酸敏感离子通道1a对全脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡的影响及其可能机制

目的探讨酸敏感离子通道1a(ASIC1a)对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡的影响及其相关机制。方法将180只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ASIC1a抑制剂组[狼蛛毒素1(PcTx1)组],每组60只。对模型组、PcTx1组大鼠采用四血管阻断法建立全脑缺血再灌注损伤模型,并于再灌注后30 min分别从侧脑室注射无菌无酶PBS和PcTx1;在假手术组中仅分离并暴露大鼠的双侧椎动脉及颈总动脉,不凝断椎动脉及夹闭双侧颈总动脉,再灌注后30 min从侧脑室注射无菌无酶PBS。在再灌注后2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,检测各组大鼠海马细胞凋亡率,观察海马CA1区神经元形态学变化,分析海马CA1及CA3区的凋亡指数、磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的表达水平。结果(1)在再灌注后各时间点,假手术组、PcTx1组、模型组海马细胞凋亡率依次升高(P<0.05)。(2)HE染色结果显示,在再灌注后各时间点,模型组海马CA1区锥体细胞结构被破坏,排列紊乱松散,胞核皱缩,可见凋亡小体,而PcTx1组海马CA1区锥体细胞形态较模型组改善。(3)在再灌注后各时间点,假手术组、PcTx1组、模型组CA1和CA3区的凋亡指数依次升高(P<0.05)。(4)在再灌注后2 h、6 h、12 h、24 h,假手术组、模型组、PcTx1组大鼠海马CA1区的磷酸化ERK1/2表达水平依次升高;在再灌注后48 h,PcTx1组大鼠海马CA1区的磷酸化ERK1/2表达水平亦高于其他两组(P<0.05)。再灌注后2 h、6 h,假手术组、模型组、PcTx1组大鼠海马CA3区的磷酸化ERK1/2表达水平依次升高;在再灌注后12 h,模型组、PcTx1组的磷酸化ERK1/2表达水平高于假手术组(P<0.05)。结论ASIC1a可能参与全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡的发生,其特异性阻滞剂PcTx1可减轻神经元细胞凋亡,作用机制可能与促进ERK1/2磷酸化有关。

酸敏感离子通道1a在酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其机制研究

目的研究酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion chan-nel 1a)在体外培养的酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其可能机制。方法Ⅱ型胶原酶消化法分离大鼠关节软骨细胞,鉴定后传代培养,观察在不同pH条件下诱导的细胞自噬情况以确定胞外酸化条件;将软骨细胞分为pH7.4环境下培养的正常组、pH 6.0的酸化组、以及经ASIC1a非特异性阻断剂Amiloride和特异性阻断剂PcTX1处理的酸化组,RT-PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3及ERK1/2、p38MAPK磷酸化蛋白的表达,透射电子显微镜法(TEM)观察自噬小体数量的变化;通过使用ERK1/2、p38MAPK磷酸化抑制剂(PD98059、SB203580),采用RT-PCR和Western blot法观察ERK1/2及p38MAPK对酸诱导的软骨细胞自噬的影响。结果 pH 5.5和pH 6.0胞外酸化刺激均能明显升高软骨细胞自噬水平(P<0.01);与pH 7.4组比较,酸化组软骨细胞Beclin-1 mRNA及LC3、磷酸化的ERK1/2和p38MAPK蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),且自噬小体数量增多,ASIC1a阻断剂组自噬水平及ERK1/2、p38磷酸化蛋白表达水平较酸化组明显降低(P<0.01),且自噬体数量减少;与pH 6.0组相比,ERK1/2磷酸化抑制剂处理后,Beclin-1 mR-NA和LC3蛋白的表达均下调(P<0.05,P<0.01),而p38磷酸化抑制剂组自噬水平则无明显变化。结论胞外酸化环境下能诱发软骨细胞自噬,阻断ASIC1a能明显减弱酸化诱导的软骨细胞自噬,其机制可能与抑制ERK1/2磷酸化有关。

芍药苷下调PC12细胞酸敏感离子通道1a的表达拮抗酸诱导的钙内流

酸敏感离子通道（acid sensing ion channels,ASICs）是一类能被细胞外H＋激活的阳离子通道,其中的ASIC1a亚基能介导钙的内流,参与了脑缺血缺氧。

