蒜氨酸靶向调控表皮生长因子受体和犬尿氨酸酶治疗类风湿性关节炎的分子机制

背景:蒜氨酸作为大蒜中的主要活性成分具有抗炎和抗氧化作用,但蒜氨酸改善类风湿性关节炎的作用和机制仍不清楚。目的:利用基因表达数据分析类风湿性关节炎的差异表达基因,探讨蒜氨酸在类风湿性关节炎中的调控作用。方法:从GSE45291和GSE93777数据集中收集类风湿性关节炎的基因表达数据,进行差异表达分析。对两套数据中的共同差异表达基因进行共表达网络分析,识别与类风湿性关节炎相关性最高的模块基因,进行功能富集分析。通过SwissTargetPrediction数据库预测蒜氨酸的靶向调控基因,并与差异表达基因行交集分析,计算差异表达靶基因的受试者工作特征曲线下面积。将人永生化类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞接种于孔板内培养24 h后分5组处理:对照组不进行任何处理,阳性药组加入甲氨蝶呤,蒜氨酸低、中、高质量浓度组分别加入20,80,160μg/mL的蒜氨酸,处理48 h后,CCK-8法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡,ELISA法检测氧化应激和炎症因子水平,JC-1法检测线粒体膜电位变化,RT-qPCR和Western Blot检测靶基因及相关信号通路的表达。结果与结论:(1)在GSE45291和GSE93777数据集中共鉴定出6 487个共同的差异表达基因,并获得了12个共表达模块,magenta模块与类风湿性关节炎的相关性最高,模块基因主要富集于磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路。(2)通过数据库预测发现7个差异表达基因被蒜氨酸靶向调控,其中表皮生长因子受体在GSE45291数据集中的受试者工作特征曲线下面积值最大,犬尿氨酸酶在GSE93777数据集中的受试者工作特征曲线下面积值最大。(3)与对照组比较,其他4组类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞活性降低,细胞凋亡数量增加,活性氧、丙二醛、白细胞介素6、白细胞介素1β水平均降低,线粒体膜电位均升高,表皮生长因子受体、犬尿氨酸酶、线粒体动力相关蛋白1mRNA与蛋白表达均降低,线粒体融合蛋白2 mRNA与蛋白表达均升高,p-AKT、p-PI3K蛋白表达均升高。(4)结果表明,蒜氨酸通过调控表皮生长因子受体和犬尿氨酸酶等靶基因发挥潜在的类风湿性关节炎治疗作用。

血清同型半胱氨酸与IgA肾病临床病理的相关性分析

目的探讨血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)与IgA肾病临床病理因素的相关性。方法回顾性分析2014年1月1日至2023年10月31日在上海中医药大学附属龙华医院肾病一科行肾穿刺活检确诊为IgA肾病的患者349例。按Hcy正常组和高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)组对患者的临床病理指标进行比较。Spearman法分析估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)和病理指标与Hcy的相关性,Logistic回归分析与HHcy相关的临床病理因素,受试者工作特征曲线下面积(area under curve,AUC)评估Hcy预测相关病理损伤的能力。结果HHcy组患者男性比例(63.1%比32.7%)、年龄[(40.44±12.85)岁比(36.83±11.56)岁]、白蛋白[(38.14±4.71)g/L比(36.28±6.65)g/L]、血肌酐[(125.90±75.89)μmol/L比(75.39±29.16)μmol/L]、尿素[(7.61±4.01)mmol/L比(5.29±1.78)mmol/L]、尿酸[(427.04±101.99)μmol/L比(351.56±93.45)μmol/L]、胱抑素C(cystatin C,Cys C)[(1.61±0.66)mg/L比(1.05±0.36)mg/L]水平均高于Hcy正常组,eGFR水平[(70.50±30.90)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))^(-1)比(100.35±27.08)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))^(-1)]低于Hcy正常组,而肾小管萎缩与肾间质纤维化(T)(T1/2:42.5%比16.3%)以及肾小动脉管壁增厚(A)(A1/2:73.8%比49.5%)的程度较Hcy正常组重(P均<0.05)。Spearman分析显示Hcy水平与eGFR呈负相关,与T和A呈正相关(P均<0.05)。Logistic回归显示性别、白蛋白、血肌酐、Cys C、T和A与HHcy存在相关性(P均<0.05)。Hcy预测T和A的AUC分别为0.751(95%CI:0.699~0.803)和0.625(95%CI:0.565~0.685)(P均<0.05),最佳临界点分别为15.04μmol/L和13.11μmol/L。结论肾活检时Hcy水平与IgA肾病患者性别、白蛋白、血肌酐、Cys C、T和A相关。Hcy可从一定程度上判断上述病理损伤的严重程度。

