目的:通过酸感受离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)1a敲减的细胞模型,探讨ASIC1a亚基表达抑制后细胞抗酸性能增强的可能机制。方法:使用RNA干扰技术,选择性敲减大鼠神经胶质瘤细胞(C6)和新生大鼠海马神经元中ASIC1a亚基,通过...目的:通过酸感受离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)1a敲减的细胞模型,探讨ASIC1a亚基表达抑制后细胞抗酸性能增强的可能机制。方法:使用RNA干扰技术,选择性敲减大鼠神经胶质瘤细胞(C6)和新生大鼠海马神经元中ASIC1a亚基,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放实验,观察不同条件下细胞抗酸能力的改变。结果:在酸性条件下,敲减ASIC1a亚基可明显提高C6细胞的耐酸能力。使用ASICs非选择性拮抗剂氨氯吡咪与选择性敲减ASIC1a亚基相比,在提高C6细胞抗酸能力方面没有显著差异。提高胞外Ca2+浓度可加重pH值下降造成的细胞损伤。结论:与其他亚基相比,ASIC1a亚基与酸中毒造成的细胞损伤关系最为密切,其机制与胞外Ca2+内流有关,提示ASIC1a可能是潜在的抗酸靶分子。展开更多
目的:研究大鼠酸感受离子通道亚基3(acid-sensing ion channel subunit 3,ASIC3)组成的同聚体离子通道的电生理学特性。方法:将编码ASIC3亚基的cRNA注射到爪蟾卵母细胞中以表达ASIC3离子通道,使用双电极电压钳技术记录H+诱发电流,分析...目的:研究大鼠酸感受离子通道亚基3(acid-sensing ion channel subunit 3,ASIC3)组成的同聚体离子通道的电生理学特性。方法:将编码ASIC3亚基的cRNA注射到爪蟾卵母细胞中以表达ASIC3离子通道,使用双电极电压钳技术记录H+诱发电流,分析电流的药理学和门控动力学特征,并观察了Ca2+、Na+及K+离子对H+诱发电流的影响。结果:在注射ASIC3亚基cRNA的爪蟾卵母细胞上,降低胞外液pH值可诱导出内向电流。pH值越小则H+诱发的电流幅度越大,pH50=5.83。H+诱发电流可被阿米洛利(氨氯吡咪)可逆性阻断,电流呈现快速和稳态失活,其失活常数分别为T1=(1.5±0.7)ms,T2=(364.5±1.3)ms。提高胞外Ca2+浓度可降低H+诱发的电流幅度,IC50=9.16 mmol/L。当细胞外液中无Na+时,H+基本上不能诱发出内向电流;当同时去除细胞外液中Na+和K+时,H+可诱发出外向电流。结论:成功建立了特异性表达大鼠ASIC3亚基同聚体离子通道细胞模型。ASIC3除了对Na+通透外,对K+具有一定程度的通透。胞外Ca+对ASIC3的开放具有抑制性作用。展开更多
文摘目的:通过酸感受离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)1a敲减的细胞模型,探讨ASIC1a亚基表达抑制后细胞抗酸性能增强的可能机制。方法:使用RNA干扰技术,选择性敲减大鼠神经胶质瘤细胞(C6)和新生大鼠海马神经元中ASIC1a亚基,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放实验,观察不同条件下细胞抗酸能力的改变。结果:在酸性条件下,敲减ASIC1a亚基可明显提高C6细胞的耐酸能力。使用ASICs非选择性拮抗剂氨氯吡咪与选择性敲减ASIC1a亚基相比,在提高C6细胞抗酸能力方面没有显著差异。提高胞外Ca2+浓度可加重pH值下降造成的细胞损伤。结论:与其他亚基相比,ASIC1a亚基与酸中毒造成的细胞损伤关系最为密切,其机制与胞外Ca2+内流有关,提示ASIC1a可能是潜在的抗酸靶分子。