酸敏感离子通道1a阻断剂对大鼠全脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨酸敏感离子通道（ASIC）1a的阻断剂对大鼠全脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法成年雄性SD大鼠72只，体重250～300g，随机均分为四组：假手术组（S组）、全脑缺血-再灌注组（IR组）、溶剂组（V组）和ASIC1a特异性阻断剂组（P组）。IR组、V组和P组参照四血管阻断法建立大鼠脑缺血-再灌注模型，缺血15rain后恢复灌注。V组和P组分别于再灌注即刻侧脑室注射6肛l双蒸水和狼蛛毒素（PcTX1）6μl（500ng／ml）。再灌注6h后处死大鼠取海马组织。每组取其中12只分别采用Western blotting法测定海马钙／钙调蛋白依赖型蛋白激酶II磷酸化水平（P-CaMKⅡ）和RT-PCR法检测脑源性神经营养因子（BDNF）及其受体酪氨酸激酶B（TrKB）mRNA的水平。其余6只于再灌注24h后，采用HE染色法观察海马神经元形态学变化。结果与S组比较，其他三组海马P-CaMKⅡ、BDNF mRNA和TrKB mRNA的表达明显上调（P〈0.05）；与IR组比较，P组P-CaMKⅡ表达明显下调、BDNFmRNA及TrKB mRNA的表达明显上调（P〈0.05）。IR组和V组海马CA1区锥体细胞稀疏；P组海马CA1区组织破坏和细胞损伤程度减轻，细胞层次基本恢复。结论ASIC1a的阻断剂减轻大鼠全脑缺血一再灌注损伤，其机制可能与P-CaMKⅡ表达下调、BDNF及TrKB mRNA的表达上调有关。

阻断酸敏感离子通道1a对酸诱导的破骨细胞形成及其骨吸收的影响

目的观察酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a)介导酸诱导的破骨细胞形成和骨吸收的作用。方法建立巨噬细胞集落刺激因子(maerophage colony stimulating factor,M-CSF)和细胞分化因子(receptor activator of nuclear foetor-κB ligand,RANKL)体外诱导骨髓单核细胞分化为破骨细胞,慢病毒为载体转染细胞沉默ASIC1a,并通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRACP)染色和骨吸收实验检测破骨细胞的形成及其骨吸收功能,采用Western blotting法检测活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)蛋白的表达。结果阻断ASIC1a可明显抑制酸诱导的破骨细胞的形成及其骨吸收功能(P=0.000),阻断ASIC1a可抑制酸诱导的NFATc1蛋白表达(P=0.000)。结论阻断ASIC1a对酸诱导的破骨细胞形成和骨吸收具有明显抑制作用,其机制可能是抑制转录因子NFATc1蛋白的表达。

高通量筛选酸敏感离子通道1a抑制剂研究

目的建立体外稳定过表达酸敏感离子通道1a(ASIC1a)的Fisher大鼠甲状腺上皮细胞(FRT细胞),采用Ca^(2+)敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测〔乳酸脱氢酶(LDH)释放法〕测定ASIC1a活性,探讨高通量筛选ASIC1a抑制剂的可行性。方法2014年1月—2016年2月,利用分子生物学方法,构建ASIC1a过表达载体pc DNA3.1/myc-His-m ASIC1a,通过细胞转染技术建立了稳定过表达ASIC1a的Fisher大鼠FRT细胞。将细胞分成两组,对照组(FRT细胞)和实验组(稳定过表达ASIC1a的FRT细胞),并分别未负载和负载Ca^(2+)敏感荧光染料Fura-2/AM,采用酶标检测仪测定双波长(340 nm和380 nm)的值,计算F340/F380。对照组和实验组细胞经不同p H值酸液(p H值7.5、7.0、6.5、6.0、5.5)刺激后,采用酶标检测仪测定450 nm波长处LDH释放量。结果对照组与实验组未负载Fura-2/AM细胞F340/F380比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较对照组升高(P<0.05);对照组和实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较未负载Fura-2/AM细胞升高(P<0.05)。p H值6.5、6.0、5.5时,实验组细胞LDH释放量大于对照组(P<0.05);对照组和实验组细胞不同p H值时LDH释放量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功建立稳定过表达ASIC1a的FRT细胞,Ca^(2+)敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测(LDH释放法)两种方法测定ASIC1a活性,使高通量筛选ASIC1a抑制剂成为可能,为发现高选择性和高活性的天然小分子ASIC1a抑制剂奠定了基础。

