酸性神经酰胺酶shRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建特异性抑制人酸性神经酰胺酶(acid ceramidase,AC)基因表达的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)载体,筛选出基因沉默效果最明显的shRNA,以明了shRNA对头颈肿瘤细胞AC表达的影响。方法针对人AC基因设计并构建4个shRNA质粒,转染人肾上皮细胞系293T细胞,通过实时定量PCR及Western blot的方法筛选出沉默效果最明显的shRNA序列,以该序列构建慢病毒载体感染人鼻咽癌CNE-2Z细胞及人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,验证其对这些细胞的基因沉默效果。结果 4个shRNA质粒转染293T细胞后AC mRNA及蛋白表达均降低,其中sh1340的抑制效果最明显。sh1340慢病毒感染肿瘤细胞后AC基因沉默的效果分别为CNE-2Z(79.3±0.5)%和Hep-2(80.7±5.1)%。结论成功构建特异性抑制AC表达的shRNA表达载体,为进一步研究AC的功能及头颈肿瘤的基因治疗奠定基础。

酸性神经酰胺酶在肝纤维化及肝癌中的研究进展

酸性神经酰胺酶(acid ceramidase,AC)属神经酰胺酶(ceramidase,CDase),能催化神经酰胺(ceramide,Cer)生成神经鞘氨醇(sphingosine,Sph),后者在神经鞘氨醇激酶(sphingosine kinase,Sphk)的作用下,水解成1-磷酸神经鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)。神经酰胺(ceramide,Cer),Sph和S1P是体内重要的活性物质,有多种生理功能。AC与多种肝脏疾病密切相关。本文就AC在肝纤维化及肝癌中的研究进展进行综述。

酸性神经酰胺酶抑制剂的研究进展

酸性神经酰胺酶(acid ceramidase,AC)是位于溶酶体内的神经酰胺(ceramide,Cer)代谢酶,能够调节神经酰胺(Cer)/鞘氨醇(sphingosine,Sph)/1-磷酸鞘氨醇(sphingosine1-phosphate,S1P)之间的相互代谢平衡。而Cer和S1P已被公认是调控细胞生长、增殖和死亡的重要信号分子,AC的过量表达,可使S1P水平升高,产生抗细胞凋亡效应。因此,AC有希望成为癌症治疗的全新靶点之一,通过抑制AC活性,诱导肿瘤细胞凋亡,为癌症治疗提供了新思路。本文对近年来AC抑制剂的研究进展进行综述。

酸性神经酰胺酶基因与精神分裂症症状数量性状的关联研究

目的探讨酸性神经酰胺酶基因（ASAH1）与精神分裂症症状数量性状的关联。方法应用聚合酶链反应及限制性片段长度多态性技术，对254例精神分裂症患者ASAH1基因的3个单核苷酸多态性（rs753118、rs3753116及rs830490）进行检测；使用阳性和阴性症状量表（PANSS）评定患者疾病表型的数量性状。结果（1）患者rs3753118位点3种基因型问的阳性症状分的差异有统计学意义（F=3．506，P〈0．05）；rs3753116位点3种基因型问的PANSS总分及阴性症状分的差异均有统计学意义（F=3．548，P〈0．05；F=3．358，P〈0．05）。经两两比较，rs753118位点C／C基因型组患者的阳性症状分及一般精神病理分明显高于C／T基因型组患者；m3753116位点G／G基因型组患者的PANSS总分及阴性症状分明显高于A／G基因型组患者，且G／G基因型组患者的阴性症状分明显高于A／A基因型组患者，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。（2）患者3个位点各等位基因问的PANSS量表评分的差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）患者rs3753118C-rs753116G单体型者及rs3753118C—rs3753116G—rs7830490A单体型者，其PANSS总分及阴性症状分均明显高于参照单体型者，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论ASAH1基因区域可能存在精神分裂症症状数量性状位点。

脑胶质瘤组织中ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白表达变化及其意义

目的观察脑胶质瘤组织中酸性神经酰胺酶(ASAH1)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达变化,并探讨其意义。方法脑胶质瘤组织70例份[观察组,按WHO胶质瘤分类标准分为低级别者(Ⅰ~Ⅱ级)32例、高级别者(Ⅲ~Ⅳ级)38例)],癌旁组织70例份(对照组),采用免疫组化SP法检测两组ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白;绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较观察组ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白阳性表达者及阴性表达者的生存时间;Spearman相关分析法分析观察组ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白表达的相关性。结果观察组ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白阳性率分别为81.42%、87.14%、75.71%,对照组分别为16.67%、33.33%、25.00%,两组比较,P均<0.05。观察组低、高级别者ASAH1蛋白阳性率分别为68.75%、92.10%,TGF-β_1蛋白阳性率分别为81.25%、92.10%,Caspase-3蛋白阳性率分别为87.50%、65.79%,两者比较,P均<0.05。ASAH1蛋白表达阳性者(57例)与阴性者(13例)中位生存时间分别为10、23个月,TGF-β_1蛋白表达阳性者(61例)与阴性者(9例)中位生存时间分别为10、20个月,Caspase-3表达阳性者(53例)与阴性者(17例)中位生存时间分别为13个月、6个月,两者比较,P均<0.05。观察组ASAH1蛋白与TGF-β_1表达呈正相关(r=0.652,P<0.05),ASAH1、TGF-β_1与Caspase-3表达均呈负相关(r=-0.427、-0.317,P均<0.05)。结论脑胶质瘤组织中ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白表达升高,检测上述蛋白有助于脑胶质瘤的病情判断及预后评估。

