D值、菌落形态、个体形态、膜通透性、膜流动性和膜蛋白的变化。结果:这3株抗酸性菌株的D值随着酸处理次数的增加不断增大,酸胁迫的pH值越低,D值越大,菌落形态与个体形态变化越明显;与原始对照菌株相比,当这3株抗酸性菌株置于pH 2.0的强酸环境下时,其碘化丙啶染色区域的死菌比例显著降低(P<0.05),表明酸胁迫pH值越低,这3株抗酸性菌株的细胞膜对H^(+)通透性越低;随着酸胁迫pH值的降低,CGMCC 1.1190抗酸性菌株细胞膜磷脂的熔点升高,表明细胞膜磷脂的相变温度升高,细胞膜流动性降低;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,这3株抗酸性菌株分子质量35~180 kDa范围内的细胞膜蛋白表达量增加,在135 kDa和180 kDa处均增加了特异条带。结论:随着酸胁迫pH值的降低,CGMCC 1.1190抗酸性增加,菌落变小,个体形态变长,细胞膜通透性和流动性均降低,部分膜蛋白表达量和表达种类增加,这些变化有利于其适应在酸胁迫环境下生长,提高生存能力。

燕麦种质资源醇溶蛋白遗传多样性研究

为了给燕麦种质资源的收集、保护以及利用提供信息,采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)对74份燕麦种质资源进行了醇溶蛋白遗传多样性分析。结果表明,供试燕麦醇溶蛋白位点存在丰富的等位变异,共检测到73种燕麦醇溶蛋白图谱。其醇溶蛋白带纹遗传相似系数为0.1667~1.000,平均遗传相似系数为0.4964。共分离出19种迁移率不同的醇溶蛋白带纹,醇溶蛋白的带纹多态性为100%。等位基因平均遗传多样性指数为0.5229,表明供试燕麦种质醇溶蛋白变异丰富,存在广泛的遗传多样性。基于燕麦醇溶蛋白聚类分析将74份材料分为6类,部分供试材料分类结果与其地理来源有关。

小麦-中间偃麦草二体异代换系山农0095的选育及其鉴定

利用小麦品种烟农15与中间偃麦草直接杂交,以烟农15为回交亲本对其杂种F1回交2次,再经自交3次,从BC2F4中选出种质系山农0095。利用形态学、细胞学、种子醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)、RAPD和GISH等方法对其进行鉴定。结果表明,山农0095平均株高78cm,穗长17.3cm,穗粒数74个,旗叶长36.3cm,旗叶宽3.03cm,茎秆粗壮,多花多实,繁茂性好;其根尖细胞染色体数目为2n=42,花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ(PMCMⅠ)染色体构型为2n=21Ⅱ;它与烟农15的杂种F1在减数分裂中期Ⅰ的大多数花粉母细胞能观察到2个单价体,平均染色体构型为2n=20.08Ⅱ+1.84Ⅰ。A-PAGE鉴定结果表明,山农0095在β区出现一条中间偃麦草的特异带;从180个RAPD引物中筛选出一个特异引物S186(5′-GATACCTCGG-3′),能够在山农0095中扩增出一条约900bp中间偃麦草的特异带,标记为S186900;以中间偃麦草基因组DNA为标记探针、中国春基因组DNA为封阻的原位杂交结果进一步表明,山农0095的42条染色体中含有2条完整的中间偃麦草染色体,是小麦-中间偃麦草的二体异代换系。

119份小麦种质资源醇溶蛋白遗传多样性分析

利用A—PAGE对119份小麦种质资源进行了醇溶蛋白遗传多样性分析。结果显示，共分离出蛋白带1938条，迁移率不同的谱带类型116种，其中编号为10和14的2种谱带出现频率最高，分别为54．62％和96．44％，其余114种谱带类型具有较强的多态性；每个种质材料的醇溶蛋白谱带数为10-24条，大部分为13～19条；供试种质问遗传距离在0．24～0．83，平均为0．54；聚类分析将所测材料分为6大类，与种质资源所反映的系统关系类似，表明醇蛋白在一定程度上能反映种质问的亲缘关系。