酸敏感离子通道1a介导细胞内钙离子内流调节椎间盘终板软骨细胞凋亡

目的：观察酸敏感离子通道1a（ASIC1a）介导的钙离子内流在酸诱导的终板软骨细胞凋亡的作用。方法：SD培养大鼠终板软骨细胞，慢病毒为载体转染终板软骨细胞沉默ASIC1a，钙离子成像分析细胞内Ca2＋浓度（［Ca2＋］i）变化，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验分析酸诱导的细胞活力；ELISA测定凋亡率；荧光染料Hoechst 33342检测细胞凋亡。免疫印迹检测活化型半胱天冬酶-9（cleaved caspase-9）、活化型半胱天冬酶-3（cleaved caspase-3）等凋亡相关蛋白的表达。结果：阻断ASIC1a可以抑制酸诱导的［Ca2＋］i升高；用ASIC1asiRNA或PcTX1特异性阻断ASIC1a，明显抑制酸诱导的终板软骨细胞凋亡；胞外钙离子浓度降低抑制酸诱导的终板软骨细胞凋亡，与阻断ASIC1a结果一致，提示ASIC1a介导的钙离子内流在酸诱导凋亡中的作用。阻断ASIC1a，抑制酸诱导的cleaved caspase-9、cleaved caspase-3蛋白的表达。结论：酸激活的ASIC1a可能通过钙超载促使大鼠椎间盘终板软骨细胞凋亡。

酸敏感离子通道1a在酸诱导的大鼠膝关节滑膜成纤维细胞自噬中的作用及其机制研究

目的:探讨酸敏感离子通道1a(ASIC1a)在酸诱导的大鼠膝关节滑膜成纤维细胞(SFs)自噬中的作用和机制。方法:分离大鼠膝关节SFs,在不同胞外酸化条件处理后检测软骨自噬蛋白(LC3-Ⅱ)的表达。观察ASIC1a阻断剂对自噬小体数量、自噬基因(Beclin-1)mRNA的表达,自噬相关蛋白(RRK1/2、p38MAPK)磷酸化的影响;观察RRK1/2、p38MAPK磷酸化抑制剂对Beclin-1 mRNA、LC3-Ⅱ蛋白表达的影响。结果:HE染色结果证实符合SFs的特征;pH 7.4组LC3-Ⅱ蛋白表达<pH 7.0组<pH 6.5组<pH 6.0组/pH 5.5组,pH 6.0组与p H 5.5组组间比较差异无统计学意义(P>0.05),其余每两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);pH 7.4组细胞器完整且形态规则,pH 6.0组可见线粒体肿胀,且双层膜包裹的细胞自噬小体较多,pH 6.0+Amiloride组细胞质自噬小体数量稍少,细胞器形态有所恢复,pH6.0+PcTX1组细胞质自噬小体数量更高,细胞器接近正常;pH 7.4组Beclin-1 mRNA表达<pH 6.0+PcTX1组<pH 6.0+Amiloride组<pH 6.0组,每两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);pH 7.4组ERK1/2、p38MAPK磷酸化水平<pH 6.0+PcTX1组<pH 6.0+Amiloride组<pH 6.0组,每两组间对比差异均有统计学意义(P<0.05);pH 7.4组Beclin-1 mRNA和LC3-Ⅱ蛋白表达<pH 6.0+PD98059组<pH 6.0+PcTX1组<pH6.0+SB203580组/pH 6.0组,pH 6.0+SB203580组的Beclin-1 mRNA和LC3-Ⅱ蛋白与pH 6.0组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),其余每两组间对比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:胞外酸化条件可诱导大鼠膝关节SFs自噬,阻断ASIC1a能明显弱化此作用,且特异性阻断剂的效果更佳,其机制可能与调控Beclin-1基因表达,抑制ERK1/2磷酸化有关。

