哈茨木霉酸性蛋白酶P6281的结构分析

利用生物信息学网站、软件对哈茨木霉酸性蛋白酶P6281进行了预测和分析.结果表明,P6281属于Clan AA中A1家族的天冬氨酸蛋白酶,一级结构是由386个氨基酸残基组成的序列,其中序列的氨基酸残基1~17位为信号肽、18~65位为前导肽、66~386位为成熟肽.以来源于Irpex lacteus的天冬氨酸蛋白酶(PDB code:1wkr.1.A)为模板进行同源建模;从构建的P6281模型中可知,P6281二级结构主要由β折叠以及少量的简短α螺旋结构组成.三级结构由类二重对称的N-lobe和C-lobe形成,该结构中无丝氨酸和脯氨酸形成的顺式肽键、loop环中无脯氨酸残基、无Zn离子结合、含有1个二硫键、270个氢键.N-lobe和C-lobe相结合的缝隙即为P6281的底物结合区域(分为S2’、S1’、S1、S2、S3和S4),其中S1’、S1、S3和S4对其底物选择性具有关键性作用;并且底物结合区域中重要位点的氨基酸残基的保守性和差异性,决定了P6281对底物肽键选择性的独特性.

基于星形胶质细胞活化与其介导的P38MAPK/CREB信号通路探讨麦粒灸对坐骨神经损伤大鼠的镇痛机制

目的:观察麦粒灸对坐骨神经损伤(SNI)大鼠腰(L)4-5脊髓中星形胶质细胞(AS)活化、CX43、炎性因子及炎症信号通路的影响,探讨麦粒灸治疗坐骨神经痛的可能机制。方法:SD雄性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、麦粒灸组,每组6只。模型组、麦粒灸组采用经典钳夹法制备大鼠坐骨神经重度挤压伤模型;假手术组仅暴露坐骨神经,不行钳夹处理;造模后第7天麦粒灸组取患侧环跳穴行麦粒灸治疗,每次灸6壮,以大鼠不全出现全身挣扎为度;其余各组正常喂养,仅抓取固定,不做其他处理;连续干预10d,1次/d。观察造模后第7天、干预结束后的各组大鼠的冷刺激缩足持续时间、纤维丝测痛仪测量各组大鼠的痛阈值;ELISA法检测大鼠脊髓组织中白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达水平,Western Blot法检测大鼠脊髓组织中p38丝裂原活化蛋白酶(P38MAPK)、P-P38、胶质纤维丝酸性蛋白(GFAP)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、P-CREB、CX43蛋白的表达水平。结果:造模后干预前,与假手术组比较,模型组、麦粒灸组大鼠的机械痛阈值显著降低(P<0.01),冷刺激缩足时间显著升高(P<0.01);干预后,与模型组比较,麦粒灸组大鼠的机械痛阈值显著上升(P<0.01),冷刺激缩足时间显著减短(P<0.01);麦粒灸组大鼠脊髓组织中的IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平及CX43、GFAP、P-P38、P-CREB蛋白表达均显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:麦粒灸环跳穴可改善SNI大鼠疼痛反应,其机制可能是通过减少CX43、IFN-γ分泌,抑制AS活化,减少促炎因子释放,抑制炎症信号通路激活,发挥镇痛作用。