乳腺癌中ASAH1蛋白的表达

目的:探讨酸性神经酰胺酶(N-acylsphingosineamidohydrolase1,ASAH1)蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法分别检测73例乳腺癌、23例乳腺良性肿瘤和25例正常乳腺组织中ASAH1的表达情况及与临床病理特征和预后的关系。结果:乳腺良性肿瘤中与正常乳腺组织中ASAH1的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ASAH1在乳腺癌中表达阳性率为72.6%,与正常乳腺组织表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ASAH1蛋白表达与肿瘤大小呈相关性。结论:ASAH1蛋白在乳腺癌组织中表达增强,ASAH1蛋白表达增强预示生存率低。

黄褐斑表皮渗透屏障受损可能机制探讨

目的探讨表皮渗透屏障受损在黄褐斑发病机制中的作用。方法门诊收集黄褐斑患者皮损及健康志愿者皮损各10例,通过免疫组化观察并比较黄褐斑皮损及正常对照组皮肤K6,K10,K14,Filaggrin,Involucrin,Loricrin和ASAH1的分布及表达差异。结果与正常对照组相比,黄褐斑患者皮损处K6表达较强,K10及K14表达弱于正常对照组。Filaggrin,Loricrin,Involucrin及ASH1的表达弱于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄褐斑存在表皮渗透屏障受损,其机制与角蛋白、角化套膜蛋白及ASH1表达异常相关;临床治疗黄褐斑应注意修复表皮渗透屏障。

鞘磷脂类信号通路在肺纤维化发病机制中的作用

肺纤维化是一组由多种病因引起的慢性肺部疾病,其病理特征包括肺组织炎性损伤、组织结构破坏、间充质胶原增多及细胞外基质沉积。其病因复杂,大部分肺纤维化疾病目前尚无有效的治疗方法。近几年研究表明,鞘磷脂类信号通路的激活与肺纤维化关系密切。本文综述了鞘磷脂类信号通路的组成、功能及其在肺纤维化中的作用,为深入探讨肺纤维化发病机制及其防治方法提供新思路。

乳腺癌ASAH1、Bcl-2蛋白表达及其临床意义的研究

目的探讨酸性神经酰胺酶(N-acylsphingosineamidohydrolase 1,ASAH1)蛋白在乳腺癌中的表达及临床。方法应用免疫组织化学法分别检测73例乳腺癌、25例正常对照组标本(来自乳腺癌患者乳房全切除后所切取的正常乳腺组织)ASAH1及Bcl-2蛋白的表达及与临床病理特征和预后的关系。结果 ASAH1在乳腺癌中表达阳性率为72.6%,Bcl-2在乳腺癌中阳性率为65.8%。与正常乳腺组织表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。二者具有相关性。结论 ASAH1、Bcl-2蛋白在乳腺癌组织中表达增强,ASAH1及Bcl-2蛋白蛋白表达增强预示生存率低。

囊型包虫病患者包囊钙化相关基因研究

目的探寻与囊型包虫病患者包囊钙化相关的基因，从分子生物学水平提供判断患者预后情况的依据。方法于2013年6月至2014年12月，收集前往宁夏3家医院就诊的32例囊型包虫病患者（10例进行mRNA基因芯片分析，22例进行Real—timePCR分析）和11例肝囊腺瘤患者的肝组织。采用基因表达差异显著性分析方法对10例囊型包虫病患者（钙化组与非钙化组各5例）的基因表达差异进行分析和筛选，用倍数变化衡量同一基因在两组之间表达量的变化情况。采用Real-timePCR在22例囊型包虫病患者（钙化组与非钙化组各11例）之间进行验证，以GAPDH作为内参基因，并用11例肝囊腺瘤患者进行标化，计算钙化组和非钙化组之间半乳糖凝集素4（LGALS4）和酸性神经酰胺酶（ASAHl）的相对表达量，并采用r检验比较两组的差异。结果经基因表达谱芯片筛选出5个表达有显著性差异的基因，且都在钙化组中表达下调，其中LGALS4和ASAHl下调程度较明显，倍数变化分别为0．0088和0．0203。Real．timePCR验证结果显示，LGALS4在钙化组的相对表达量为0．49±0．27，非钙化组为2．70±2．61，差异有统计学意义（t=-2．59，P=0．026）；ASAHl在钙化组的相对表达量为1．36±0．33，非钙化组为1．68±0．67，差异无统计学意义（t=-1．44，P=0．167）。在非钙化组中，LGALS4和ASAHl的表达量波动范围较大，且两者表达量变化的趋势呈正相关（r=O．91，P=0．001），即LGALS4表达量较低的患者其ASAHl表达量也相对较低。结论LGALS4和ASAHl在发生钙化的囊型包虫病患者中低表达，可能成为判断囊型包虫病自愈倾向的标志基因。

ASAH1表达与luminal A型乳腺癌淋巴结转移的关系及其临床意义

目的:探讨酸性神经酰胺酶(ASAH1)表达与luminal A型乳腺癌淋巴结转移的关系及其与临床病理指标和预后的关系。方法:应用实时定量PCR检测112例luminal A型乳腺癌组织中ASAH1 mRNA表达,并分析ASAH1表达与淋巴结转移等临床病理指标及预后的关系。结果:淋巴结转移的乳腺癌患者肿瘤组织中ASAH1表达显著高于没有淋巴结转移的患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。ASAH1表达与淋巴结转移等临床病理指标的相关性分析结果显示肿瘤大小、微淋巴管密度和淋巴结转移与ASAH1表达显著相关(P<0.05)。ASAH1高表达的患者无进展生存率显著低于ASAH1低表达的患者(HR=0.367,95%CI 0.133~1.007,P=0.040)。结论:ASAH1表达与luminal A型乳腺癌淋巴结转移密切相关,检测肿瘤组织中ASAH1表达对判断luminal A乳腺癌淋巴结转移和预后具有重要意义。