酸敏感离子通道1a在自身免疫性疾病发病机制中的研究进展

酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)是在外周和中枢神经系统中广泛表达的质子门控的阳离子通道,ASIC1a作为其重要的组成部分在许多生理和病理过程中起重要作用。作为细胞外质子的关键受体,ASIC1a参与涉及组织酸中毒的多种病理生理过程,如疼痛、炎症、癫痫发作、多发性硬化等。自身免疫疾病是机体在应对自身抗原发生免疫反应时,过度活化的T、B细胞导致机体多组织器官受损的慢性炎症性疾病。近年来研究发现,ASIC1a在多种自身免疫性疾病发生中发挥着重要作用,该文就ASIC1a的生物学特征作简要综述,重点探讨ASIC1a在自身免疫性疾病发病机制中的研究进展。

酸敏感离子通道1a在糖尿病鼠局灶脑缺血中的变化及意义

目的通过检测糖尿病鼠局灶脑缺血不同时间缺血周围皮层酸敏感离子通道1a(Acid-sensing ion channel1a,ASIC1a)表达变化,探讨其在糖尿病局灶脑缺血中的意义。方法 Wistar雄性大鼠72只,应用高脂饮食联合链脲佐菌素STZ制备糖尿病大鼠模型,线栓法制备单纯局灶脑缺血模型及糖尿病大鼠局灶脑缺血模型,根据缺血不同时间分为正常假手术组、单纯脑缺血1 h,3 h,6 h,24 h;糖尿病脑缺血1 h,3 h,6 h,24 h共计9组,每组8只。应用TTC染色及神经功能评分比较各组梗死面积及损伤程度;Western Blot法检测各组缺血周围皮层的蛋白表达。结果对糖尿病局灶脑缺血24 h及单纯缺血24 h大鼠进行神经评价,糖尿病组大鼠术后清醒较晚,肢体偏瘫程度重于单纯缺血组(2.60±0.591/1.80±0.837),两组相比差异显著(P<0.05);与正常假手术组相比,随着缺血时间的延长,单纯局灶脑缺血及糖尿病局灶脑缺血各组ASIC1a的表达逐渐增多(P<0.05),其中糖尿病局灶脑缺血各组ASIC1a的蛋白表达高于单纯局灶脑缺血各组(P<0.05)。结论糖尿病局灶脑缺血加重的原因可能由于皮层ASIC1a过度开放加重细胞内钙超载所致。

酸敏感离子通道ASIC1a参与细菌性前列腺炎纤维增生及免疫功能调控的作用研究

目的:探讨酸敏感离子通道1a(ASIC1a)对细菌性前列腺炎大鼠模型纤维增生及免疫功能调控的作用。方法:以SD大鼠为研究对象,实验分组包括对照组、模型组、阿米洛利组和前列倍喜组,每组15只大鼠,通过注射大肠埃希菌制备细菌性前列腺炎大鼠模型;造模7 d后,阿米洛利组给予阿米洛利1.0 mg/kg灌胃,前列倍喜组给予前列倍喜胶囊混悬液0.4 g/kg灌胃,对照组和模型组给予生理盐水,1次/d,持续4周;计算各组大鼠前列腺重量系数,免疫组化染色检测前列腺组织ASIC1a表达,HE染色检测前列腺组织病理学形态,ELISA法检测IL-1β、TNF-α、IL-2、IL-4、PSA及IgG的水平,Western blot法检测前列腺组织中TGF-β1、COX-2、MMP-2及MMP-9的蛋白表达,流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群含量。结果:与模型组比较,阿米洛利组和前列倍喜组大鼠前列腺重量系数均降低,组织内ASIC1a阳性表达率下降,前列腺组织病变得到明显改善,血清中IL-1β、TNF-α、IL-2、PSA水平均下降、IL-4水平升高,血清和组织内IgG水平下降,组织内TGF-β1、COX-2、MMP-2及MMP-9的蛋白表达水平均下调,CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)T细胞比例均升高(P<0.05)。结论:抑制ASIC1a能够改善大鼠细菌性前列腺炎组织纤维增生并对其免疫功能具有一定的调控作用。

