酸性磷酸酶法在体外化疗药物筛选中的应用

化学治疗是肿瘤治疗的有效手段之一。为此，必需在体外筛选出对肿瘤细胞敏感的化疗药物并针对个体治疗为目的进行化疗药物的敏感试验。这些化疗药物敏感试验都需要一种行之有效的测定瘤细胞数的方法。常用的有３ＨＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ法［１，２］，以及结晶紫染色法等...

以DCAP-P为底物的酸性磷酸酶连续监测法的建立

目的 :建立以2,6 -二氯 -4 -乙酰基苯基磷酸盐(DCAP -P)为底物的一种新的酸性磷酸酶(ACP)的测定方法。方法 :在BTS -310半自动生化分析仪上研究连续监测法 ,建立实验参数。结果 :本法测定DCAP吸收峰为326nm ;ACP的Km=0.139mmol/L ;340nm时DCAP的摩尔消光系数为14440L/(mol×cm) ;缓冲液浓度0.1mol/L ,最适pH5.4 ,底物浓度2.0mmol/L ,延滞期60s,线性反应期15min ;线性范围为0～1188u/L ;血红蛋白(Hb)<115.62mg/L对测定结果无影响 ;黄疸对测定结果无影响 ;本法总ACP与PAP(前列腺酸磷酶 )的参考值范围分别为12.58～19.42u/L、2.52～9.04u/L。结论 :此方法重复性好 ,线性反应期长 ,线性范围广 ,干扰因素少 ,适用于自动生化分析。

大鼠尺神经感觉纤维在脊髓胶状质的定位投射──酸性磷酸酶法研究

目的研究大鼠尺神经感觉纤维在脊髓胶状质的定位投射。方法按照跨神经节溃变的原理建立模型 ,采用酸性磷酸酶法观测。结果大鼠尺神经的感觉纤维在脊髓胶状质纵向投射 ,主要到脊髓C6中段至T1中段胶状质 ,其横向投射则均在胶状质中线以内 ,主要位于胶状质内侧半的外侧 1 /2 -3/4区域。结论尺神经投射居内 。

大鼠腋神经感觉纤维在脊髓胶状质的定位投射（酸性磷酸酶法研究）

本实验按照跨神经节渍变的原理，以酸性磷酸酶(ACP)法研究了大鼠腋神经感觉纤维在脊髓胶状质内的定位投射。大鼠腋神经感觉纤维纵向投射，主要至脊髓C6上段至C4下段肢状质；少数动物还投射至C6下段及T1上段．其横向投射均在肢状质中线以外，且主要位于肢状质外侧半的内和中1／3区域，部分动物的投射区占居肢状质外侧半的内侧／2范围．投射柱从上至下有向外扩展趋势。

用快速蛋白液相层析（FPLC）法纯化文昌鱼酸性磷酸酶

从厦门文昌鱼体内提纯了一种酸性磷酸酶，用快速蛋白液相层析法（ＦＰＬＣ）的Ｓｕ－ｐｅｒｏｓｅ１２柱和ＭｏｎｏＳ柱对其进一步纯化，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＦＰＬＣ的Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２柱鉴定为单一纯的酶制剂．它的分子量为５２０００，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定该酶为二聚体．酶的提纯倍数为６１２．５２．

酸性磷酸酶在组织化学中的铈法显示法

介绍铈法在酸性磷酸酶活性电镜检查中的应用。

精斑酸性磷酸酶检验法的改良试验

本文对精斑酸性磷酸酶检验法进行了改良,将检材浸出液从37℃温箱内取出后,先用蒸馏水倍数稀释至1/64时,再加显色剂。改良后的方法减少了其它体液对精斑鉴定结果的干扰。