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂联合化疗一线治疗表皮生长因子受体突变晚期非小细胞肺癌疗效及安全性的Meta分析

背景表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)的靶向治疗已成为表皮生长因子受体(EGFR突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的规范治疗方案,但临床发现了不可避免的原发性或继发性耐药最终导致了疾病进展。为此,寻找早期预测有效人群的标志物和探索延长或逆转继发性耐药的优化治疗方案成为国内外研究重点。目的依据国内外文献数据系统评价EGFR-TKI联合化疗一线治疗EGFR突变晚期NSCLC的疗效及安全性。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library数据库发布的有关EGFR-TKI联合化疗对比单药EGFR-TKI一线治疗EGFR突变晚期NSCLC患者疗效及安全性的随机对照试验,检索时间为建库至2023年11月。由2名研究者独立筛选文献、提取数据并评价纳入研究的偏倚风险,对无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)、客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)以及≥3级不良反应等数据收集和分析。基于基线临床特征进行亚组分析,使用RevMan 5.4.1版本进行数据统计分析。结果纳入符合条件的10项研究,共2029例患者,其中EGFR-TKI联合化疗组1049例患者,单纯EGFR-TKI组980例患者。Meta分析结果显示,与单纯EGFR-TKI组相比,EGFR-TKI联合化疗组可延长EGFR突变晚期NSCLC患者的PFS(HR=0.54,95%CI=0.49~0.60,P<0.00001)和OS(HR=0.69,95%CI=0.59~0.79,P<0.00001)。与单纯EGFR-TKI组相比,EGFR-TKI联合化疗组可提高EGFR突变晚期NSCLC患者的ORR(OR=1.95,95%CI=1.57~2.42,P<0.00001)和DCR(OR=1.76,95%CI=1.13~2.74,P=0.01)。在伴随脑转移的患者中,与单纯EGFR-TKI治疗相比,EGFR-TKI联合化疗延长EGFR突变晚期NSCLC患者的PFS(HR=0.42,95%CI=0.34~0.52,P<0.00001)和OS(HR=0.69,95%CI=0.51~0.94,P=0.02)。在基线无脑转移的患者中,与单纯EGFR-TKI治疗相比,EGFR-TKI联合化疗延长EGFR突变晚期NSCLC患者的PFS(HR=0.62,95%CI=0.53~0.72,P<0.00001)。EGFR-TKI联合化疗治疗EGFR突变晚期NSCLC患者的≥3级不良反应发生率高于单纯EGFR-TKI治疗(OR=4.25,95%CI=2.74~6.61,P<0.00001)。结论EGFR-TKI联合化疗可显著延长EGFR突变晚期NSCLC患者的一线PFS及OS,尤其是基线脑转移患者;但不良反应发生率增加,尤其是≥3级血液学相关毒副作用发生率,整体是安全可控的。

血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和可溶性血管内皮生长因子受体-1水平与突发性耳聋患者病情及预后的关系分析

