快速酸性磷酸酶染色检测宫颈异常细胞的价值

0引言巴氏抹片和巴氏染色是子宫颈癌筛查的传统有效方法,但该方法敏感度较低,存在较高的假阴性率。近年来,Markovic等[1]报告用组织化学技术检测宫颈脱落细胞酸性磷酸酶,显示了比传统巴氏染色更高的敏感度和更低的假阴性率。为此,我们采用经改进的、

酸性磷酸酶染色特性及阳性细胞鉴别诊断

宫颈癌在现代女性所患恶性肿瘤中位居第二,如果宫颈癌能及早发现,它属于极易治愈的癌症之一。宫颈癌筛查目前被认为是控制宫颈癌发病的最有效手段,可以降低宫颈癌的发病率和死亡率。目前的宫颈癌筛查是采用薄层液基制片技术联合巴氏染色,受多因素影响,这种方法有一定的局限性。酸性磷酸酶检测是一种新近应用于子宫颈异常细胞筛查的化学染色及细胞学检测方法,其检测原理是宫颈异常细胞中酸性磷酸酶活力升高,利用化学染色方法在有酸性磷酸酶活性的细胞内形成红色沉淀。本文分析了酸性磷酸酶染色阳性细胞的特征以及与TCT-巴氏染色样本进行对比观察,提出酸性磷酸酶染色的细胞学诊断标准及报告方式。

PERK-eIF2α-ATF4信号通路参与调控磷酸三钙磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解

目的探讨蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核细胞起始因子2α(e IF2α)-活化转录因子4(ATF4)介导的内质网应激通路在磷酸三钙(TCP)磨损颗粒诱导假体周围骨溶解中的作用。方法取雄性ICR小鼠30只,随机分为3组:假手术组(sham,n=10)、TCP磨损颗粒组(模型组,n=10)和salubrinal干预组(SAL,n=10)。采用TCP磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解模型,于术后第2天颅顶局部注射SAL(1 mg/kg),每隔2 d 1次,持续干预2周。实验结束后处死动物取颅骨和外周血。Western blotting法检测TCP磨损颗粒植入部位周围骨组织中内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达水平及PERK-e IF2α-ATF4信号通路的活化情况;HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察SAL对假体周围骨溶解和破骨细胞形成的影响;Real-time PCR检测SAL对破骨细胞活化相关基因抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和c-fos的mRNA水平;ELISA法检测SAL对血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和前列腺素E2(PGE2)水平的影响。结果 TCP磨损颗粒可诱导假体周围骨组织发生内质网应激反应,同时激活PERK-e IF2α-ATF4信号通路,表现为TCP磨损颗粒组小鼠颅骨组织中内质网应激通路蛋白GRP78、CHOP和磷酸化PERK(pPERK)、磷酸化e IF2α(p-e IF2α)和ATF4蛋白表达均显著上调,而PERK和e IF2α蛋白明显下调(P<0.05);而颅顶局部注射e IF2α特异性抑制剂SAL可明显阻止TCP磨损颗粒诱导假体周围破骨细胞形成和骨溶解,减少TRAP、MMP-9和cathepsin K的mRNA水平(P<0.05);同时抑制TNF-α、PGE2和IL-1β等炎症因子的产生(P<0.05)。结论 PERK-e IF2α-ATF4介导的内质网应激通路参与调控TCP磨损颗粒诱导的小鼠颅骨溶解;抑制该信号通路可减轻TCP磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解和关节松动。