鹤顶兰胚珠发育过程及受精前后同工酶的变化

通过光学显微镜观察发现:鹤顶兰[Phaius tankervilliae(Aiton)Bl.]授粉后10d胎座出现指状突起,20d形成胚珠原基,24d大孢子母细胞发生,30d功能大孢子形成,41d发育为成熟的八核胚囊,而后完成双受精发育成早期球形胚。用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法研究鹤顶兰从指状突起出现到早期球形胚形成的全过程中酯酶(Est)、酸性磷酸酶(Acp)的变化发现:这一过程中Est表达有7个同工酶位点,Acp有5个同工酶位点,两者均在八核胚囊时期变化最显著。Est-7和Acp-4在整个发育过程中都有表达;在八核胚囊时期特异表达的位点有Est-4和Acp-3;而Acp-2只在这一时期不表达。Est-1在八核胚囊时期和大孢子母细胞减数分裂中期表达。授粉后Est和Acp的酶位点变化说明与胚珠发育相关的一系列基因表达有时序性,位点Est-4、Acp-2和Acp-3是否直接参与了八核胚囊发育的控制,有待于进一步的研究。

小麦和黑麦品种醇溶蛋白的比较分析

为了分析普通小麦醇溶蛋白和黑麦醇溶蛋白的异同，运用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳法和反相高效液相色谱法对4个普通小麦品种和4个黑麦品种的醇溶蛋白进行了比较分析。在酸性电泳分析方法中，4个普通小麦品种共分离出16条迁移率不同的谱带，而4个黑麦品种共分离出10条谱带，每个品种在α、β、γ、ω四个区的分布频率也不相同。从谱带出现的频率和染色的深浅可明显看出普通小麦的醇溶蛋白含量远远大于黑麦品种。在反相高效液相色谱分析方法中，普通小麦分离出12～18个组分，黑麦品种分离出6～12个组分；普通小麦不同类型的醇溶蛋白出峰时间比较紧凑，而黑麦的出峰时间差异较大。反相高效液相色谱分析方法能很好地分离醇溶蛋白，且其更快速、简便、所需样品量少。

东北春麦区部分小麦品种资源遗传多样性研究

利用所收集的东北春麦区不同年代育成的73份小麦品种资源,以小麦醇溶蛋白为生化指纹,采用国际种子检验协会(ISTA)所推荐的小麦醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对73份小麦品种资源遗传多样性进行了研究和评价。结果表明:不同年代育成小麦品种醇溶蛋白电泳谱带分布频率和多态性差异较大,总的趋势是随着年代的推近,小麦醇溶蛋白多态性比率增加;小麦醇溶蛋白生化指纹聚类分析结果表明,东北春麦区小麦品种资源遗传变异较为丰富。将供试的东北春麦区小麦品种资源分为4个类群,各类群所包含的品种数目差异较大。

小麦1BL/1RS易位新品系的鉴定与评价

应用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A PAGE)技术,对利用1BL/1RS易位材料异源2号作为亲本创制的58个新品系进行了检测与分析。根据小麦—黑麦1BL/1RS标记位点Gld1B3的有无,鉴定出49个品系为易位系,只有9个品系为非易位系。对新品系的株高、有效穗数、小穗数、穗粒数、千粒重及穗粒重等6个性状进行了考察分析,结果表明部分易位系表现出一个或多个优良的性状,可供作为亲本材料在育种中进一步利用。少数易位系综合性状表现优异,可望进一步直接培育成新品种。对易位系性状间相关分析表明,小穗数与有效穗数、穗粒重与穗粒数和千粒重呈极显著正偏相关,千粒重与穗粒数、穗粒重与有效穗数呈显著或极显著负偏相关,其余性状间偏相关均不显著。经差异显著性检验表明,易位系与非易位系之间除小穗数外,其余考察性状表现均无显著差异。

小麦组织培养后代的醇溶蛋白和SSR位点的遗传变异

以酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(APAGE)和简单重复序列(SSR)标记分别检测40个通过组织培养获得单株收获的种子和23个再生植株的DNA,结果表明,5株‘98-1266’和2株‘80-8’在APAGE分析中出现位点缺失,迁移率增大,并出现新带。在34个小麦SSR位点中,WMS18、WMS264、WMS328、Xgdm67、Xgdm98等5个位点有变化。单株发生变化的是‘80-8’-8、‘川麦32’-1、‘川麦32’-7、‘川育12’-1、‘Y1496’-3和‘Y1496’-6。说明在组织培养过程中体细胞无性系变异广泛存在。APAGE技术和SSR标记均可用来检测这种变异。