目的探讨血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFIt-1)水平与突发性耳聋患者病情及预后的关系。方法选取2022年1月至2024年1月陕西省人民医院收治的78例突发性耳聋患者作为研究组。男46例,女32例;年龄32~76(47.92±4.65)岁;体重指数20.37~27.94(24.57±3.24)kg/m^(2)。另外,选取同期38例体检健康志愿者作为参照组,男21例,女17例,年龄34~63(48.23±4.81)岁;体重指数19.86~22.51(20.87±2.39)kg/m^(2)。采用纯音测听检查评估突发性耳聋患者病情,并根据严重程度进行分组,重度组16例[纯音平均听阈(PTA)>60 dBHL]、中度组39例(PTA>40~60 dBHL)、轻度组23例(PTA 20~40 dBHL)。所有患者均给予激素、营养神经等治疗,10 d为1个疗程,10 d后评估患者预后。根据预后情况将治疗后突发性耳聋患者分为预后良好组(57例)和预后不良组(21例)。采用酶联免疫吸附法检测受试者血清Caspase-3、sFIt-1水平。收集受试者一般资料,包括性别、年龄、体重指数、病程、临床症状、耳聋部位、听力损失程度、基础疾病等。采用独立样本t检验、重复测量方差分析和χ2检验进行统计学分析。采用Spearman秩相关系数进行相关性分析。采用多因素logistic回归分析突发性耳聋患者预后的影响因素。采用受试者操作特征曲线(ROC)分析血清Caspase-3、sFIt-1水平对突发性耳聋患者预后的预测效能。结果研究组血清Caspase-3、sFIt-1水平均高于参照组[(17.27±3.14)ng/L比(6.63±1.67)ng/L、(157.82±13.47)ng/L比(81.67±10.63)ng/L](均P<0.05)。重度、中度组Caspase-3、sFIt-1水平均高于轻度组,重度组上述指标均高于中度组(均P<0.05)。Spearman相关性分析显示,突发性耳聋患者血清Caspase-3、sFIt-1水平与病情严重程度呈正相关(r=0.881、0.841,均P<0.05)。预后不良组和预后良好组年龄、听力损伤程度、血清Caspase-3、sFIt-1水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,听力损失程度(OR:0.009,95%CI:0.000~0.209)、年龄(OR:1.165,95%CI:1.049~1.293)、血清Caspase-3(OR:1.546,95%CI:1.183~2.022)、sFIt-1(OR:1.058,95%CI:1.015~1.104)水平均是突发性耳聋患者预后的影响因素(均P<0.05)。ROC分析结果显示,血清Caspase-3、sFIt-1水平联合预测的曲线下面积(AUC)大于血清Caspase-3、sFIt-1水平单独预测。其中联合预测灵敏度66.67%,特异度87.72%,AUC为0.819(0.712~0.925);Caspase-3灵敏度52.38%,特异度82.46%,AUC为0.721(0.593~0.849);sFIt-1灵敏度52.38%,特异度84.21%,AUC为0.703(0.573~0.832)。结论血清Caspase-3、sFlt-1水平升高可反映突发性耳聋患者病情严重程度,二者联合检测可更准确评估患者预后情况。

氨己烯酸治疗婴儿痉挛症颅脑MRI异常表现及分析

目的总结氨己烯酸(vigabatrin,VGB)治疗婴儿痉挛症过程中相关颅脑MRI异常的特点。材料与方法回顾性分析2019年7月至2023年5月就诊于解放军总医院第一医学中心,口服VGB治疗并出现颅脑影像学改变的婴儿痉挛症患儿,分析其基线影像学特点及随访影像学特点。结果共收集32例婴儿痉挛症患儿,年龄(10.34±0.86)个月。颅脑MRI表现:21例累及双侧丘脑、脑干(背侧)、苍白球、小脑齿状核,呈对称性分布;9例累及双侧海马,1例累及单侧海马,1例累及双侧壳核及尾状核头。各序列对病变的检出率为:磁共振扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)序列100.0%,表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)序列50.0%,T2WI序列46.9%,T2液体衰减反转恢复(fluid attenuated inversion recovery,FLAIR)序列25.0%,T1WI序列25.0%。经过回归分析结果显示,典型与不典型VGB相关头颅MRI异常(vigabatrin-associated brain abnormalities on MRI,VABAM)的表现与性别、年龄、病因、VGB峰值剂量、MRI检查时VGB剂量、新发临床症状等多种临床因素无关,P值分别为0.888、0.924、0.955、0.360、0.058、0.636。10例患儿随访时1例原异常信号完全消失,5例减轻,1例变化不大,3例异常信号较前明显。发现MRI异常时,2例新出现锥体外系为主的症状,停药后患儿临床症状消失。结论颅脑MRI丘脑、脑干(背侧)、苍白球、小脑齿状核的对称性DWI异常信号可出现在VGB治疗婴儿痉挛症过程中,部分可累及海马,多为可逆性的。DWI对病变的检出率高。

