基于UPLC-Q-TRAP-MS分析养心安神药对酸枣仁-五味子配伍煎煮前后10个指标成分含量变化

目的分析养心安神药对酸枣仁-五味子配伍煎煮前后主要指标成分差异变化,并建立含量测定方法。方法采用Welch Ultimate XB-C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,5μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,流速0.4 mL/min柱温40℃,梯度洗脱;质谱采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测离子扫描模式(MRM)。分别对该药对单煎液、单煎合并液与合煎液中主要指标成分酸枣仁皂苷A、斯皮诺素、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、芦丁、槲皮素、山柰酚、山柰酚-3-O-云香糖苷进行含量测定,并分析药对配伍前后主要指标成分的含量变化差异。结果以上10种成分在一定浓度范围内均呈现良好的线性关系;精密度、重复性和稳定性RSD均良好;平均加样回收率在95.0%~102.1%,RSD为0.03%~3.7%。本次实验结果与前期试验认为酸枣仁与五味子在合煎后,主要指标成分降低保持一致性。结论多指标成分同时测定为该药对配伍质量全面控制提供新的方法并为其药效物质基础的深入研究提供依据。

酸枣仁-五味子药对抗焦虑药效及网络药理学机制分析研究

目的:明确酸枣仁-五味子对孤养结合束缚应激(RS)模型大鼠的抗焦虑药效,并预测酸枣仁-五味子药对配伍后治疗焦虑症的作用靶点和信号通路。方法:采用RS模型大鼠,设置空白组、模型组、阳性药组、酸枣仁组、五味子组、酸枣仁-五味子合煎液组,通过旷场实验和高架十字迷宫实验对酸枣仁-五味子药对配伍前后治疗焦虑症的药效学进行评价;并对大鼠脑内神经递质、脑源性神经营养因子含量进行测定。通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和文献挖掘获得酸枣仁、五味子主要化学成分,通过SwissTargetPrediction平台预测药物相关靶点,利用GeneCards、TTD、DisGeNET、OMIM数据库获得焦虑症的潜在靶点。取药物-疾病交集基因,再利用STRING构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。根据拓扑学参数筛选酸枣仁、五味子配伍后治疗焦虑症的关键靶点。通过DAVID进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。利用Cytoscape 3.8.0构建药物-活性成分-疾病-靶点-通路网络。结果:药效学实验结果显示,与空白组相比,模型组可造成大鼠焦虑;与模型组相比,酸枣仁-五味子药对明显增加RS模型大鼠进入旷场中央区的次数及停留时间(P<0.05),显著增加大鼠进入开臂次数的百分比(P<0.01);明显降低模型大鼠脑内5-羟色胺(5-HT)的含量(P<0.05);明显提高模型大鼠脑内多巴胺(DA)的含量(P<0.05),显著提高脑源性神经营养因子(BDNF)的含量(P<0.01);但对γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、Glu/GABA、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和皮质酮(CORT)含量没有显著影响。网络药理学结果显示,药物-活性成分-疾病-靶点-通路网络中包含酸枣仁、五味子有效成分13个,有酸枣仁碱、当药黄素、胡萝卜甾醇、五味子乙素、五味子丙素、戈米辛A等,潜在作用靶点148个,包括Akt丝氨酸/苏氨酸激酶1(Akt1)、肿瘤坏死因子(TNF)、钠依赖型5-HT转运蛋白(SLC6A4)、钠依赖型多巴胺转运蛋白(SLC6A3)等,主要涉及的通路包括神经递质配体-受体相互作用通路、含血清素神经突触信号通路、环磷酸腺苷(cAMP)信号通路、环磷酸鸟苷酸-环磷酸鸟苷酸效应蛋白激酶G(cGMP-PKG)信号通路,还涉及与激素调节相关的通路,如雌激素信号通路、促性腺激素分泌通路、催乳激素信号通路。结论:酸枣仁-五味子药对配伍后抗焦虑药效显著,其抗焦虑作用机制与调节5-HT、DA、BDNF等含量,调控多条信号通路密切相关。本研究为酸枣仁-五味子药对治疗焦虑症的临床应用提供了理论和实验依据。

酸枣仁-五味子药对提取工艺研究

目的优选酸枣仁-五味子药对的最佳提取工艺。方法采用正交试验法,以酸枣仁-五味子药对中五味子醇甲含量和水提浸膏得率为指标,采用超高液相色谱法测定五味子醇甲含量,考察加水量、提取时间、提取次数对水提取工艺的影响。结果最佳提取工艺为加10倍药材量的水,煎煮3次,每次1.5 h。结论优选的提取工艺稳定、可行。

