酸性鞘磷脂酶在瘦素抵抗调控中的应用

瘦素是脂肪细胞分泌的一种激素,在食物摄取和维持体重中具有重要作用,对能量摄入具有负反馈调节作用。目前,已知大多数饮食诱导的肥胖(DIO)个体与瘦素抵抗相关,表现为瘦素敏感性降低和高瘦素血症。酸性鞘磷脂酶(ASM)是催化鞘磷脂水解成神经酰胺的关键酶,在多种疾病的发展中起着关键作用。迄今为止,虽然已有各种研究来解释ASM对各种疾病的致病机制,但是人们对ASM和瘦素抵抗的关系知之甚少。因此,探讨ASM和瘦素抵抗之间的关系可能为瘦素抵抗和瘦素抵抗相关疾病的治疗提供新的策略。

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2的分离纯化和性质研究

目的 :广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶 A2 的分离纯化和性质研究。方法 :分离纯化采用 Sephadex G- 75 ,CM- Sepharose CL -6 B和 DEAE- Sephadex A- 5 0柱层析法 ;通过电泳 ,磷脂酶 A2 活力测定 ,氨基酸组成测定 ,N端序列分析及药理实验进行性质研究。结果 :从广西眼镜王蛇毒中分离到一种酸性的磷脂酶 A2 (命名为 APL A2 - 1) ,相对分子质量为 146 0 0 u,等电点 5 .4,酶的比活力为 10 8μmol/ m g· min- 1 ,N端序列为 NL IQFGNMIQCTVPGF。它对实验用小白鼠有致死性 (L D5 0 6 .6 m g/ kg) ,具有肌毒性 ,心脏毒性 ,抗血小板聚集活性 ,能诱导水肿形成。结论 :APL A2 - 1生化和药理性质的研究 ,为阐明蛇毒 PL A2结构和功能关系 ,及蛇伤中毒机制 ,打下了良好基础。

银杏达莫联合阿司匹林治疗急性脑梗死及对血浆溶血磷脂酸和酸性磷脂水平的影响

目的:探讨银杏达莫联合阿司匹林治疗急性脑梗死患者对血浆溶血磷脂酸(LPA)和酸性磷脂(AP)水平的影响及临床疗效。方法:将114例急性脑梗死患者随机分为银杏达莫、阿司匹林联合治疗组(59例)和阿司匹林组(55例),分别于治疗前后测定患者血浆LPA和AP水平并与健康对照组比较,采用神经功能缺损程度(NDS)及Banhel指数(BI)评分标准进行神经功能转归评价。结果:急性脑梗死患者治疗前血浆LPA和AP水平显著高于健康对照组(P<0.01),治疗后两组血浆LPA和AP水平均明显降低,并且联合治疗组显著降低,与阿司匹林组比较有统计学差异(P<0.05);联合治疗组NDS和BI评分与阿司匹林组比较有统计学差异(P<0.05)。结论:银杏达莫联合阿司匹林治疗可显著降低急性脑梗死患者LPA和AP水平,促进神经功能恢复。

眼镜王蛇毒中酸性磷脂酶A_2对三氯化铁诱导的大鼠动脉血栓形成的抑制作用

目的 研究眼镜王蛇毒中酸性磷脂酶A2 组分Ⅰ (命名为APLA2 Ⅰ)抑制动脉血栓形成的能力 ,观察将其开发成抗血栓药物的可能性。方法 模型组大鼠舌下ivPBS,3组APLA2 Ⅰ预治疗组大鼠分别舌下ivAPLA2 Ⅰ 1 .0 ,0 .5和 0 .1mg·kg-1 。各组给药 30min后 ,用 40 %FeCl3 诱导大鼠腹主动脉血栓形成 ,监测远端腹主动脉压 ,记录最低腹主动脉压和血栓形成时间 ,测量血栓面积及血栓重量。采用大鼠体外血浆凝块回缩实验观察APLA2 Ⅰ对血浆凝块回缩的影响。用小鼠尾动脉出血实验观察APLA2 Ⅰ对出血时间的影响。结果 预ivAPLA2 Ⅰ 1 .0 ,0 .5及 0 .1mg·kg-1 可抑制FeCl3 诱导的大鼠血栓形成后的腹主动脉压下降 ,使最低腹主动脉压从(4.0± 0 .5)kPa(模型组 )分别增高至 (7.7± 1 .0 ) ,(6 .8±0 .8)和 (5 .4± 0 .7)kPa ;使血栓形成时间从(31±4)min(模型组 )分别延长至 (60± 7) ,(53± 5)和(49± 6)min;使血栓面积从 (1 0 62± 1 39) μm2 (模型组 )分别减少至 (72 4± 74) ,(785± 96)和 (91 0±1 2 6) μm2 ;使 0 .5cm长血管内血栓重量从 (5 .2±0 .6)mg(模型组 )分别减少至 (3 .5± 0 .5) ,(3 .8±0 .5)和 (4.6± 0 .6)mg(P <0 .0 5 ,n =1 0 )。体外实验显示APLA2 Ⅰ能剂量依赖性地抑制大鼠血浆凝块回缩?

尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2Ⅱ的表达及其生化特征

将尖吻蝮蛇毒酸性磷酯酶 A2 ( A.a APLA2 )基因克隆至温敏表达载体 p BLMVL2 ,在大肠杆菌 RR1中成功诱导表达 .表达产物 A.a APLA2 约占细菌蛋白质总量 2 5 % ,并以包涵体形式存在 .纯化包涵体后 ,将产物变性、复性 ,然后用 FPLC Superose TM1 2纯化 ,产物经过 SDS- PAGE检测只有单一条带 .对纯化后的表达 A.a APLA2 进行了酶活性、抑制血小板聚集活性和溶血活性的测定 .结果显示 ,A.a APLA2 的酶活性处于变性后复性江浙蝮蛇酸性磷脂酶 A2 和碱性磷脂酶A2 的酶活性之间 ,没有抑制血小板聚集活性 ,只有微弱溶血活性 .最后对 PLA2

奥扎格雷钠联合阿司匹林对急性脑梗死患者血浆溶血磷脂酸和酸性磷脂水平的影响及意义

目的探讨奥扎格雷钠联合阿司匹林对急性脑梗死患者血浆溶血磷脂酸(LPA)和酸性磷脂(AP)水平的影响及临床疗效。方法将131例脑梗死患者随机分为奥扎格雷钠组(66例)和阿司匹林组(65例),两组均给予拜阿司匹灵、丹参注射液治疗,奥扎格雷钠组加用奥扎格雷钠治疗1个疗程(15d)。分别于治疗前后测定患者血浆LPA和AP水平并与健康对照组比较。应用中国脑卒中量表(CSS)进行神经功能转归评价。结果急性脑梗死患者治疗前血浆LPA和AP水平显著高于健康对照组(P<0.01),治疗后奥扎格雷钠组与健康对照组比较差异无统计学意义,血浆LPA、AP水平及CSS评分均较阿司匹林组明显改善(分别为P<0.05,P<0.01)。结论奥扎格雷钠联合阿司匹林可显著降低急性脑梗死患者血浆LPA和AP水平,抑制血小板聚集,促进神经功能恢复。

血管紧张素II经酸性鞘磷脂酶/神经酰胺通路致动脉内皮功能障碍的作用

目的探讨酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASM)/神经酰胺(ceramide,Cer)通路在血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)致动脉内皮功能障碍中的作用和机制。方法针对对照组,低、中、高剂量AngⅡ组及ASM抑制剂地昔帕明(desipramine,Dpm)组,采用Western blot检测法、实时定量PCR和免疫荧光化学方法检测ASM、Cer、总内皮型一氧化氮合酶(total endothelial nitric oxide synthase,t-e NOS)和磷酸化e NOS(phosphorylated e NOS,p-e NOS)含量变化;采用血管环张力描记技术检测主动脉血管环的舒张功能;采用二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)荧光探针检测血管环超氧阴离子(superoxide anion,O_2^-·)水平。结果与对照组相比,AngⅡ孵育后主动脉对乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)的舒张反应显著降低(P<0.05),呈剂量依赖性,对硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)的舒张反应无明显改变;AngⅡ孵育组动脉ASM表达显著增加(P<0.05),Cer含量显著增多(P<0.05);ASM抑制剂Dpm可显著抑制AngⅡ所致ASM和Cer改变(P<0.05),亦可使动脉对Ach的舒张反应恢复正常;AngⅡ可显著降低动脉p-e NOS含量(P<0.05),增加O_2^-·水平(P<0.05),Dpm则可使p-e NOS增加(P<0.05),降低O_2^-·(P<0.05)。结论 ASM/Cer可能通过抑制e NOS磷酸化并增加O_2^-·含量介导AngⅡI所致动脉内皮功能障碍。