Mer受体酪氨酸激酶与SD大鼠糖尿病周围神经病变的相关性

背景:糖尿病周围神经病变的发病机制目前尚未明确,TAM(Tyro3、Axl和MerTK)受体酪氨酸激酶具有控制中枢神经系统凋亡细胞和抑制炎症反应的作用。目的:探讨2型糖尿病及其周围神经病变SD大鼠血浆及坐骨神经组织Mer受体酪氨酸激酶水平的差异,研究Mer受体酪氨酸激酶与糖尿病周围神经病变的关联性。方法:40只雄性SD大鼠随机分为对照组15只、2型糖尿病组10只及2型糖尿病周围神经病变组15只。对照组大鼠喂普通饲料,实验组大鼠行高脂高糖饮食6周,并腹腔内注射单剂量小剂量链脲佐菌素35 mg/kg,14 d尾静脉取血检测血糖≥16.7 mmol/L为2型糖尿病造模成功。周围神经病变组大鼠动物继续高糖、高脂喂养8周。麻醉后活体分离检测大鼠坐骨神经传导速度,腹主动脉取血,取坐骨神经组织。光镜下观察各组神经纤维组织学改变,确认糖尿病周围神经病变造模成功。ELISA检测大鼠外周血血糖、血脂及血清MerTK水平,苏木精-伊红染色观察坐骨神经组织学改变;免疫荧光、免疫组化及免疫蛋白印迹检测坐骨神经组织中MerTK的表达。结果与结论:①实验成功构建SD大鼠2型糖尿病及2型糖尿病周围神经病变大鼠模型,糖尿病周围神经病变成模率80%;与对照组比较,2型糖尿病及糖尿病周围神经病变组大鼠血糖水平显著升高(P<0.0001),糖尿病周围神经病变组高于2型糖尿病组;坐骨神经传导速度明显下降(P<0.05),糖尿病周围神经病变组低于2型糖尿病组。②组织学检查:与对照组相比,2型糖尿病组大鼠坐骨神经核减少,有部分空泡变性,出现吞噬细胞;糖尿病周围神经病变组胞体肿胀,核间距增大,出现空泡变性,髓鞘周围出现隔断、不平滑,轴索变为网格状。③血清中MerTK水平:糖尿病周围神经病变组显著高于对照组(P<0.05)。④坐骨神经组织中MerTK的表达:与对照组比较,糖尿病周围神经病变组中明显上调(P<0.05)。⑤结论:糖尿病周围神经病变大鼠血浆及坐骨神经组织中Mer受体酪氨酸激酶水平升高,推测与其抗炎及免疫调节作用有关。

硒代蛋氨酸法和改进体外三步法测定过瘤胃蛋氨酸生物利用率及相关性研究

[目的]本试验分别采用硒代蛋氨酸法和改进体外三步法评估3种过瘤胃蛋氨酸(A、B、C)的生物利用率,并对两种方法所得结果进行相关性分析和回归分析,旨在探究两种方法之间的关系。[方法](1)硒代蛋氨酸法:选用33头健康泌乳奶牛,按照随机区组试验设计分为3组,试验期共32 d,分为3个阶段,其中前7 d为预饲期(第0阶段),第8~22天为第1阶段,随后10 d为第2阶段。第0阶段奶牛仅饲喂基础饲粮,第1阶段所有奶牛均按照0.3 mg Se/kg DM补充硒酵母,第2阶段继续补充相同剂量的硒酵母,同时依据相同有效蛋氨酸的量(25 g/d),3组奶牛分别补充过瘤胃蛋氨酸A(33.3 g/d, A组)、B(29.4 g/d, B组)和C(56.82 g/d, C组)。在第22和32天采集奶样,用于硒、蛋氨酸和氮浓度的测定,以硒浓度/蛋氨酸浓度(硒浓度/氮浓度)比值的变化评估3种过瘤胃蛋氨酸的生物利用率。(2)改进体外三步法:选用3头安装瘤胃瘘管的泌乳奶牛,3种过瘤胃蛋氨酸各设置2个平行,3个重复,通过瘤胃孵育、体外模拟胃-小肠消化测定干物质(DM)和粗蛋白质(CP)的过瘤胃率和小肠消化率以评估其生物利用率。(3)分析两种方法之间的相关性并建立回归方程。[结果]硒代蛋氨酸法结果表明,过瘤胃蛋氨酸A基于牛奶硒浓度/蛋氨酸浓度和牛奶硒浓度/氮浓度比值变化计算的生物利用率分别为:83.02%和81.42%,过瘤胃蛋氨酸B的分别为:72.94%和72.47%,过瘤胃蛋氨酸C的分别为:51.77%和50.98%。改进体外三步法结果显示,过瘤胃蛋氨酸A、B和C的生物利用率分别为86.87%、75.47%和59.56%。比较两种方法的测定结果,二者无显著差异(P>0.05),且呈极显著正相关(r=0.867~0.964,P<0.01)。[结论]在本试验条件下,硒代蛋氨酸法和改进体外三步法均能用于3种过瘤胃蛋氨酸的生物利用率的测定,且两种方法间存在较强的正相关关系。

