中心组合设计-响应面法优选酸枣仁总皂苷的提取工艺研究

目的优选酸枣仁中酸枣仁总皂苷的最佳提取工艺。方法采用紫外分光光度法检测酸枣仁总皂苷含量,运用中心组合设计-响应面法研究乙醇浓度、液固比、提取时间对酸枣仁皂苷提取的影响,SAS软件建立预测模型,响应面法分析最佳提取条件。结果优选得到最佳提取工艺为14倍量75%乙醇回流提取2次,每次2h。验证实验结果酸枣仁总皂苷平均含量为34.26 mg/g。结论 中心组合设计-响应面法优选酸枣仁总皂苷提取工艺的可信度高,皂苷含量验证实验检测值与模型预测值接近,模型预测性好,工艺稳定,可为酸枣仁总皂苷的工业化提取生产提供科学依据。

酸枣仁总皂苷对老年阴血亏虚型失眠证候模型大鼠脑组织Glu及GABA含量的影响

目的观察酸枣仁总皂苷对老年阴血亏虚型失眠证候模型大鼠脑组织谷氨酸(Glu)及γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响。方法用D-半乳糖致衰老、环磷酰胺及氢化可的松致阴血亏虚,及自制改良多平台法剥夺睡眠,制作老年阴血亏虚型失眠证候大鼠复合模型,采用高效液相色谱法检测环境对照组、证候模型组和酸枣仁总皂苷大、小剂量组大鼠大脑皮层及下丘脑Glu及GABA含量的变化。结果与环境对照组比较,证候模型组睡眠剥夺48h后,大鼠大脑皮层及下丘脑Glu及GABA含量均明显升高,且Glu/GABA比例增高,经酸枣仁总皂苷干预后Glu和GABA均明显下降(P<0.01,P<0.05),且趋于正常范围。结论酸枣仁总皂苷能减少老年阴血亏虚型失眠证候模型大鼠脑内兴奋性氨基酸毒性作用,减轻Glu、GABA参与的迟发性神经元损害。

基于UHPLC-Q-Exactive-MS/MS的酸枣仁总皂苷对失眠大鼠血清代谢物的影响

目的采用代谢组学技术观察酸枣仁总皂苷对失眠大鼠血清代谢物的影响,探讨其改善失眠的作用机制。方法30只大鼠随机分为对照组、模型组和酸枣仁总皂苷组(ZSSS组),每组10只。连续3 d腹腔注射对氯苯丙氨酸建立失眠大鼠模型,造模后ZSSS组灌胃酸枣仁总皂苷溶液(124.8 mg/kg),对照组和模型组灌胃等量生理盐水,连续7 d。观察大鼠一般状态;戊巴比妥钠睡眠实验观察大鼠睡眠潜伏期和睡眠时间;HE染色观察下丘脑组织病理变化;超高效液相色谱-四级杆高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive-MS/MS)联用技术建立血清代谢组学分析方法,结合主成分分析、正交偏最小二乘判别分析筛选潜在差异代谢物,采用Metabo Analyst 5.0数据库和Cytoscape3.8.2软件分析相关代谢通路并构建代谢网络。结果与对照组比较,模型组大鼠昼夜节律紊乱,出现疲劳、精神不振和活动减少现象,睡眠潜伏期显著延长(P<0.05),睡眠时间显著缩短(P<0.05),下丘脑组织神经细胞边界模糊,排列松散,有大量碎片细胞;与模型组比较,ZSSS组大鼠兴奋性降低,攻击行为减少或消失,昼夜节律有所恢复,睡眠潜伏期显著缩短(P<0.05),睡眠时间显著延长(P<0.05),下丘脑组织神经细胞较丰富,分布较均匀,细胞形态明显恢复。模式识别分析筛选出8个与酸枣仁总皂苷治疗失眠相关的潜在差异代谢物,涉及烟酸和烟酰胺代谢、甘油磷脂代谢及酪氨酸代谢3条通路,GPCPD1、PNPLA6和PLB1等可能是其改善失眠的作用靶点。结论酸枣仁总皂苷能改善失眠大鼠睡眠情况,其作用机制与调节1-甲基烟酰胺、甘油磷酸胆碱、乙酰胆碱和3,4-二羟基苯乙二醇等代谢有关。