失神经支配对牙周组织中P物质及破骨细胞的影响

目的探讨切断大鼠下牙槽神经后,牙周组织中P物质的表达变化及其对破骨细胞的影响。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为6组,每组5只,分为正常组(0 d)和术后第3、7、14、21、28天组。在下颌孔处切断大鼠左侧下牙槽神经,分别在相应的观测时点取材,常规制备大鼠牙周组织石蜡切片,行免疫组织化学染色观察P物质的表达情况,同时行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞的分布,并对免疫组织化学染色的平均光密度值和破骨细胞计数进行统计分析。结果切断大鼠下牙槽神经后牙周组织中的P物质在第3天表现出明显的下降趋势,第7天达到最低值,第21天恢复到正常水平;破骨细胞的变化趋势与P物质的变化具有一致性。结论切断大鼠下牙槽神经后,牙周组织中P物质与破骨细胞的变化呈正相关。P物质可能具有刺激并调节破骨细胞分化的作用,参与牙槽骨的代谢。

抗RANKL多克隆抗体抑制T细胞介导的破骨细胞形成的体外研究

目的:探讨抗核因子-КB受体活化因子配体(RANKL)多克隆抗体对T细胞介导的破骨细胞形成的影响。方法:制备兔抗鼠RANKL多克隆抗体,使用不同浓度的抗体(1、5及10μg/mL),观察小鼠重组RANKL诱导的破骨细胞形成,显微镜下计数抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性多核细胞数/孔;体外分离、纯化、扩增大鼠的颈T淋巴细胞,给予不同浓度的兔抗鼠RANKL特异性抗体进行干预,取其上清和T细胞,分别与RAW264.7细胞共同培养,TRAP法测定T细胞介导的破骨细胞形成,显微镜下计数TRAP(+)多核细胞数/孔;ELISA测定细胞上清中的可溶性RANKL浓度(sRANKL,pg/mL)。实验结果采用SPSS11.5软件包进行统计学分析。结果:兔抗鼠RANKL抗体既可减少RANKL诱导的TRAP(+)多核细胞数,也可减少T细胞介导的TRAP(+)多核细胞数,5μg/mL及10μg/mL抗体组差异显著(P<0.05),且呈浓度依赖性;上清中检出sRANKL的浓度与不加抗体对照组相比明显降低,具有统计学意义(P<0.05)。结论:抗RANKL特异性抗体可通过减少sRANKL的表达水平,直接阻断RANKL与核因子-КB受体活化因子(RANK)的结合,降低T细胞介导的破骨样细胞吸收。

氨基多糖对RANKL诱导的RAW264.7向破骨细胞样细胞分化的抑制作用观察

目的探讨氨基多糖(GAGs)对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法采用RANKL单独诱导RAW264.7细胞(对照组),分别采用不同浓度肝素、高分子量透明质酸(HA)、硫酸软骨素(CS)C联合RANKL诱导RAW264.7分化(分别为肝素组、HA组、CSC组)。细胞培养第3、5、7、8天采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(TRAP)检测破骨细胞样细胞并计数;ELISA法检测第8天各组培养液上清中抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b)含量。结果与对照组比较,诱导第3、5、7、8天,破骨样细胞数均明显减少(P<0.05);其中肝素组随浓度的增大而减少(P<0.05)。第8天培养液中TRAP5b含量与细胞计数结果相符。结论氨基多糖对RANKL诱导下RAW264.7向破骨细胞样细胞的分化具有抑制作用;肝素的作用具有剂量依赖性。

内毒素性休克早期猕猴肾脏超微结构的改变及酶细胞化学观察

目的:探讨内毒素休克早期猕猴肾脏的损伤。方法:11只猕猴随机分成2组:对照组5只,静脉注射生理盐水;内毒素组6只,静脉注射LPS,剂量为2.8mg/kg。内毒素攻击后120min,处死动物,取肾脏标本采用光镜、电镜铅离子捕获法做超微结构碱性磷酸酶(ALPase)及酸性磷酸酶(ACPase)细胞化学检查。结果:组织学观察显示肾髓质、皮质结构完整,肾小球结构完好;透射电镜可见模型组肾小球血管内皮和足突细胞损伤、血液成分渗出;肾小管上皮细胞损伤。肾实质细胞内溶酶体破坏;电镜酶细胞化学可见:模型组酸性磷酸酶活性增强,溶酶体颗粒增多。肾小管上皮细胞碱性磷酸酶活性急剧增强,在细胞器内弥散分布。对照组无明显病变。结论:在猕猴内毒素性休克早期,溶酶体增多和损伤引起了肾小球和肾小管损伤。在此同时,肾脏实质细胞内中和内毒素的作用也增强。