λ-Red重组技术结合复合诱变提高大肠杆菌L-异亮氨酸合成能力

本研究旨在通过λ-Red重组技术结合复合诱变方法提高大肠杆菌L-异亮氨酸合成能力。以E. coli NXA为出发菌株,首先采用λ-Red同源重组敲除编码支链氨基酸转运蛋白基因brnQ,获得突变菌株E. coli NXA1。然后将E. coli NXA1经常温常压等离子体(ARTP)、紫外(UV)与亚硝基胍(NTG)多轮复合诱变,以α-氨基丁酸(α-AB)为结构类似物进行筛选,筛选得到突变菌株E. coli NXA2。摇瓶发酵结果表明,在37℃、200 r/min条件下发酵40 h后,E. coli NXA1的L-异亮氨酸滴度为2.76 g/L,较E. coli NXA提高了33.98%;E. coli NXA2的L-异亮氨酸滴度为3.22 g/L,较E. coli NXA1提高了16.67%,较E. coli NXA提高了56.31%。对菌株E. coli NXA2经连续传代20代后,表现出较好的遗传稳定性。λ-Red重组技术结合复合诱变对大肠杆菌提高L-异亮氨酸合成能力有明显效果,为选育L-异亮氨酸高产菌株奠定理论基础。

微生物群落演替对豆酱发酵过程中酪氨酸代谢的影响

为寻找消除豆酱表面白点的有效方法,提升豆酱品质,本研究对豆酱整个发酵过程的微生物群落演替、理化特性和酪氨酸代谢途径之间的相关性进行分析。结果表明,发酵过程中的优势细菌是克雷伯氏菌属、芽孢杆菌属、四生球菌属、片球菌属、葡萄球菌属、肠球菌属和魏斯氏菌属,优势真菌是曲霉属、接合酵母属和伊萨酵母属,微生物群落演替主要受p H值、总酸和氨基态氮的影响。酪氨酸代谢的主要功能群落是肠杆菌属和芽孢杆菌属,且发酵初期芽孢杆菌属具有较高的降解酪氨酸潜力,但在整个发酵过程合成酪氨酸潜力均远低于肠杆菌。本研究结果可为降低豆酱中酪氨酸含量和解决白点问题提供理论依据,同时对改善豆酱产品外观品质具有一定现实意义。

共培养大肠杆菌和谷氨酸棒杆菌合成圣草酚研究

微生物共培养技术在生物制造中应用广泛,尤其在天然产物的微生物合成中发挥重要作用.植物天然产物圣草酚具有抗菌、抗氧化等多种药理作用,在医药、食品等领域具有良好应用前景.为利用葡萄糖这一廉价碳源从头合成圣草酚,运用微生物共培养技术,构建了大肠杆菌BAK101菌株与谷氨酸棒杆菌NE1菌株的共培养发酵体系,其中BAK101可将葡萄糖转化为L-酪氨酸,NE1可将L-酪氨酸转化为圣草酚.通过系统优化,采用补料分批发酵结合分段式共培养方式,利用2%的葡萄糖经过100 h发酵,在摇瓶中实现了4.72 mg/L圣草酚的从头合成.本研究为黄酮类化合物的微生物共培养合成奠定了基础,也为复杂天然产物在微生物中的从头合成提供了参考.