酸性鞘磷脂水解酶和MAPK信号通路在UVA诱导细胞凋亡中的作用

为了探讨酸性鞘磷脂水解酶 (ASM)和MAPK信号通路在UVA诱导的细胞凋亡中的作用 ,用DNA梯形条带 (DNAladder)和荧光显微镜鉴定细胞凋亡 ,Western印迹分析MAPK信号通路的激活情况 .结果显示 :①经UVA照射 ,正常的淋巴母细胞JY出现严重的细胞凋亡 ,而ASM遗传性缺陷的淋巴母细胞MS1 4 1 8出现轻微凋亡 ;给予ASM特异性抑制剂NB6 ,UVA诱导的JY细胞凋亡明显减轻 ,表明UVA诱导的细胞凋亡依赖于ASM .②UVA照射后 ,磷酸化ERK含量在MS1 4 1 8细胞中明显升高 ,在JY细胞中受到抑制 ;UVA照射前给予NB6 ,JY细胞中磷酸化ERK含量上升 ,表明ASM能抑制ERK的激活 .③UVA照射后 ,磷酸化JNK含量在MS1 4 1 8细胞中几乎没有变化 ,而在JY细胞中含量升高 ;UVA照射前给予NB6 ,JY细胞中磷酸化JNK含量没有明显升高 ,表明ASM激活JNK通路 .④NB6对UVA激活的p38MAPK信号通路没有影响 ,表明p38的激活与ASM关系不大 .研究表明 ,UVA诱导的细胞凋亡是通过激活ASM。

酸性鞘磷脂酶和心血管疾病的研究进展

酸性鞘磷脂酶是鞘脂类代谢的一种关键酶，它通过水解鞘磷脂生成神经酰胺进而生成神经鞘氨醇和鞘氨醇-1-磷酸等一系列生物活性脂。酸性鞘磷脂酶可分为溶酶体鞘磷脂酶和分泌型鞘磷脂酶两种，两者在体内的分布位置和结构均有差异，可以产生不同的生物学作用。过去10多年来，已有越来越多的证据表明酸性鞘磷脂酶在心血管疾病，特别是在动脉粥样硬化及心力衰竭的发生发展中起着重要作用。

百草枯所致小鼠肺纤维化时肺组织酸性鞘磷脂酶表达上调

目的:观察百草枯所致C57BL/6小鼠肺纤维化时肺组织酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASM)的表达变化,初步探讨ASM在百草枯所致肺纤维化发生发展中的潜在病理意义。方法:将20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和百草枯组,百草枯组动物腹腔注射20 mg/kg百草枯,对照组动物注射等体积生理盐水,单次注射百草枯21 d后麻醉动物进行支气管肺泡灌洗,取支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)检测灌洗液中细胞总数、总蛋白浓度,ELISA法检测BALF中IL-6和TNF-α水平;取肺组织,HE染色和Masson染色观察组织形态学变化和胶原沉积,TUNEL染色和Caspase-3活性检测细胞凋亡情况,DHE染色检测活性氧(reactive oxtgen species,ROS)水平,Real time PCR、免疫组织化学、Western Blot检测肺组织中ASM mRNA和蛋白表达。结果:用百草枯处理后,C57BL/6小鼠肺组织肺泡排列紊乱、部分肺泡出现塌陷、肺泡间隔增厚、炎性细胞浸润,肺组织中出现大量胶原沉积。与对照组相比,百草枯组小鼠BALF中细胞总数增多(P<0.01),总蛋白浓度增加(P<0.01),IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05);肺组织中TUNEL染色阳性细胞数增多(P<0.01),Caspase-3活性增加(P<0.05),ROS水平升高,ASM mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。结论:ASM可能参与百草枯所致肺纤维化的病理生理过程,其具体作用机制有待进一步研究证实。

