酸性肽对血管性痴呆小鼠学习记忆力和脑组织APP、BACE和tau蛋白表达的影响

目的:观察酸性肽对血管性痴呆(VD)小鼠学习记忆力及脑内淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶(BACE)及tau蛋白表达的影响。方法:60只健康昆明种小鼠,随机分成6组,每组10只。除对照组外,其余5组小鼠给予高脂食物灌胃、颈动脉局部缺血及再灌注手术,建立VD小鼠模型,随后分别灌胃生理盐水(模型组)、0.3g/kg脑复康(脑复康组)和20、40和80mg/(kg·d)的酸性肽(低、中及高剂量酸性肽组),1次/d,共15d。用跳台试验检测小鼠的学习和记忆能力,免疫组化法测定脑组织APP、BACE及tau蛋白的表达。结果:6组小鼠学习能力跳台实验错误次数及受电击时间、记忆能力跳台实验错误次数及受电击时间及脑组织APP、BACE及tau蛋白表达差异均有统计学意义(F分别为6.544、2.991、11.179、6.100、484.218、59.317和40.448,P均<0.01)。与模型组相比,低、中剂量酸性肽组小鼠学习及记忆能力提高(P<0.05)。3个酸性肽组APP及BACE表达水平降低(P<0.05),低、中剂量酸性肽组与对照组比较,tau蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:适宜剂量的酸性肽可通过降低VD小鼠脑内APP和BACE的水平,改善其学习记忆力。

酸性肽对AD大鼠学习记忆能力及Aβ表达的影响

目的:研究酸性肽(acidic peptide,AP)对AD大鼠学习记忆能力及Aβ表达的影响。方法:雄性SD大鼠84只,随机分成7组,每组12只。Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组为AD模型组,Ⅲ组为AD模型+生理盐水组,Ⅳ组为AD模型+谷氨酸0.3g/kg治疗组,Ⅴ组为AD模型+AP15 mg/kg治疗组,Ⅵ组为AD模型+AP30mg/kg治疗组,Ⅶ组为AD模型+AP 60 mg/kg治疗组。采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术,用鹅膏(?)氨酸(IBO)损毁大鼠双侧基底核(nbM),建立AD动物模型,手术后用不同剂量AP对AD大鼠进行治疗,测定与学习、记忆有关的行为学指标及脑内与AD密切相关的Aβ水平的变化。结果:与模型组相比,酸性肽高、中剂量组均能显著提高AD大鼠的学习、记忆能力,并能显著降低Aβ的沉积。结论:AP能减少皮质中Aβ的沉积,对AD具有治疗作用。

酸性肽对体外培养大鼠星形胶质细胞增殖的影响

目的:观察酸性肽对体外培养的大鼠星形胶质细胞增殖的影响。方法:SD大鼠来源的星形胶质细胞经传代纯化后分为5组培养:无血清组、体积分数20%的胎牛血清对照组和低、中及高剂量酸性肽组(分别给予37.5、75.0及150.0mg/L酸性肽),作用24、48及72h后,收集星形胶质细胞及上清液,计算细胞存活率,并采用日立7170全自动生化分析仪测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量。另取细胞,同上分组后培养72h,采用MTT法观察细胞增殖情况,计算细胞增殖率。结果:培养24、48和72h后,5组细胞存活率及上清液中LDH含量差异均有统计学意义(细胞存活率F=149.381、58.817和119.135,LDH含量F=1247.644、2381.877和1102.340,P均<0.001);5组不同时间点间细胞存活率及上清液中LDH含量差异均有统计学意义(细胞存活率F=62.777、50.993、10.555、38.874和21.742,LDH含量F=775.762、222.799、184.471、59.806和135.954,P均<0.001)。培养72h后,5组细胞增殖率相比,差异有统计学意义(F=137.416,P<0.001)。与相同时间点的无血清组和胎牛血清对照组相比,酸性肽各组细胞存活率和增殖率均升高,上清液中LDH含量均降低(P均<0.05)。结论:酸性肽对体外培养的大鼠星形胶质细胞的增殖具有一定的营养和保护作用。