蛋白酪氨酸磷酸酶受体R型对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探索蛋白酪氨酸磷酸酶受体R型(PTPRR)对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法应用UALCAN网站对癌症基因组图谱(TCGA)数据库中胶质瘤样本PTPRR的表达情况进行分析。取20例胶质瘤患者术中切除的新鲜脑胶质瘤组织及20例创伤性脑出血患者的正常脑组织,培养人胶质瘤细胞株及人星形胶质细胞系,取U87细胞分别转染PTPRR的过表达质粒pcDNA3.1/PTPRR(pcDNA3.1/PTPRR组)和空白对照质粒pcDNA3.1(pcDNA3.1组)。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胶质瘤细胞系及胶质瘤组织的PTPRR mRNA表达;CCK-8实验检测细胞活性;集落形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;并进行细胞凋亡实验。结果UALCAN网站分析显示胶质瘤中PTPRR mRNA表达水平低于正常脑组织,且高级别胶质瘤低于低级别胶质瘤;PTPRR低/中表达者的生存期较高表达者更短。qRT-PCR结果显示,PTPRR mRNA在胶质瘤细胞系及胶质瘤组织中均呈低表达;CCK-8实验结果显示,过表达PTPRR后24 h、48 h的胶质瘤细胞活性较pcDNA3.1组均降低。集落形成实验、Transwell迁移及侵袭实验结果显示,过表达PTPRR后胶质瘤细胞集落形成个数、迁移及侵袭能力较pcDNA3.1组均降低。细胞凋亡实验结果显示,过表达PTPRR后胶质瘤细胞凋亡率升高。结论PTPRR在胶质瘤中呈低表达,且作为抑癌基因抑制胶质瘤细胞的活性、增殖、迁移及侵袭能力,促进胶质瘤细胞凋亡。

精氨酸加压素在孤独症谱系障碍社会交往障碍患儿中的研究进展

孤独症谱系障碍(ASD)是一种异质性神经发育障碍性疾病。至今为止,发病机制未明,其早期表现为普遍存在的社交缺陷和沟通障碍,并伴有重复性刻板行为。目前无特定针对性治疗药物。精氨酸加压素(AVP)不仅与水盐平衡和应激轴调节有关,还与社会行为有关,因此在ASD研究领域,AVP作为一种潜在的治疗方案,越来越受到人们的关注。本文对国内外文献研究AVP在ASD社会交往中异常表现的相关研究进行综述。在本文中,探讨了AVP可能成为ASD的诊断性生物标志物及AVP系统具有改善ASD社会功能特征的潜力,希望本综述能为ASD社会交往障碍的临床诊治提供思路。

功能化自组装胶束增强氨甲环酸在皮肤色素沉着治疗中的作用

背景:氨甲环酸局部给药可用于改善皮肤色素沉着,但氨甲环酸极性大,局部给药时难以突破皮肤角质层屏障和细胞膜,皮下蓄积不易达到有效治疗浓度。目的:设计功能化自组装胶束,增强氨甲环酸抗皮肤色素沉着作用。方法:采用植物多酚衍生物表没食子儿茶素没食子酸棕榈酸酯与二甲双胍作为载体材料,通过氢键与静电作用自组装包载氨甲环酸,制备具有协同对抗色素沉着活性和增强药物渗透性能的载药自组装胶束;检测载药自组装胶束的纳米特性及稳定性,评价载药自组装胶束体外经皮渗透性能,考察载药自组装胶束的生物安全性和细胞水平效应。结果与结论:①载药自组装胶束的平均粒径为(176.27±5.23)nm,多分散系数为0.23±0.02,Zeta电位为(-25.67±0.98)mV,具有良好的稳定性,载药自组装胶束中氨甲环酸、二甲双胍质量浓度分别为(20.03±0.12),(6.67±0.08)mg/mL,载药自组装胶束对氨甲环酸和二甲双胍的载药量分别为(19.97±0.12)%,(6.65±0.08)%;②体外透皮实验结果显示,与氨甲环酸比较,载药自组装胶束具有更高的单位皮肤面积透过量和皮内贮留量,能渗透并扩散至皮肤更深层部位;③MTT检测结果显示,含氨甲环酸50-250μg/mL的载药自组装胶束对小鼠成纤维细胞与小鼠皮肤黑色素瘤细胞均无毒性作用,含氨甲环酸500μg/mL的载药自组装胶束对小鼠皮肤黑色素瘤细胞有轻微毒性作用;含氨甲环酸50-500μg/mL的载药自组装胶束未引发溶血反应,具有良好的生物安全性;④体外细胞培养结果显示,含氨甲环酸500μg/mL的载药自组装胶束可显著抑制小鼠皮肤黑色素瘤细胞的酪氨酸酶活性及黑色素释放,并且抑制作用强于单独的氨甲环酸溶液与二甲双胍溶液。结果表明,功能化自组装胶束能协同氨甲环酸抑制酪氨酸酶活性、减少黑色素合成,增强氨甲环酸抗皮肤色素沉着效应。