低磷与铝毒胁迫对木豆根尖及其分泌的酸性磷酸酶活性的影响

通过对木豆在低磷和铝毒胁迫下根尖内及根尖分泌的酸性磷酸酶(APA)活性的动态变化规律研究,旨在了解木豆对缺磷和铝胁迫的适应性机制,为木豆在酸性土壤上的栽培提供依据。结果表明:低磷(1μm o l.L-1P)使根尖内及根尖分泌的APA活性显著增加,并且低磷诱导根尖内APA活性增加早于根尖分泌的APA活性增加,在低磷胁迫的第7d,木豆根尖内APA活性达到最高,而根尖分泌的APA活性于第9d才达到最高。低磷引起的根尖及其分泌的APA活性增加在供磷24h后即显著降低,说明APA活性的增强是植物对低磷胁迫的适应性反应。另一方面,20μm o l.L-1A l虽然使低磷胁迫下植株根尖内的APA活性显著降低,但根尖分泌的APA活性却有所增加,说明在低磷胁迫下铝引起根系分泌的APA活性增加可能是木豆适应酸性土壤逆境的重要机制。

应用酸性磷酸酶进行番茄磷素诊断

本文旨在探索用叶片中酸性磷酸酶活性(APA)进行番茄磷素诊断.研究发现:叶饼法(6叶饼或12叶饼)三个反应时问(15、30和60分钟)所测出的功能叶片的APA与叶片的磷含量(P%)、全株(不包括根系)的P含量(P%)及植株干重都呈极显著负相关(P<0.01).匀浆法只有15分钟所测定的功能叶片APA与它们呈极显著负相关(P<0.01).此法比起测定植株体内磷的含量要快速简单得多,平均每15分钟测定一个样,很适用于生产实践.但由于APA不但受P营养状况、株龄及环境因子的影响,而且受测定条件的控制,要建立一个定量的实用的APA指标还相当艰难.

体外培养细胞的酸性磷酸酶显示法

本实验对体外传代培养的小鼠胸腺基质细胞用偶氮偶联法显示ACP ase,较清楚地显示了胸腺内各种基质细胞此酶的活性反应。

高度糖基化终产物对破骨细胞酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶活性的影响

目的 观察高度糖基化终产物 (AGE)对破骨细胞酸性磷酸酶 (ACP)和抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRACP)活性的影响。方法 用人血清白蛋白和葡萄糖恒温孵育制备人AGE蛋白 ,应用酶消化法从人髂骨松质骨分离培养破骨细胞。将AGE蛋白与培养的破骨细胞共同孵育 ,通过酶动力学法测定培养液ACP和TRACP活性。结果 低浓度AGE蛋白 (50～ 2 0 0 μg ml)对破骨细胞ACP和TRACP活性无显著影响 ,而高浓度 (50 0～ 1 0 0 0 μg ml)则使ACP和TRACP活性显著增高 ,且ACP活性的增高主要来自TRACP活性的增高。结论 上述结果提示AGE蛋白可能促进破骨细胞的破骨功能。

双膦酸盐对破骨细胞分化及抗酒石酸酸性磷酸酶的影响

背景:抗酒石酸酸性磷酸酶是破骨细胞分化及骨吸收功能的特异性标志酶,是破骨细胞分化成熟的标志。目的:观察双膦酸盐对破骨细胞分化及骨吸收功能相关因子抗酒石酸酸性磷酸酶的影响。方法:小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导培养破骨细胞。实验分2组:对照组开始时加入质量浓度100μg/L核因子kB受体活化因子配体进行诱导至收获细胞,双膦酸盐组在对照组的基础上加入10-7 mol/L阿仑膦酸盐处理至收获细胞。培养第7天检测各组破骨细胞生成和骨吸收功能,免疫荧光检测两组抗酒石酸酸性磷酸酶表达的差异,Western blot检测抗酒石酸酸性磷酸酶蛋白表达情况。结果与结论:各组细胞均有抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞生成,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝;但对照组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积均大于双膦酸盐组(P<0.01)。免疫荧光检测显示,对照组抗酒石酸酸性磷酸酶表达均强于双膦酸盐组(P<0.01)。Western blot检测显示,双膦酸盐组抗酒石酸酸性磷酸酶蛋白的表达低于对照组(P<0.01)。说明双膦酸盐通过抑制抗酒石酸酸性磷酸酶蛋白的表达,阻碍破骨细胞分化生成及骨吸收功能。