酸枣仁-五味子药对配比筛选及半仿生提取工艺研究

目的筛选酸枣仁-五味子药对镇静催眠作用的最佳配比,并优化该比例药对的半仿生提取工艺。方法50只小鼠随机分为空白组,阳性药组,酸枣仁-五味子(15 g:6 g组、12 g:6 g组)、6 g:6 g组,每组10只。空白组给予蒸馏水,阳性药组给予0.13%艾司唑仑水溶液,给药组给予相应配比混悬液。腹腔注射不同剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠,记录各组小鼠入睡情况、睡眠潜伏期和睡眠持续时间改变,测定各组小鼠脑组织液中γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、5-羟色胺(5-HT)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量的变化筛选最佳配比;并以GABA和5-HT的综合评分为响应值,通过Box-Behnken响应面法筛选半仿生提取的最佳工艺。结果与空白组比较,阳性药组、15 g∶6 g组以及6 g∶6 g组小鼠睡眠潜伏期明显缩短、睡眠持续时间明显延长(P<0.05或P<0.01);与阳性药组比较,12 g∶6 g组睡眠潜伏期明显延长(P<0.05);与15 g∶6 g组比较,12 g∶6 g组睡眠潜伏期明显延长(P<0.05)。与空白组比较,阳性药组和15 g∶6 g组小鼠脑内GABA含量增加、Glu和Gln含量减少(P<0.05或P<0.01)。与阳性药组比较,12 g∶6 g组和6 g∶6 g组GABA含量减少、Glu和Gln含量增加(P<0.05)。与15 g∶6 g组比较,12 g∶6 g组GABA含量减少;6 g∶6 g组Gln含量增加(P<0.05)。与空白组比较,阳性药组、15 g∶6 g组、12 g∶6 g组和6 g∶6 g组的5-HT含量增加(P<0.05或P<0.01)。与阳性药组比较,12 g∶6 g组5-HT含量减少(P<0.05)。与15 g∶6 g组比较,12 g∶6 g组5-HT含量减少(P<0.05)。与空白组比较,阳性药组5-HIAA含量减少(P<0.05)。与阳性药组比较,15 g∶6 g组、12 g∶6 g组以及6 g∶6 g组5-HIAA含量增加(P<0.05或P<0.01)。半仿生提取最佳工艺为第1次提取人工胃液用量的9.5倍,时间2.5 h;第二次提取人工肠液用量的6.0倍,时间3.6 h。结论酸枣仁-五味子镇静催眠作用以15 g∶6 g配比(对应人体日给药量)疗效最佳,在此最佳配比条件下筛选的半仿生提取工艺可靠,可操作性强。

基于超高效液相色谱-蒸发光散射检测技术优选炒酸枣仁-醋五味子药对最佳配伍比例

目的通过超高效液相色谱-蒸发光散射检测技术测定不同配伍比例炒酸枣仁-醋五味子药对中酸枣仁皂苷A含量,优选最佳配伍比例,为临床用药提供参考。方法设置不同剂量配比的炒酸枣仁-醋五味子药对(1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1),采用Acquity UPLC BEHC18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),蒸发光散射检测器,乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL/min,柱温30℃,进样量1μL,酸枣仁皂苷A色谱峰与相邻色谱峰的分离度不低于1.5,测定药对中酸枣仁皂苷A含量。结果酸枣仁皂苷A在0.01005~0.1005μg范围内呈良好线性关系,回归方程为Y=1276209.88891X-162396.86301(r=0.99993),重复性、稳定性和回收率良好。上述9个不同配伍比例炒酸枣仁-醋五味子药对的酸枣仁皂苷A浓度依次为0.0159、0.0153、0.0169、0.0114、0.0137、0.0132、0.0184、0.0146、0.0103 mg/mL。结论本研究揭示炒酸枣仁-醋五味子配伍比例为7∶3时酸枣仁皂苷A含量最高,可为临床养心安神治法遣方用药提供依据。

酸枣仁-五味子药对镇静催眠作用及机制研究

目的:观察酸枣仁-五味子药对醇水双提物的镇静催眠作用,探讨其治疗失眠的可能机制。方法:各组小鼠采用腹腔注射阈剂量戊巴比妥钠来研究酸枣仁-五味子"药对"醇水双提物对小鼠睡眠时间的影响,各组小鼠分别灌胃给药,每天1次,连续14天。各组大鼠采用对氯苯丙氨酸(PCPA)腹腔注射的方法诱导失眠大鼠模型,每天1次,连续注射2天,于造模第3天起,给药组分别灌胃相应的受试药物,正常组和模型组灌胃等量的生理盐水,疗程7天,观察大鼠一般形态学及体重变化;HE染色观察下丘脑组织病理学改变;酶联免疫吸附法(ELISA)法测定下丘脑组织中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;RT-PCR测定5-HT1A受体mRNA的表达。结果:与正常组小鼠相比,醇水双提物中、高剂量组(8、16g/kg)均能显著延长睡眠时间;与模型组相比,酸枣仁-五味子药对醇水双提物组(5.5、11g/kg)不仅可显著降低大鼠下丘脑内DA、NE含量,还可使5-HT、IL-lβ含量明显增高,5-HT1A受体mRNA表达上升。结论:酸枣仁-五味子药对醇水双提物具有一定镇静催眠作用,其机制可能与调节单胺类神经递质有关。