酸性肽对AD大鼠学习记忆功能及NGF和NMDAR1表达的影响

目的研究酸性肽对AD大鼠脑中NGF、NMDAR1表达的影响。方法采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术,建立AD动物摸型,用不同剂量的AP对AD大鼠进行治疗。通过测定与学习记忆有关的行为学指标及脑内与AD相关的NGF、Aβ水平的变化,并与正常组、模型组、生理盐水组结果比较,对数据进行统计处理。结果模型组与正常组比较,学习记忆成绩明显下降(P<0.01);各治疗组与模型组比较,学习记忆成绩明显提高(P<0.01);模型组与空白组比较,大鼠基底前脑中NGF水平显著降低,皮质中NMDAR1含量显著增加,各治疗组分别与模型组比较,大鼠基底前脑中NGF水平显著降低,皮质中NMDAR1含量显著增加(P<0.01)。结论AP可能通过上调AD基底前脑中NGF的水平并降低NMDAR1水平来发挥对AD的治疗作用。

酸性肽对大鼠脑内谷氨酸和酸性肽含量的影响

目的研究大鼠口服酸性肽后脑内谷氨酸和酸性肽的含量变化.方法通过纸电泳、茚三酮显色、分光光度法和标准曲线法测定脑内谷氨酸和酸性肽的含量.结果正常对照组大鼠脑内的谷氨酸含量(mg/g脑组织)为0.7101±0.1347.服用酸性肽1、2、3、4、5h后各组大鼠脑内谷氨酸的含量(mg/g脑组织)分别为1.2591±0.1446,1.0595±0.1195,0.8798±0.1158,0.7400±0.0992,0.7600±0.0992.正常对照组大鼠脑内的酸性肽的含量(mg/g脑组织)为1.7789±0.2078.服用酸性肽1、2、3、4、5h后各组大鼠脑内酸性肽的含量(mg/g脑组织)分别为1.4662±0.1511,3.8377±0.2778,3.2253±0.2733,1.8701±0.1822,1.7398±0.1822.结论大鼠口服酸性肽后1～2h内能升高脑内的谷氨酸水平,并且在3～4h内能升高脑内的酸性肽水平.

酸性肽对硝普钠诱导体外培养SD大鼠海马神经细胞凋亡的保护作用

目的:观察不同剂量酸性肽(AP)对NO供体硝普钠(SNP)诱导的大鼠海马神经细胞凋亡的影响。方法:分离培养新生SD大鼠海马神经细胞,用终浓度为50μmol/L的SNP诱导海马神经细胞凋亡。实验共设空白对照组、SNP处理组和AP实验组,AP实验组分别加入浓度为0.0375、0.0750、0.1500g/L的AP与SNP共培养24h后,通过细胞形态学观察、MTT测定、吖啶橙荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳等方法检测细胞凋亡情况及细胞存活率。结果:SNP处理组海马神经细胞存活率降低至58.9%±4.5%,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。3个AP实验组海马神经细胞存活率均高于SNP处理组(P<0.05或0.01)。SNP组凋亡细胞的形态学改变及细胞核固缩、核碎裂现象明显,DNA琼脂糖凝胶电泳图谱具有DNAladder;各AP实验组凋亡细胞形态学改变不明显,DNA琼脂糖凝胶电泳图谱没有DNAladder出现。结论:AP对SNP诱导的海马神经细胞凋亡具有保护作用。