酸性磷酸测定的改良偶氮色素法

酶的组织化学目前做得较多的是碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)的组织化学反应,并有一定的应用价值。子宫内膜的AKP与ACP活性随月经周期而产生周期性变化。增生期ACP。活性很低,从月经周期第21天起持续上升,于经前达最高峰(AKP则反之)。这种周期性变化又常因子宫内环境的改变而改变,如宫内节育器(IUD)的置入等等, 由于ACP性质不稳定,和传统的染色方法如金属法、Burstone及Barka的偶氮偶联法往往使染色时间偏长,而且方法较复杂,因此染色常不稳定,反应较难呈现。

酸碱磷酸酶复合显示法

用萘酚AS—TR磷酸酯法和Gomori氏钙钴法联合在同一张病理组织切片上显示酸性磷酸酶(以下简称AcP)和碱性磷酸酶(以下简称AlP),国内外未见报道。本文报道用未经固定的前列腺癌组织作恒冷切片,用经丙酮固定后的前列腺癌组织的石蜡切片显示AcP和AlP,结果AcP呈红色,AlP呈黑色,细胞核蓝色,图像清晰,对比鲜明,有利于确定两种酶的分布定位和相互比较。

酸性磷酸酶在5′-肌苷酸生产中的研究进展

5′-肌苷酸具有独特鲜味,在食品、药品和饲料等多个领域发挥重要作用。目前,肌苷酸主要通过发酵与化学磷酸化相结合工艺进行生产,而生物磷酸化应用中最具前景的是酸性磷酸酶转化法。与传统化学磷酸化法相比,酶转化法具有专一性强、反应条件温和和绿色环保等优点。笔者综述了酸性磷酸酶、重组菌株构建及对转化生产肌苷酸工艺的研究现状,为5′-肌苷酸的进一步推广应用奠定基础。

亮氨酸氨基肽酶(LAP)试验和酸性磷酸酶(ACP)试验之特异性和敏感性的比较

人体精液比人体其他体液含有较高浓度的亮氨酸氨基肽酶(LAP)。我们最近报告过用LAP定性呈色反应鉴别精斑的新筛选法。这个方法简单,特异性高,适合于法医学精斑检查。因此,在LAP和酸性磷酸酶(ACP)

用通径分析法研究土壤水解酶活性与土壤性质的关系

为正确评价土壤性质对酶活性的影响程度 ,运用通径分析方法研究了浙江 5种土壤 1 2个样品中的土壤脲酶、转化酶、酸性磷酸酶活性与土壤性质的关系。结果表明 :土壤有机质、全氮、全磷是制约脲酶、转化酶和酸性磷酸酶活性的主要因素 ,而阳离子交换量对三种酶活性的影响均很微弱 ;就通径分析的直接效应而言 ,pH对脲酶活性的影响最为显著 ,对转化酶和酸性磷酸酶活性的影响程度大致相当。然而pH对脲酶、转化酶、酸性磷酸酶的这种直接效应在很大程度上被通过其它因素对三种酶的间接效应所抵消 ;土壤粉粒对转化酶活性的作用尤为显著。此外 ,粘粒对酸性磷酸酶、砂粒对脲酶有一定影响且均主要体现为直接效应。