酸敏感离子通道1a介导的激活蛋白-1在肝细胞肝癌中的表达及其与临床特征的关系

目的分析酸敏感离子通道1a（ASIC1a）及其介导的激活蛋白-1（AP-1）在肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达，以及与患者临床特征的关系。方法在转录组水平，肝癌细胞中使用表达谱芯片和生物信息学分析ASICla干扰前后下游信号通路变化。进一步借助无锡市第三人民医院2010年1月至2014年12月收治的HCC患者临床病理资料，选取63例HCC组织，42例无瘤癌旁组织。应用免疫组化染色检测ASIC1a、c—Jun、c—Fos在组织中的表达。使用非参数Spearman秩相关分析三者之间的关系。结果基因芯片和生物信息分析筛选出AP-1（由c—Jun与c—Fos组成）。蛋白印迹（Weatern blot）检测ASIC1a干扰后，干扰组c-Jun和c-Fos蛋白表达水平明显低于对照组。在HCC组织中，ASIC1a、c-Jun与c—Fos阳性率高于癌旁组织，68．3％比19．0％，55．6％比11．9％，47．6％比11．7％，差异有统计学意义（P〈0．05）。相关分析显示，ASIC1a的表达与c—Jun、c-Fos的表达呈正相关（r=0．404、0．309，P〈0．05）。ASIC1a、c—Jun和c—Fos的表达与年龄、肿瘤直径大小、性别无关（P〉0．05），与肿瘤的临床分期、AFP值以及淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论ASIC1a可能通过下游基因AP-1影响肝细胞肝癌的发生及发展。

酸敏感离子通道1a偶联内质网应激在人髓核细胞退变中的作用机制初探

[目的]模拟人椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)酸性环境,探讨酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a)的活化与内质网应激的关系。[方法]体外单层培养人正常髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)系,不同p H值培养不同时间,模拟椎间盘酸性微环境,建立酸诱导的退变髓核细胞模型。CCK-8检测细胞增殖能力。Western blot、q PCR检测内质网应激。Western blot检测ASIC1a的表达。Fura-2/AM荧光探针检测ASIC1a活化介导的Ca2+内流。流式细胞术检测ASIC1a活化后细胞凋亡率。Pc TX1(ASIC1a特异性阻断剂)阻断ASIC1a后,观察细胞凋亡及内质网应激指标变化情况。[结果]酸诱导髓核细胞凋亡,酸激活ASIC1a及内质网应激,Pc TX1能降低促凋亡的内质网应激通路和髓核细胞凋亡率(P<0.05),而未折叠蛋白反应相关指标无明显变化(P>0.05)。[结论]ASIC1a能够调控内质网应激中的促凋亡通路,阻断ASIC1能够保护酸诱导的髓核细胞凋亡。

酸敏感离子通道1a在小鼠小脑浦肯野细胞的表达

目的探讨小鼠小脑浦肯野细胞酸敏感离子通道1a（ASIC1a）的表达及意义。方法选用出生后第0，7，14，21，30天和2个月的SPF级C57BL／6小鼠，乙醚麻醉后取小脑组织制成切片，通过免疫荧光技术观察小鼠小脑浦肯野细胞ASIC1a的表达。结果出生后第0，7，14，21，30天和2个月的小鼠小脑浦肯野细胞均存在ASIC1a的表达。结论小鼠小脑浦肯野细胞存在ASIC1a的表达，对认识ASIC1a对小脑浦肯野细胞发育的作用有重要意义。

