酸性磷酸酶法在体外化疗药物筛选中的应用

化学治疗是肿瘤治疗的有效手段之一。为此，必需在体外筛选出对肿瘤细胞敏感的化疗药物并针对个体治疗为目的进行化疗药物的敏感试验。这些化疗药物敏感试验都需要一种行之有效的测定瘤细胞数的方法。常用的有３ＨＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ法［１，２］，以及结晶紫染色法等...

大鼠尺神经感觉纤维在脊髓胶状质的定位投射──酸性磷酸酶法研究

目的研究大鼠尺神经感觉纤维在脊髓胶状质的定位投射。方法按照跨神经节溃变的原理建立模型 ,采用酸性磷酸酶法观测。结果大鼠尺神经的感觉纤维在脊髓胶状质纵向投射 ,主要到脊髓C6中段至T1中段胶状质 ,其横向投射则均在胶状质中线以内 ,主要位于胶状质内侧半的外侧 1 /2 -3/4区域。结论尺神经投射居内 。

大鼠腋神经感觉纤维在脊髓胶状质的定位投射（酸性磷酸酶法研究）

本实验按照跨神经节渍变的原理，以酸性磷酸酶(ACP)法研究了大鼠腋神经感觉纤维在脊髓胶状质内的定位投射。大鼠腋神经感觉纤维纵向投射，主要至脊髓C6上段至C4下段肢状质；少数动物还投射至C6下段及T1上段．其横向投射均在肢状质中线以外，且主要位于肢状质外侧半的内和中1／3区域，部分动物的投射区占居肢状质外侧半的内侧／2范围．投射柱从上至下有向外扩展趋势。

大鼠尺神经一级传入纤维在脊髓胶状质定位投射的定量分析（FRAP法）

本实验按照跨神经节溃变的原理，用抗氟化物酸性磷酸酶（FRAP）法和显微测量，对大鼠尺神经一级传入纤维在脊髓胶状质（SG）的定位投射进行了定量分析。大鼠尺神经向SG的纵向投射主要为C6-T1，少数实验动物投向T2上中段。C6-T2各节段SG水平向“眉”长所测均值(mm)分别为0.995、0.996、0.918、0.783、0.642,而尺神经向C6-T2各节段SG水平向投射所测均值(mm)分别在0.354-0.556、0.333-0.542、0.214-0.515、0.144-0.319、0-0.223的范围，这主要显示了SG的中间区逐渐迁移至内侧区。

三氯乙烯诱发SD大鼠产生免疫反应的模型研究

目的 研究SD大鼠对三氯乙烯 (trichloroethylene ,TCE)免疫刺激的反应 ,拟建立大鼠对TCE免疫反应的模型。方法 背部皮内注射体积分数为 15 %的TCE免疫SD大鼠 ,1周 1次 ,免疫 5次后于大鼠左后足跖膜下注射TCE攻击 ,6h后称左右后足重量计算肿胀度。取TCE免疫大鼠心脏血 ,分离并培养单个核细胞。将培养的细胞与系列浓度的TCE共同培养 2d后 ,检测细胞酸性磷酸酶的活性 ,据此判断细胞的活化增殖程度。结果 TCE免疫大鼠攻击足肿胀度与空白对照组大鼠的相比差异显著 (P <0 0 0 5 )。体积分数为 3 %的TCE可使培养的大鼠血单个核细胞的增殖达到峰值。结论 重复皮内注射TCE ,可使SD大鼠产生某种免疫反应。SD大鼠的单个核细胞可被TCE刺激活化。

他莫昔芬对结肠癌细胞株生长的抑制作用

目的 研究他莫昔芬 (tamoxifen ,TMX)对结肠癌细胞株生长的抑制作用。方法 选用Caco 2和LoVo两种结肠癌细胞株 ,采用酸性磷酸酶法测定 1× 10 -4～ 1× 10 -9mol/LTMX并联合应用 5 氟尿嘧啶 (5 FU)时对细胞生长的抑制作用。以流式细胞仪测定细胞周期的改变及凋亡。结果 TMX对两种细胞株均有一定的抑制作用 ,且TMX对细胞生长抑制作用呈剂量依赖性。TMX +5 FU有协同作用 ,其作用较单药强。流式细胞仪检测表明与对照组相比 ,TMX组、5 FU组及联合用药组对细胞株均有不同程度的生长抑制作用。尤其是联合用药组 ,TMX可加强 5 FU的作用 ,强烈地诱导细胞凋亡 ,凋亡细胞比例为 33.2 6 % (LoVo细胞株 )和 4 5 .87% (Caco 2细胞株 )。结论 TMX可抑制结肠癌细胞株生长 ,并可加强 5 FU的作用。其机制可能是通过雌激素受体 (ER)