糖尿病模型小鼠拔牙后对颌牙[牙合]向伸长过程中根周骨密度及相关因子的变化

背景:牙列缺失是常见的口腔疾病,若得不到及时有效的治疗,就会出现邻牙倾斜、对颌牙伸长等不良影响,造成牙合紊乱以及牙合干扰,严重影响后期修复。尤其是糖尿病患者牙列缺失后,对颌牙在牙合向伸长过程中,糖尿病对其有何影响?骨连接蛋白在此过程如何变化?目前尚不清楚。目的:通过建立糖尿病小鼠对颌牙牙合向伸长运动实验模型,研究糖尿病对小鼠牙齿牙合向伸长运动过程的影响。方法:向C57 BL/6J小鼠(购买于山西医科大学动物实验中心)腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,以腹腔注射柠檬酸钠缓冲液的小鼠为对照。取建模成功的糖尿病小鼠与对照组小鼠各30只,拔除右上颌3颗磨牙建立对颌牙牙合向伸长运动实验模型,术后0,3,6,9,12 d,取右侧下颌骨,利用Micro CT测量骨密度,抗酒石酸酸性磷酸酶染色计数破骨细胞数量,RT-qPCR检测骨连接蛋白基因的表达。实验方案经山西医科大学伦理委员会批准。结果与结论:①随着时间的延长,两组右侧下颌骨的骨密度逐渐增加,糖尿病组术后3,6,9,12 d的骨密度低于对照组(P<0.05);②随着时间的延长,两组右侧下颌骨的破骨细胞数量逐渐增多,糖尿病组术后3,6,9,12 d的破骨细胞数量少于对照组(P<0.05);③随着时间的延长,两组右侧下颌骨的骨连接蛋白基因表达量逐渐升高,糖尿病组术后0,3,6,9,12 d的骨连接蛋白基因表达量高于对照组(P<0.05);④结果表明,糖尿病可降低牙齿牙合向伸长运动过程中的骨改建能力并提高骨连接蛋白基因表达。

CaMKⅡγ在破骨细胞分化中的表达规律

目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ(CaMKⅡγ)在破骨细胞分化中的表达规律,以揭示其作用。方法:用50 ng/m L核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,于诱导后第0,1,3,5天收获细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评价破骨细胞生成情况,并用RT-PCR、Western印迹、免疫荧光细胞化学法检测CaMKⅡγm RNA和蛋白表达。结果:多核破骨细胞在诱导后第3天开始出现,第5天达到最多。分化第0,1,3,5天,CaMKⅡγm RNA相对表达水平分别为(1.067±0.179),(1.840±0.070),(9.493±0.453)和(30.767±0.573);蛋白相对表达水平分别为(0.454±0.065),(0.613±0.021),(0.858±0.019)和(0.980±0.023);除第1天的蛋白相对水平外,其他时间点CaMKⅡγm RNA和蛋白表达差异均有统计学意义,且呈时间依赖性增强(P<0.01)。免疫荧光细胞化学法检测也显示CaMKⅡγ蛋白表达在破骨细胞分化过程中逐步增加。结论:CaMKⅡγ表达随破骨细胞分化呈时间依赖性增加,提示其在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用。

尼曼—匹克氏病1例

患儿男,2岁,第二胎,进行性肝、脾肿大半年.父母非近亲结婚.第一胎,女,体健.家中无类似患者.体检:腹部膨隆,肝于右肋下约6cm,脾于肋下6cm.质中硬,心肺及神经系统未见异常,眼底正常.血:Hbl25g/L,RBC4.26×1012/L,WBC6.2X109/L,N:4.43 L0.87,胆红质14mmol/L,谷丙转氨酶50单位,谷草转氨酶95单位,血糖6.3mmol/L,HBsAg阴性。