骨癌痛大鼠脊髓背角酸敏感离子通道1a表达的变化

目的探讨骨癌痛（bonecancerpain，BCP）大鼠脊髓背角酸敏感离子通道1a（acid-sensingionchannel 1a，ASIC1a）表达的变化。方法雌性未交配SD大鼠56只，体重180g-220g，采用随机数字表法分为3组：正常组（Ⅰ组，12只）、假手术组（Ⅱ组，12只）和BCP组（Ⅲ组，32只）。每组随机取8只分别于术前1d及术后3、5、7、10、14、18d测定大鼠体重和机械缩足反射阈值（pawwithdrawalmechanicalthreshold，PWMT）。Ⅰ组、Ⅱ组于术后18d测完PWMT后，Ⅲ组于术前1d及术后3、7、10、14、18d，同一时段随机处死4只大鼠，取腰段脊髓，采用Westernblot法检测ASIC1a的表达。每组于术后14d取4只大鼠，采用免疫荧光技术观察各组大鼠患侧脊髓ASIC1a和神经元免疫反应阳性产物的共表达。结果与Ⅰ组、Ⅱ组比较，Ⅲ组术后7d～18d体重降低（P〈0．01）；5dPWMT[（8．86±2A9）g]开始下降（p〈0.01），术后7[（5．17±1．26）g]、10[（2．68±0．60）g]、14[（1．85±0．98）g]、18d[（1．58±0．38）g]PWMT进一步降低（P〈0．01）；Westernblot显示，Ⅲ组术后3d开始ASIC1a表达上调（P〈0．01），于术后14d～18d达到高峰（P〈0．01）；免疫荧光发现，Ⅲ组脊髓背角ASIC1a的表达显著增加（P〈0．01），与神经元共标细胞数也相应增加（P〈0．01）。结论BCP大鼠脊髓背角神经元中ASIC1a表达增多，大鼠BCP的形成和维持可能与脊髓背角ASIC1a表达上调有关。

惊恐样行为模型小鼠中枢神经系统酸敏感离子通道1a的表达变化

目的探讨惊恐样行为模型小鼠中枢神经系统酸敏感离子通道1a（acid—sensing ionchannel 1a，ASIC1α）蛋白的表达变化。方法将20只雄性C57BL／6小鼠按照体质量随机分为两组：惊恐样行为模型组（RET组）和对照组（Ctr组），每组10只。采用大鼠暴露刺激方法建立惊恐样行为小鼠模型。记录大鼠暴露10min内小鼠的防御行为和逃避行为，采用高架十字迷宫（elevated plnsmaze，EPM）评估小鼠的焦虑水平，Western blot检测小鼠前额皮层、海马、中脑导水管周围灰质（Periaqueductal gray，PAG）ASIC1a的表达水平。结果RET组小鼠冻结反应时间[（5．83±1．92）S]较Ctr组[（1．00±0．45）s]显著增加（P〈0．01），风险评估行为[（5．33±0．49）次]较Ctr组[（0．60±0．40）次]显著增加（P〈0．01），接触铁丝网时间[（17．83±4．38）S]较Ctr组[（50．00±6．90）s]显著降低（P〈0．01），保护区停留时间[（431．00±33．13）s]较Ctr组[（264．40±40．43）s]显著增加（P〈0．01）。RET组小鼠在开放臂时间的百分比[（8．28±1．12）％]较Ctr组[（16．81±2．13）％]显著降低（P〈0．05），在闭合臂时间的百分比[（80．08±4．26）％]较Ctr组[（60．91±5．27）％]显著增加（P〈0．05）。RET组小鼠前额皮层ASIC1a（1．67±0．17）和海马区ASIC1a（1．65±0．20）表达较Ctr组[前额皮层：（0．98±0．07）；海马：（1．56±0．16）]升高，差异具有统计学意义（P〈0．05）。而PAG脑区ASIC1a（0．71±0．06）表达较Ctr组（1．26±0．05）降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论大鼠刺激引起小鼠产生惊恐样行为，同时导致小鼠前额皮层和海马区ASIC1a表达水平升高，PAG脑区ASIC1a表达水平降低。

酸敏感离子通道1a在视网膜色素上皮细胞氧化损伤过程中的作用

目的观察酸敏感离子通道1a（ASICla）在视网膜色素上皮细胞（RPE）氧化损伤过程中的作用。方法采用实时逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）以及Western blot的方法检测RPE在1mmol／LH2O2诱导的细胞氧化损伤过程中（0．5～4．0h），ASICla的表达变化；同时分别采用ASICs阻断剂amiloride和PCTxl，以及通过细胞转染ASICla，检测对该氧化损伤过程的影响，并应用噻唑蓝（MTT）比色法评价细胞的活性。结果实时RT—PCR以及Western blot的结果均显示RPE中ASICla在mRNA及蛋白水平均有表达。1mmoL／LH2O2处理RPE1、2、4h后，RPE中ASICla的蛋白表达明显降低至（70．5±11．0）％、（40．6±5．6）％和（45．6±7．6）％。PCTx1阻断ASIC1a后，RPE细胞存活率明显降低，至4h细胞存活率为（76．2±5．0）％（与对照组比较，P〈0．05），而过表达ASIC1a能够提高RPE氧化损伤过程中细胞的存活率，与H2O2处理组比较，4h组为（38．0±6．0）％比（16．2±2．0）％（P〈0．05）。结论ASIC1a在RPE中具有表达并对RPE的氧化损伤具有一定的细胞保护作用。