去势法兔骨质疏松模型建立的探讨

目的探讨采用去势法建立免骨质疏松症模型的可行性。方法将20只5月龄新西兰雌兔随机分成手术组(OVX)与假手术组(SHAM),手术组行双侧卵巢切除。两组分别于术前、术后 4、8、12、24 w进行全身骨密度(BMD)检测;术前、术后12 w和术后24 w行骨代谢指标检测: 骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRAP-5b);于术后 12w和24w各处死10只兔,取其右侧股骨行生物力学测定及取腰椎,制成不脱钙的骨切片,行骨组织形态计量学分析。结果去势6 m后,OVX组全身BMD明显低于SHAM(P<0．01):在骨代谢指标TRAP-5b、BALP及BGP,OVX组均明显高于SHAM组(P<0．01):生物力学检测中的弯曲强度、比例载荷、最大挠度和弯曲破坏载荷OVX组均较SHAM组明显下降(P<0．01)。骨组织形态计量学显示,OVX组的骨质丢失明显增加(BV／TV％下降,Tb．N减少,Tb．Sp变宽),骨小梁形成明显减少(OS／BS及MAR均增多),骨吸收明显升高(ES／BS、Oc．No／Tb．Pm 升高),这些指标与SHAM组比较有明显性差异(P<0．01)。结论去势法建立兔骨质疏松症模型切实可行,5月龄雌兔,造模6月。本模型为探明原发性骨质疏松发病机理、评价药物疗效及临床骨质疏松性假体松动研究提供重要的基础。

大鼠尺神经一级传入纤维在脊髓胶状质定位投射的定量分析（FRAP法）

本实验按照跨神经节溃变的原理，用抗氟化物酸性磷酸酶（FRAP）法和显微测量，对大鼠尺神经一级传入纤维在脊髓胶状质（SG）的定位投射进行了定量分析。大鼠尺神经向SG的纵向投射主要为C6-T1，少数实验动物投向T2上中段。C6-T2各节段SG水平向“眉”长所测均值(mm)分别为0.995、0.996、0.918、0.783、0.642,而尺神经向C6-T2各节段SG水平向投射所测均值(mm)分别在0.354-0.556、0.333-0.542、0.214-0.515、0.144-0.319、0-0.223的范围，这主要显示了SG的中间区逐渐迁移至内侧区。

PERK-eIF2α-ATF4信号通路参与调控磷酸三钙磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解

目的探讨蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核细胞起始因子2α(e IF2α)-活化转录因子4(ATF4)介导的内质网应激通路在磷酸三钙(TCP)磨损颗粒诱导假体周围骨溶解中的作用。方法取雄性ICR小鼠30只,随机分为3组:假手术组(sham,n=10)、TCP磨损颗粒组(模型组,n=10)和salubrinal干预组(SAL,n=10)。采用TCP磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解模型,于术后第2天颅顶局部注射SAL(1 mg/kg),每隔2 d 1次,持续干预2周。实验结束后处死动物取颅骨和外周血。Western blotting法检测TCP磨损颗粒植入部位周围骨组织中内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达水平及PERK-e IF2α-ATF4信号通路的活化情况;HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察SAL对假体周围骨溶解和破骨细胞形成的影响;Real-time PCR检测SAL对破骨细胞活化相关基因抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和c-fos的mRNA水平;ELISA法检测SAL对血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和前列腺素E2(PGE2)水平的影响。结果 TCP磨损颗粒可诱导假体周围骨组织发生内质网应激反应,同时激活PERK-e IF2α-ATF4信号通路,表现为TCP磨损颗粒组小鼠颅骨组织中内质网应激通路蛋白GRP78、CHOP和磷酸化PERK(pPERK)、磷酸化e IF2α(p-e IF2α)和ATF4蛋白表达均显著上调,而PERK和e IF2α蛋白明显下调(P<0.05);而颅顶局部注射e IF2α特异性抑制剂SAL可明显阻止TCP磨损颗粒诱导假体周围破骨细胞形成和骨溶解,减少TRAP、MMP-9和cathepsin K的mRNA水平(P<0.05);同时抑制TNF-α、PGE2和IL-1β等炎症因子的产生(P<0.05)。结论 PERK-e IF2α-ATF4介导的内质网应激通路参与调控TCP磨损颗粒诱导的小鼠颅骨溶解;抑制该信号通路可减轻TCP磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解和关节松动。