大白鼠肾上腺髓质的神经细胞及皮质的末梢分布

平常观察大鼠肾上腺组织切片时,在髓质部分很难找到有神经节细胞,可是当我们在1953年春季用电刺激大白鼠,观察各器官的组织化学影响时,在酸性及碱性磷酸酶染色的肾上腺髓质内,发现有神经节细胞(图1,2)。虽然早在1894年Dogiel[1]氏已提到小鼠和大鼠的肾上腺髓质内有交感神经节细胞,不过数目极少.

破骨细胞骨吸收上清液对成骨活动影响的实验研究

目的研究破骨细胞骨吸收活动中的分泌产物对成骨细胞增殖、分化及成骨功能的影响，以了解活化的破骨细胞在体外对成骨细胞的影响。方法诱导小鼠RAW264．7细胞为破骨细胞，用抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase，TRAP）染色和破骨细胞特异性基因检测鉴定。破骨细胞与牛骨磨片共培养，甲苯胺蓝染色。收集共培养上清液作用于小鼠MC3T3-E1细胞，用甲基噻唑基四唑法（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法、酶联免疫吸附测定法、茜素红染色及反转录聚合酶链反应检测细胞的增殖、骨钙素水平、矿化及成骨特征基因的表达。结果TRAP染色、破骨细胞特异性基因检测及甲苯胺蓝染色表明RAW264．7细胞可分化为具有骨吸收能力的破骨细胞；破骨细胞骨吸收上清液作用后，MC3T3-E1细胞增殖受抑制（A值在0．062±0．004和0．405±0．033之间，P〈0．05）；骨钙素水平增高[第10天上清液组的骨钙素质量浓度为（2．965±0．047）ug/L]，钙化结节增多，碱性磷酸酶和Runt相关转录因子2的转录增强。结论RAW264．7破骨细胞骨吸收上清液具有抑制成骨样细胞增殖、促进分化和钙化成骨的作用。

小白菊内酯对核因子κB受体活化因子配体诱导的RAW264．7细胞向破骨细胞分化的影响

目的研究小白菊内酯对NF-κB受体活化因子配体（RANKL）诱导的RAW264．7细胞向破骨细胞分化的影响。方法以RANKL单独诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264．7细胞为对照组，分别采用不同浓度（0．5、1、2um01／L）Zb白菊内酯联合RANKL诱导RAW264．7细胞分化培养。第3、5、7天采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法检测破骨细胞样细胞并计数；ELISA法检测第7天各组培养液上清中抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP5b）含量；实时（RT）．PCR检测第7天各组破骨细胞标志基因降钙素受体（CTR）和MMP-9的表达。使用SPSS17．0统计学软件进行方差分析和t检验以比较组间差异。结果不同的培养条件下RANKL均能诱导RAW264．7细胞分化为成熟的破骨细胞。与同期对照组比较，诱导第3、5、7天，小白菊内酯各组破骨细胞数均明显减少；随小白菊内酯浓度的增大而破骨细胞数减少幅度更显著，0．5、1、2μmol／L各组第7天破骨细胞数较对照组分别下降为36．3％、40．8％、49．3％，细胞数差异有统计学意义（f=7．758，8．742，10．56；P〈0．05）。各组第7天培养液中TRAP5b含量变化与细胞计数结果相符（P〈0．05）。TRAP阳性破骨细胞的CTR、MMP-9表达量随着小白菊内酯浓度增加而减少，2μmol／L小白菊内酯组最低，与对照组比较小白菊内酯0．5、1、2μmol／L各组差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论小白菊内酯对RANKL诱导下RAW264．7细胞向破骨细胞的分化具有抑制作用，且抑制作用具有剂量依赖性．