酸枣仁总皂苷对缺血再灌注损伤大鼠心律失常的影响及其机制

目的:研究酸枣仁总皂苷对缺血再灌注损伤大鼠心律失常和心肌组织的保护作用及其对氧自由基的影响。方法:将24只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和酸枣仁总皂苷组(20mg.kg-1.d-1),采用结扎(15min)和松开(60min)左冠状动脉前降支的方法制备用心肌缺血再灌注损伤模型。记录再灌注60min期间II导联心电图,并对心律失常进行评分;常规HE染色观察心肌组织的病理改变;检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,心肌组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:模型组中心肌组织病理损伤及心律失常发生明显,LDH活性及MDA含量显著升高(P<0.01),SOD活性显著下降(P<0.01)。与模型组比较,酸枣仁总皂苷干预后,心肌组织病理改变减轻,心律失常评分显著降低(P<0.01),LDH活性及MDA含量显著下降(P<0.01),SOD活性显著提高(P<0.01)。结论:酸枣仁总皂苷A对缺血再灌注损伤大鼠心律失常具有保护作用,其机制可能与其抗氧自由基有关。

酸枣仁总皂苷对失眠老年大鼠脑氨基酸类神经递质及受体表达的影响

目的:观察酸枣仁总皂苷对老年阴血亏虚证失眠大鼠脑组织谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)及GABA A受体表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为空白对照组(等容生理盐水),模型组(老年阴血亏虚证失眠组,等容生理盐水),阳性对照组(安定0.18 mg·kg-1·d-1),酸枣仁总皂苷低、高剂量组(15,30 g·kg-1·d-1)。用D-半乳糖致亚急性衰老、环磷酰胺及氢化可的松致阴血亏虚,及自制改良多平台法剥夺快动眼睡眠(REM)48 h,制作阴血亏虚证候失眠老年大鼠模型。造模后各组灌胃给药3周,采用高效液相法检测脑皮质、海马部位Glu,GABA含量;免疫组化染色及RT-PCR法检测脑皮质、海马部位GABA A R的表达变化,并考察酸枣仁总皂苷对这些指标的影响。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠脑皮质及海马Glu,GABA含量显著升高(P<0.01,P<0.05),且Glu/GABA增高;脑皮质及海马部位的GABA A R免疫化学累积吸光度明显较高(P<0.01);皮质部位GABA A R mRNA的表达均显著上调(P<0.01),经酸枣仁总皂苷干预后各指标明显下降(P<0.01,P<0.05)。结论:酸枣仁总皂苷治疗阴血亏虚证老年失眠的机制可能与减少脑内氨基酸毒性作用,下调大脑皮质及海马部位GABA A R的表达有关。

酸枣仁总皂苷改善对氯苯丙氨酸诱导失眠大鼠模型学习记忆损伤机制的研究

目的基于代谢组学技术考察酸枣仁总皂苷(total saponins of Ziziphi Spinosae Semen,SZSS)对失眠大鼠内源性代谢物的影响,并探讨酸枣仁总皂苷改善学习记忆的药效及其作用机制。方法采用对氯苯丙氨酸(DL-4-chlorophenylalanine,PCPA)诱导大鼠失眠模型,给予地西泮和酸枣仁总皂苷干预后,进行旷场实验及Morris水迷宫实验;采用苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织病理变化;采用ELISA测定海马组织5-羟色氨(5-hydroxytryptamine,5-HT)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)及NO(nitric oxide,NO)水平。利用UPLC-Orbitrap-MS/MS技术对大鼠海马组织代谢轮廓进行分析,结合多元统计分析筛选差异性代谢物,并基于MetaboAnalyst 5.0数据库进行代谢通路及代谢网络分析,多角度探讨酸枣仁总皂苷改善学习记忆的代谢特征及作用途径。结果与模型组比较,酸枣仁总皂苷组大鼠学习能力显著提高(P<0.05、0.01),海马组织病理结构明显改善,海马组织中5-HT、GABA及NO水平显著升高(P<0.05、0.01);代谢组学共鉴定出18种与学习记忆损伤相关的潜在生物标志物,酸枣仁总皂苷主要通过苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸等7条主要氨基酸代谢通路发挥改善记忆损伤的作用。结论酸枣仁总皂苷能够通过回调海马组织内源性差异代谢物,并调控相关氨基酸代谢通路,从而改善失眠引起学习记忆减退。