酸性鞘磷脂酶在环境健康中的潜在作用(英文)

酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASM)是一种通过水解鞘磷脂产生酰胺的重要溶酶体酶。最近的调查结果显示,在酰胺诱导细胞凋亡的启动以及许多常见疾病(如心血管疾病,糖尿病,肺部疾病,神经系统疾病)的病理生理过程中,ASM都起着重要介导和调节作用。其他研究也表明,活性氧和活性氮的产生,以及环境和职业应激所致的炎症反应都可以激活ASM。ASM的激活会产生大量的酰胺,并引起细胞膜上的酰胺分布异常,这可能导致相应组织和器官(包括肺,肝,肾和神经系统)的损伤。本文综述ASM的基础生物学,重点讨论ASM在环境应激反应过程中的调控和作用。笔者认为ASM激活是环境健康中的一个重要因素,基于ASM的疗法对预防和治疗相应环境因素诱导的组织损伤可能有重要作用。

酸性鞘磷脂酶在非酒精性脂肪性肝病中的作用及应用前景

酸性鞘磷脂酶(ASMase)与多种肝脏疾病的发病机制相关。近年来研究发现,ASMase在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者及动物肝脏中表达增加,且可导致氧化应激、脂质沉积、脂毒性、炎性反应、纤维化等改变。此文综述了ASMase在NAFLD发病机制中的作用,并评价其在NAFLD的预测、诊断、靶向治疗以及预后判断方面的潜在应用价值。

酸性鞘磷脂酶活化在微波辐照致神经细胞凋亡中的作用研究

为阐明微波辐照致神经细胞酸性鞘磷脂酶(Acid Sphingomyelinase,ASM)活化的规律,揭示ASM活化在微波辐照致神经细胞凋亡中的作用,以原代培养神经元细胞,采用30W/cm2微波辐照10min,采用Hoechst 33342荧光染色观察细胞凋亡,以ASM活性测定试剂盒测定ASM活性,RT-PCR、western blot分别检测ASM基因和蛋白表达的变化。用ASM活性抑制剂米帕明预处理,观察微波辐照后神经细胞凋亡情况。研究发现,微波辐照引起海马神经元细胞发生凋亡,神经元ASM mRNA和蛋白表达上调,ASM酶活性增高,给予ASM活性抑制剂米帕明预处理后,可部分拮抗微波辐照引起的神经细胞凋亡率增加。结果提示,微波辐照引起神经细胞ASM活化及表达上升,ASM活化在微波辐照所致的神经细胞凋亡中起重要作用。

酸性鞘磷脂酶样磷酸二酯酶3b在足细胞损伤相关肾病中的研究进展

足细胞在维持肾小球滤过屏障的结构和功能方面发挥重要作用,足细胞损伤可导致临床蛋白尿的发生、肾小球硬化及肾功能损害。酸性鞘磷脂酶样磷酸二酯酶3b(SMPDL3b)是足细胞膜上与鞘磷脂代谢相关的糖基磷脂酰肌醇锚定酶,是足细胞功能的重要调节因子,可通过与可溶性尿激酶纤溶酶原激活物受体相互作用,影响整合素活性,导致足细胞表型转变;还与糖尿病肾病胰岛素受体信号通路密切相关,在多种蛋白尿相关性肾脏疾病发病机制中起重要作用。通过稳定体内SMPDL3b水平调控脂类代谢可能成为足细胞相关肾病定向治疗的新靶点。

微生物来源酸性鞘磷脂酶抑制剂NF-0265A的研究

目的筛选信号转导相关疾病中重要靶点-酸性鞘磷脂酶抑制剂。方法使用ODS柱色谱,制备TLC和SephadexLH-20色谱等方法进行化合物的分离纯化,利用紫外、质谱等理化分析以及核磁共振等分析方法进行结构解析,利用酸性和中性SMase的活性测定方法进行活性评价。结果从微生物代谢产物的菌种中,筛选得到一个活性化合物NF-0265A,其对酸性SMase的IC50为68.7μmol·L-1。对中性SMase的活性测定的结果表明,此物质在200μmol·L-1的浓度下未见抑制作用,此化合物的化学结构与TAN-1446A的甲醇加成物相同。结论NF-0265A为第一个微生物来源的酸性SMase特异性的抑制剂,该化合物在信号转导系统和免疫系统的活性尚未见报道。