酸性肽对硝普钠诱导的大鼠海马神经细胞凋亡中Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察不同剂量酸性肽(AP)对NO供体硝普钠(SNP)诱导的大鼠海马神经细胞凋亡中bcl-2和bax基因表达的影响,探讨酸性肽抑制神经细胞凋亡的机制。方法分离培养新生大鼠海马神经细胞,用SNP诱导海马神经细胞凋亡,采用吖啶橙荧光染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、Westernblot研究加入SNP培养的及SNP和AP共培养的海马神经细胞的形态和分子生物学改变及Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果AP能对抗SNP诱导的凋亡,改善凋亡细胞的形态学改变;减少SNP诱导的海马神经细胞核固缩、核碎裂现象,抑制DNA凋亡梯带的出现,上调Bcl-2的表达而下调Bax的表达。结论AP能抑制SNP诱导的海马神经细胞凋亡,其机制可能通过调控Bcl-2和Bax的表达来实现。

酸性肽体外实验观察抗突变作用及其机理

目的 体外实验观察酸性肽抗突变作用及其机理。方法 采用Ames实验TA98、TA10 0菌株 ,观察酸性肽对其回变菌落数的影响 ;采用不同的加药方式作用于TA98菌株 ,探讨酸性肽的抗突变机理。结果 酸性肽对这两种菌株的回变菌落数与阳性对照相比有显著性差异 ;A、B、D三种加药方式回变菌落数明显小于C组 ,有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论 酸性肽有抗突变性 ,抗突变的机理是通过直接灭活致突变剂的作用 ,因而有保护细胞免受损伤的抗突变作用。

酸性肽抗突变作用研究

目的 研究酸性肽的抗突变作用。方法 通过小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验、鼠伤寒沙门氏菌回复实验、中国仓鼠卵巢细胞染色体畸变试验 ,对酸性肽的抗突变性进行评价。结果 1)酸性神经肽各组均能降低微核的产生 ,呈量效关系 ,与阳性对照组相比有显著性差异 ;2 )Ames实验结果经F检验与阳性对照组比 ,酸性肽各组差异显著 ,有统计学意义 ;3 )CHO细胞染色体畸变实验 ,显示酸性肽各组与对照组差异显著 ,有统计学意义。结论 酸性肽有抗突变性 ,且呈量效关系。

不同年龄段人血清中酸性肽的HPLC分析

目的:了解不同年龄人群血清中酸性肽的含量,以寻找神经退行性改变的早期预警的生物标志物。方法:采用内标法和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析法。结果:分析结果显示:1～10岁组(A组),20～30岁组(B组),40～59岁组(C组)和60～80岁组(D组)人群血清中酸性肽的含量分别为2.943±1.340、2.338±0.371、2.052±0.328、(2.778±0.499)mg/ml。A组与B组相比P=0.082,A组与C组相比P=0.012,A组与D组相比P=0.628。结论:20～30岁组和40～59岁组人群血清中酸性肽的含量比1～10岁组和60～80岁组人群血清中酸性肽的含量低,具有统计学意义。

人脑颞叶组织中酸性肽的电泳分析和含量测定

目的:探讨人类大脑中是否存在酸性肽并对其含量进行分析。方法:用纸电泳法分析人脑颞叶组织中酸性肽的电泳图谱并与标准酸性肽、谷氨酸和谷胱甘肽的电泳图谱比较。用分光光度法对人脑颞叶组织中的酸性肽进行定量分析。结果:通过与标准酸性肽、谷氨酸和谷胱甘肽的电泳图谱比较,证明人脑颞叶组织中均含有酸性肽。用分光光度法对酸性肽进行的定量分析表明:3个不同人的脑颞叶组织中酸性肽的含量分别为:0.545±0.114 mg/g,0.495±0.114 mg/g和0.943±0.176 mg/g。统计学处理表明:脑样品1和2中酸性肽的含量没有显著差异(P>0.05),而脑样品3中的酸性肽含量与脑样品1(和2)中酸性肽的含量有显著性差异(P<0.05)。结论:人脑颞叶组织中含有酸性肽。但不同人的脑颞叶组织中酸性肽的含量不同。