酸枣仁总皂苷对过氧化氢损伤心肌细胞的保护作用及机制研究

目的观察酸枣仁总皂苷对过氧化氢损伤心肌细胞的保护作用及其机制。方法采用差速贴壁法分离培养1～3 d Wistar新生乳鼠心肌细胞,以过氧化氢作用心肌细胞建立氧化损伤模型,将培养72 h的原代心肌细胞,选择搏动良好、生长密度无明显差异的细胞按孔随机分为以下4组:①空白对照组:细胞培养过程中不给予任何处理;②模型组:心肌细胞培养基中加终浓度为400μmol.L-1过氧化氢作用4 h;③酸枣仁总皂苷治疗组:操作同模型组,造模前予酸枣仁总皂苷(20 mg.L-1)干预24 h;④蛋白激酶C抑制剂组:操作同治疗组,但在造模前5 min予白屈菜红碱(5μmol.L-)1。倒置显微镜观察心肌细胞形态学变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫印迹技术检测心肌细胞膜蛋白中蛋白激酶C Eplison亚型(PKCε)的表达。结果与空白对照组比较,模型组经400μmol.L-1过氧化氢作用4 h后,细胞核暗淡,伪足显著变细,细胞间连接明显减少,搏动节律减慢,细胞活力显著下降(P<0.001),细胞凋亡率显著增高(P<0.001),PKCε的表达差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,酸枣仁总皂苷能使心肌细胞形态明显改善,显著提高细胞活力、降低细胞凋亡率及升高PKCε的表达,差异有统计学意义(P<0.001)。PKC抑制剂白屈菜红碱可显著减弱酸枣仁总皂苷的保护作用,差异有统计学意义(P<0.01)。结论酸枣仁总皂苷对过氧化氢损伤大鼠心肌细胞具有保护作用,其机制可能与激活PKCε有关。

酸枣仁治疗卒中后失眠药理机制及研究进展

卒中是常见的脑血管疾病之一,卒中后失眠是卒中后发病率较高的并发症,主要临床表现为卒中后出现的入睡困难、易醒、早醒等症状,其发病机制复杂且尚不完全明确,现有研究显示其与解剖部位、神经生物学因素及机体整体功能状态和社会心理学等因素有关。神经生物学因素中包含炎症介质、神经递质、脑血流量、血容量、下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能等的变化,长期的卒中后失眠严重时会引起脑血管疾病的复发,对患者的基本日常生活产生了很大的影响,中医认为卒中后失眠是中风与不寐的合病,归属于“不寐”范畴。营卫失衡、阴阳失交、气血失调、神失所司均可导致卒中后失眠。而酸枣仁作为临床中常用的中药,具有养心补肝、宁心安神、敛汗、生津止渴之功用。通过对唐宋时期医家及李济仁国医大师、闫咏梅教授等医家的临床用药规律总结,发现酸枣仁是临床上治疗卒中、卒中后睡眠障碍用药频率最高的单味中药之一,通过大量的临床及实验研究发现酸枣仁的养心安神功效确切,现代研究发现,酸枣仁的主要成分有三萜皂苷类、黄酮类、生物碱类及脂肪酸类等,其具有镇静催眠、抗抑郁、抗氧化、抗肿瘤、抗心律失常、抗心肌缺血等作用。临床上经常用于治疗失眠、焦虑、抑郁等情感障碍类精神疾病以及心血管疾病,该文对酸枣仁有效成分的药理作用及其治疗卒中后失眠的药理机制进行综述,并对酸枣仁的炮制及药对进行归纳梳理,明确酸枣仁对卒中后失眠的重要作用,以提供卒中后失眠的最佳用药选择。