慢性脑供血不足患者血浆酸性磷脂水平检测结果

目的探讨血浆酸性磷脂(acidic phosphatides,AP)对慢性脑供血不足(CCCI)的诊断价值。方法选择100例CCCI设为CCCI组,行血浆AP检测,并与95例健康体检者(对照组)进行对比。结果血浆AP异常CCCI组73例(73.0%),对照组13例(13.7%),两组AP异常检出率比较差异有统计学意义(P<0.05)。平均血浆AP CCCI组为(7.65±1.54)μmol/L,对照组为(4.12±1.02)μmol/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论血浆AP对CCCI有一定的诊断价值。

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2-1的表达

将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2 - 1(APLA2 - 1)基因克隆至表达载体pET2 8a(+) ,转化入大肠杆菌BL2 1,经过诱导 ,SDS -PAGE检测 ,重组质粒pET2 8a-APLA2 - 1在 18KD有一明显的表达条带 ,表达产物APLA2 - 1约占细菌总量 3 0 % ,并以包涵体的形式存在 ,将产物变复性后用SephadexG - 75纯化 ,产物经过SDS -PAGE检测只有单一条带 ,通过Western -blot检测 ,证实纯化产物是酸性磷脂酶A2 .对表达的APLA2 进行酶活性和药理活性的测定 .至此我们在大肠杆菌中表达了广西眼镜王蛇毒APLA2 ,这将为以后对PLA2 的结构与功能的研究打下了良好的基础 .

依达拉奉对脑梗死患者溶血磷脂酸、酸性磷脂酸水平的影响及疗效观察

目的:观察依达拉奉对急性脑梗死患者血清溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)、血浆酸性磷脂酸(acidity phosphatidic acid,AP)含量的影响及临床疗效。方法:选择急性脑梗死患者200例,随机分为依达拉奉治疗组(137例)和对照组(63例)。治疗组在对照组治疗的基础上,加用依达拉奉30mg静脉滴注,2次/d,共14d。分别于治疗前和治疗后1、2、3、7、14、21d取静脉血4mL测定AP、LPA水平,并在入院时、治疗7d、14d、1个月进行神经功能缺损(CSS)评定,并在3个月、半年进行日常生活能力量表(ADL)评定,了解依达拉奉的治疗效果。结果:对照组与依达拉奉组治疗14d后LPA、AP水平均较治疗前显著降低(P<0.01),CSS、ADL评分亦显著改善(P<0.05),与对照组相比,依达拉奉组上述指标改善更明显(P<0.01)。结论:依达拉奉能降低血清LPA、AP的水平,清除自由基,改善脑梗死的预后。

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2-1在不同载体的表达

目的构建广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(APLA2-1)在不同载体的重组表达质粒,在E.coli中表达APLA2-1并比较不同表达系统对APLA2-1的表达效果。方法将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(AP-LA2-1)基因克隆至表达载体pBLMVL2和pET28a(+),分别转化入大肠杆菌RR1和BL21,经过诱导表达,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)及Western blot观察重组蛋白表达情况。结果成功构建了重组质粒pBLMVL2-APLA2-1和pET28a-APLA2-1。pBLMVL2-APLA2-1在SDS-PAGE上没见明显表达带,在Western blot上可见一14 kD的表达带。pET28a-APLA2-1在SDS-PAGE上有一明显的18 kD表达条带,表达产物AP-LA2-1约占细菌总量30%,并以包涵体的形式存在。结论APLA2-1可在大肠杆菌中表达,pET28a(+)对APLA2-1的表达效果优于pBLMVL2。

酸性神经鞘磷脂酶的生物学特性及其功能

神经鞘磷脂酶(SMase)可水解鞘磷脂产生神经酰胺,在人体内发挥重要作用。酸性神经鞘磷脂酶(ASMase)作为SMase最重要的一个亚型,在辐射诱导细胞凋亡、调节肿瘤细胞生长、参与Fas信号系统传递等方面均可发挥重要作用。