复合酶法水解大麦虫蛋白制备酸性多肽及其抗氧化活性

采用复合蛋白酶(胰蛋白酶、碱性蛋白酶)对大麦虫蛋白进行控制酶解,研究酶解时间、酶活比、底物浓度、酶解温度、pH与加酶量等对酶解反应的影响;采用中心组合试验设计,优化酶解工艺;并对大麦虫酸性多肽清除自由基能力进行了测定评价。结果表明,酶解最佳条件为底物浓度5%,时间120 min,胰蛋白酶∶碱性蛋白酶1∶1,pH 8.71,温度48℃,加酶量16.91 mg/g。该酸性多肽对(O2-.)、DPPH.自由基有很好的清除作用,具有很强还原力。利用优化工艺制得酸性肽得率为79.05%。

质谱技术研究海兔大脑神经节超微量多肽内切酶和酸性多肽酶解产物

采用ESI-Q-TOF质谱分析了由27个氨基酸残基组成的酸性多肽(AP)的一级结构。选用RP-HPLC和MALDI-TOF质谱非在线技术分离与鉴定海兔大脑神经节(CG)多肽与蛋白质的组成与分布,发现CG中含有AP酶解的二聚体短肽。这些短肽序列分别为2(NKDEEQRELLKAISNLL)、2(NKDEEQRELLKAISNL)、2(SGVSLLTSNKDEEQREL)和2(LTSNKDEEQRE LL),均以L—R(氨基酸残基)方式断裂。以AP为探针,结合MALDI-TOF质谱分析技术,发现CG中含有超微量的L—R多肽内切酶,其分子量为78218·25Da。本研究中的分析方法也适合于研究其他生物体内超微量多肽及多肽酶分布与功能。

融合有酸性片段的抗菌肽串连重复基因的构建

为提高抗菌肽的表达 ,设计在抗菌肽基因的N端融合一段编码酸性肽的片段以减轻表达产物对宿主的毒性 ,通过含有酶切位点的接头将该融合肽基因以同向串连的方式连接成多拷贝基因 ,克隆至pUC19载体。为此 ,分段设计合成了编码天蚕素A -蜂毒素杂合肽和酸性肽的DNA片段。首先将其连接成融合肽全基因 ,然后分别与含相同粘性末端的前后接头连接。通过控制基因和接头加入的量及次序 ,可得到两侧有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的同向串连的多拷贝基因。选取合适拷贝数的基因 ,将其克隆至pUC19载体 ,PCR扩增和DNA测序证明多拷贝基因构建成功且基因方向相同。结果表明 ,该方法能简捷高效地获得所需的多拷贝基因 。

富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白2.1肽段对体外培养人系膜细胞超微结构及其分泌细胞外基质的影响

目的:观察富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白(SPARC)2.1肽段对体外培养人肾小球系膜细胞(HMC)超微结构及其分泌细胞外基质的影响。方法:50μg/mlSPARC2.1肽段作用48h、96h后,倒置显微镜下观察HMC形态变化,透射电镜观察其超微结构,以正常培养的HMC作空白对照组。荧光定量RT-PCR法检测空白对照组和50μg/mlSPARC2.1肽段作用96h后HMC分泌细胞外基质[Ⅰ型和Ⅳ型胶原(ColⅠ、ColⅣ)、层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)]相关基因mRNA表达的变化;ELISA法比较两组HMC培养上清中细胞外基质(ColⅠ、ColⅣ、LN、FN)的蛋白含量。结果:空白对照组HMC无明显变化;50μg/mlSPARC2.1肽段作用48h电镜可见少数HMC发生凋亡早期改变;96h可见较多细胞发生典型凋亡改变,电镜下可见典型的凋亡小体。与空白对照组相比,SPARC2.1肽段作用96h后,HMC的ColⅠ、ColⅣ、FNmRNA和蛋白含量显著下调(P<0.01,P<0.05),LNmRNA及其蛋白含量无明显变化。结论:SPARC2.1肽段可在体外诱导HMC细胞的凋亡,超微结构可见典型凋亡小体,并抑制其分泌细胞外基质。