9种小白菜种子的醇溶蛋白分析

利用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳对 9个小白菜品种种子醇溶蛋白进行了分析 ,结果显示 9个小白菜品种的蛋白质电泳图谱具有一定的差异。计算Jaccard系数建立距离矩阵 ,并通过邻接法进行聚类分析 ,得出正大抗热青 3号与其他品种的关系较远 ,而苏州青次之。

苏云金杆菌00-50-5发酵上清液对南方根结线虫杀虫活性研究

室内条件下,分别测定了苏云金杆菌Bt 00-50-5菌株液体和固体发酵物对南方根结线虫的毒力效果。结果显示,牛肉膏蛋白胨液体发酵法在72h所得上清液的毒性最高,南方根结线虫死亡率达到99.0%,而固体麸皮发酵物对线虫的最高毒性为发酵8h,南方根结线虫死亡率为89.0%。液体发酵上清液经葡聚糖凝胶G-75柱层析分离,柱下物在280nm处的吸收值呈现出4个峰I、II、III和IV,其值0.601,1.475,1.641和0.392,其中峰II、III、IV处收集的蛋白对南方根结线虫有毒杀作用,分子量最小的IV蛋白杀线虫活性最高。上清液天然聚丙烯酰胺凝胶电泳分离杀虫蛋白结果显示6条清晰蛋白带,其中37kDa蛋白含量最多。

山羊草Aegilops kotschyi及其供体种Ae.longissima和Ae.umbellulata的醇溶蛋白研究

采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(APAGE)法对11份Aegilops kotschyi及其S^1染色体组供体种Ae.longissima2份和U染色体组供体种Ae.umbellulata6份进行了醇溶蛋白位点的研究。结果表明:11份Ae.kotschyi共分离出32条带,31条具有多态性,占96.88％,每份材料可以分离出10～17条谱带,其中仅1条(3.12％)是共有带;11份Ae.kotschyi的遗传距离的变异范围在0～0.704之间,平均为0.409;11份Ae.kotschyi分离出的多数醇溶蛋白谱带均与其染色体组供体种Ae.longissi-ma及Ae.umbellulata相同,但仍有8条谱带未在两供体种中找到;11份Ae.kotschyi的醇溶蛋白多态性(96.88％)明显高于Ae.longissima(52.94％)与Ae.umbellulata(88.89％);11份Ae.kotschyi中有4份表现出了一定的特征带,分析知可能在γ区发生了较大的变异。

三河马蛋白酶抑制剂的遗传多态性

采用酸性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳对三河马蛋白酶抑制剂的多态性进行了检测。结果如下：在蛋白酶抑制剂位点共发现11种表型，由6个等位基因 PIG、 PII、 PIL、 PIN、 PIS和 PIU控制。基因型GL、IL、IN、IS、IU、LN、LS、LU、NS、SU和LL的频率分别为0．04，0．04，0．04，0．04，0．12，0．08，0．16，0．08，0．04，0．04和0．32，其中纯合型LL为优势基因型。等位基因PIG、 PII、 PIL、 PIN、 PIS和 PIU的频率分别为0．020， 0．120， 0．520， 0．080， 0．140和0．120。单位点基因杂合度（H）、个体鉴别概率（Dp）和亲仔关系排除概率（PE）分别为 0．674、 0．835和0．369。

基于相对迁移率的节节麦醇溶蛋白组成分析

为准确揭示节节麦醇溶蛋白的组成情况,对不同地理分布的212份节节麦的种子蛋白进行酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)分析。由于麦醇溶蛋白现有的"数字字母命名"系统并不具备广泛的普适性,将普通小麦--‘中国春’(对照)第1条谱带的迁移率作为标准,其他供试材料的谱带与它的比值作为相对迁移率来确定每条醇溶蛋白条带的位置。结果显示,212份节节麦材料中共存在422种不同迁移率的谱带。所有条带可分为ω、γ、β和α4个区,α区的多态性条带最多,达34.70%。多态性条带品种间遗传相似系数(GS)的变幅为0~0.58,遗传变异较大。聚类分析结果表明,节节麦可能是以伊朗为中心向四周各地扩散传播。中国境内的节节麦至少存在3种类型。基于相对迁移率的表示方法,无需除‘中国春’以外的其他对照材料,即可有效区分A-PAGE胶上距离较近的蛋白条带,为不同麦类作物醇溶蛋白的研究提供统一标准。