酸敏感离子通道-1a在急性肺损伤大鼠肺组织中的表达及作用初探

目的 探讨酸敏感离子通道-1a(ASIC1a)在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠肺组织中的表达及可能的作用。方法 SPF级♂SD大鼠32只,随机分为正常组、ALI组、阿米洛利组和阳性药物组。对动脉血进行血气分析,观察肺组织病理学,肺组织称重后计算湿干重比,ELISA检测血清中TNF-α的表达,qPCR和Western blot检测肺组织中ASIC1a的表达。结果 与正常组相比,模型组肺组织损伤明显;肺组织湿干重比明显升高;TNF-α的表达水平明显升高(P<0.01)。阿米洛利组及阳性药物组肺组织损伤明显减轻;肺组织湿干重比较模型组明显下降,TNF-α的表达水平明显降低(P<0.01)。免疫组化、qPCR和Western blot结果显示,与正常组相比,模型组ASIC1a的表达量明显升高(P<0.01),阿米洛利组与模型组相比,ASIC1a的表达量明显减少(P<0.01)。结论 在脂多糖诱导的ALI大鼠肺组织中ASIC1a的表达增加,其可能参与ALI的发生、发展。

内皮祖细胞移植对百草枯中毒致急性肺损伤小鼠酸敏感离子通道-1a的影响

目的探讨内皮祖细胞(EPCs)移植对百草枯(PQ)中毒所致的急性肺损伤(ALI)小鼠的作用机制。方法采用密度梯度离心联合贴壁培养法分离培养小鼠外周血EPC,为后期移植提供供体细胞。应用腹腔注射法建立百草枯所致的急性肺损伤(PQ-ALI)小鼠模型,建模成功后小鼠分为四组:正常对照组、模型组、PQ损伤组、EPCs治疗组(每组9只),移植后48 h处死小鼠并取肺组织,检测肺组织湿干质量(W/D)比值、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)含量及肺组织中酸敏感离子通道-l a(ASICla)的表达。结果①正常对照组与模型组比较小鼠肺W/D无明显变化(两者W/D比值分别为3.72、3.67),差异无统计学意义(P>0.05);PQ损伤组小鼠肺组织W/D比值为9.80,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);尾静脉E PC移植后(EPCs组)可以明显降低小鼠肺组织W/D比值,其值为4.91,与P Q损伤组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②正常对照组及模型组中TNF-a分别为226 n g/L和204 n g/L,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);PQ损伤组小鼠肺组织中TNF-a为382 ng/L明显增高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);EPCs治疗组小鼠肺组织TNF-a为276 n g/L呈下降趋势,与P Q损伤组比较差异有统计学意义(P<0.05)。③PQ损伤组和EPCs治疗组小鼠肺组织中ASICU的表达量分别为1.73和1.12,均较正常对照组ASICla的表达量(0.56)明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);EPCs治疗组小鼠肺组织中ASICla的表达量低于PQ损伤组(P<0.05);模型组小鼠ASICla的表达量为0.54和治疗对照组小鼠肺组织中ASICla的表达量最少,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PQ-ALI小鼠模型机制可能和ASICla激活有关,EPC移植可改善PQ中毒所致ALI小鼠状态,可能和下调ASIC1a的表达相关,但具体机制尚未清楚。

TWIK相关酸敏感钾离子通道在呼吸与睡眠调节中的研究进展

TWIK相关酸敏感钾离子通道(TASK)-1和TASK-3是双孔钾离子通道家族的重要成员,广泛表达于中枢神经系统和外周组织,对缺氧和细胞外液p H值变化极为敏感。TASK参与呼吸中枢的表达及呼吸运动的调节,同时在睡眠调节中也可发挥一定作用,本文总结了TASK在呼吸与睡眠调节中的相关研究进展。