人参酸性多肽对人胚肺成纤维细胞内糖代谢指标的影响

本研究应用细胞化学的方法对人胚肺成纤维细胞(42代龄2BS细胞)内的化学成分进行定性、定位,并用显微分光光度计对其含量进行定量分析,结果表明,加入不同浓度的人参酸性多肽与细胞共同孵育一周后,中、低剂量组能显著增加高代龄2BS细胞内多糖(PAS)含量(P<0.001),中剂量组显著增加琥珀酸脱氢酶(SDH)的相对含量(P<0.001),高、中剂量组显著增加葡萄糖—6-磷酸阵(G_6Pase)相对含量(P<0.01.P<0.05),人参酸性多肽能降低晚代2BS细胞内乳酸脱氢酶(LDH)相对含量(A.U)。

大豆球蛋白A1a酸性多肽的原核表达及纯化

为建立大豆球蛋白免疫检测方法及致敏机理的深入研究提供基础材料,人工合成了大豆球蛋白A1a酸性多肽基因的cDNA序列,通过聚合酶链式反应(PCR)和Bam HI、Kpn I双酶切构建了原核表达载体pET30a-A1a,将重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21后用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。SDS-PAGE分析表明,A1a酸性多肽融合蛋白能以可溶蛋白形式进行分泌表达,并且诱导5h后,A1a酸性多肽融合蛋白表达量达到最高。经His亲和层析纯化,获得纯度达90%的融合A1a蛋白,分子质量大小约为38kD。Western blotting显示,所获得的A1a融合蛋白能与对豆粕过敏的仔猪血清发生免疫反应,表明所获得融合蛋白具有免疫活性。

MALDI-TOF质谱技术分析加州海兔口腔神经节中超微量Leu-Leu多肽酶

利用丙酮 -水 -酸 (4 8∶ 5 0∶ 2 V/ V)萃取系统 ,从加州海兔 (Aplysia California,AC)口腔神经节中提取 L eu- L eu多肽酶 ,并用反相 HPL C进行纯化。选用具有三对 L eu- L eu结构的酸性多肽 (acidic peptide,AP)作为探针 ,以基质辅助激光解吸电离飞行时间 (MAL DI- TOF)质谱技术研究了海兔口腔神经节中的超微量 L eu- L eu多肽酶。对 L eu- L eu多肽酶的活性与类型及温度处理效果进行讨论。

NaCl胁迫对菜用大豆种子球蛋白表达的影响

采用蛭石栽培,对开花后10 d的菜用大豆[Glycine max(L.)Merr.]用100 mmol.L-1NaCl进行10、15、20 d胁迫处理,利用双向电泳技术对种子蛋白质进行分离,并对处理与对照图谱中β-伴大豆球蛋白各亚基和大豆球蛋白各酸性肽的表达进行比较分析。结果表明:胁迫10 d时α、α′亚基及A1a、A4酸性肽的丰度均显著下调;胁迫15 d时α、β亚基及A4酸性肽的丰度均显著上调,A1a、A3酸性肽则显著下调;胁迫20 d时A1a的丰度显著上调,α、β、A2、A3、A4均显著下调。尽管有些亚基或多肽的丰度在个别时期显著升高,但大豆球蛋白的整体表达量在NaCl胁迫期间均显著下降。结果表明,NaCl对菜用大豆球蛋白的积累在各个胁迫时期均有显著的抑制作用,随着胁迫时间的延长受抑制的亚基及多肽增加。

天然水蛭素的提取和纯化

水蛭素(hirudin)是存在于水蛭唾液中的一种酸性多肽类物质,是迄今为止世界上最强的凝血酶抑制剂[1].在治疗各种血栓性疾病及弥散性血管内凝血中均有很好的预防及治疗效果,并且没有副作用,因而它比肝素更有优越性.研究表明,水蛭素还能防止肿瘤细胞的转移,用水蛭素配合化疗和放疗,可促进肿瘤中的血流而增强疗效[2-3].因而具有宽阔的临床应用前景.