穿心莲内酯对人皮肤基底细胞癌A431细胞生长、凋亡及增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的探讨穿心莲内酯(AD)对人皮肤基底细胞癌A431细胞生长、凋亡及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响。方法应用酸性磷酸酶(APA)法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染法、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,Rh123染色FCM检测细胞线粒体膜电位,免疫细胞化学法检测细胞PCNA蛋白表达。结果 AD呈时间、剂量依赖性抑制A431细胞生长增殖;且同一时间点50mg/L、100mg/LAD组与溶媒对照组相比差异显著(P<0.05)。AD组作用A431细胞24h时,部分细胞核染色质出现典型凋亡形态学改变。不同浓度AD作用A431细胞24h,早期凋亡率、晚期凋亡及坏死率均随AD浓度升高而逐渐增加,且50mg/L、100mg/L AD组与溶媒对照组相比差异显著(P<0.05)。AD作用A431 24h细胞内PCNA蛋白随AD浓度升高表达逐渐减少。AD作用A431细胞24h后,线粒体膜电位下降明显,与溶媒对照组相比较,50mg/L、100mg/LAD组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AD可明显抑制A431细胞生长增殖,其抑制细胞增殖可能与下调PCNA蛋白表达有关。AD能诱导A431细胞凋亡,其凋亡机制可能与细胞线粒体膜电位下降有关。

薯蓣皂苷类化合物体外抗肿瘤作用的研究

目的探讨薯蓣皂苷类化合物的体外抗肿瘤作用。方法用酸性磷酸酶法分别检测五种薯蓣皂苷对人源性肝癌BEL-7404细胞株体外生长的抑制作用。结果五种薯蓣皂苷对所试肿瘤细胞株的体外生长皆有一定的抑制作用,尤其是薯蓣皂苷5对肝癌细胞的生长抑制作用较强,抑制率达到90%以上。结论体外实验表明五种薯蓣皂苷皆具有一定的抗肿瘤细胞生长作用,其中具有末端β-半乳糖基的薯蓣皂苷5抗肿瘤细胞毒活性最高。

紫花茄皂苷I-5对不同肿瘤细胞系的体外抗肿瘤作用

目的探讨紫花茄皂苷I-5对不同肿瘤细胞系的体外抗肿瘤作用。方法用酸性磷酸酶(APA)法检测紫花茄皂苷I-5对不同部位人源性肿瘤细胞株体外生长的抑制作用。结果紫花茄皂苷I-5对所试肿瘤细胞株的体外生长皆具有一定的抑制作用,尤其是对人肝癌BEL-7404、人鼻咽癌CNE和人结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用较强,抑制率可达到70%以上。结论体外实验表明紫花茄皂苷I-5对4种不同部位人源性肿瘤细胞株皆具有一定的抗肿瘤细胞生长作用,敏感细胞株为肝癌和结肠癌细胞。

培养板悬滴法三维细胞培养模型建立及细胞活力检测方法比较

目的采用普通48孔平底培养板结合悬滴培养法建立人结肠癌HT29细胞的三维培养模型,并通过比较选择适合三维培养的细胞活力检测方法。方法以237.5、316.4、421.8、562.5、750.0、1 000.0/μL、每孔10μL的接种量接种HT29细胞于48孔平底培养板底面形成液滴,倒置培养2 d形成细胞球,补充培养液后常规培养3 d,通过倒置显微镜测量细胞球体积;采用酸性磷酸酶法(APH)、MTT法及CCK-8法(直接测定及消化后测定)测定细胞活力,比较不同检测方法的优劣。结果 HT29细胞以237.5~1 000.0/μL、每孔10μL悬滴培养能形成较为规则的细胞球,237.5~750.0/μL细胞球体积与接种量呈良好的线性关系;APH法A值随细胞接种量增加而增大;MTT及CCK-8未经消化直接测定组A值随细胞接种量增大增加缓慢,消化后测定的A值-细胞接种量曲线与APH法相似,但细胞球消化操作复杂,且对细胞活力造成损伤。结论采用48孔培养板悬滴法建立三维细胞培养模型,并结合APH法进行细胞活力检测,经济、准确、便于操作。