抗血管生成药物在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药的非小细胞肺癌中的应用

目的 分析经表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗后发生进展的晚期EGFR敏感突变的肺腺癌患者,持续使用EGFR-TKI基础上加用安罗替尼治疗的疗效和安全性。方法 回顾性分析2018年01月至2022年12月期间就诊于四川省人民医院的52例EGFR敏感突变的经EGFR-TKI治疗耐药的晚期肺腺癌患者的临床资料。在原有EGFR-TKI基础上联合安罗替尼治疗,探讨影响EGFR-TKI联合安罗替尼治疗疗效的因素。将无进展生存期1(PFS1)定义为从一线开始应用EGFR-TKI药物直到疾病出现进展(PD)的时间;将无进展生存期(PFS)定义为从接受EGFR-TKI治疗到联合安罗替尼治疗后出现进展(PD)的时间。结果 经EGFR-TKI治疗后,mPFS1为21个月(95%CI:16~27);EGFR-TKI联合安罗替尼治疗的mPFS为30个月(95%CI:24~36)。对PFS影响因素的单因素分析发现,吸烟史、初诊时EGFR突变位点及不同EGFR-TKI治疗方式的P值小于0.1,将这三个因素纳入多因素COX回归分析,显示不同EGFR-TKI治疗方式是影响PFS的重要影响因素(P<0.05)。结论 抗血管生成药物安罗替尼与EGFR-TKI联合应用,对于表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药的敏感突变晚期肺腺癌患者显示出良好的治疗效果,在临床实践中具有很高的应用价值。

外源亮氨酸对发酵香肠品质的影响

为研究亮氨酸添加量对发酵香肠品质的影响,采用外源添加不同含量亮氨酸(0.1、0.5、5.0 g/kg)及选用具有改善发酵香肠风味作用的发酵粘液乳杆菌YZU-06(L6)和植物乳植杆菌CGMCC18217(L10)作为香肠发酵剂(接种量为107 CFU/g),比较不同亮氨酸添加量对发酵香肠的质构、色泽、游离氨基酸、挥发性风味物质及感官等品质的作用。结果表明,5.0 Leu+L6处理组显著提高了发酵香肠的硬度和咀嚼性(P<0.05),5.0 Leu+L10处理组能显著提高发酵香肠红度值(a*)(P<0.05)。5.0 Leu+L6和5.0 Leu+L10两组中产生的风味化合物3-甲基丁醛的含量显著高于其他各组(P<0.05)。其中,5.0 Leu+L10组将亮氨酸转化为3-甲基丁醛的效率最高(P<0.05)。主成分分析显示,相较于仅接菌组(L6、L10),5.0 Leu+L6和5.0 Leu+L10处理组对发酵香肠的整体风味特征具有较大影响。此外,5.0 Leu+L10处理组在感官评价中显示具有最高的滋味得分(13.33)。综上,5.0 Leu+L10处理组更能有效改善发酵香肠的品质。

大肠杆菌利用不同碳源生产N-乙酰神经氨酸的研究

N-乙酰神经氨酸是最常见的一种唾液酸,通常位于细胞膜表面糖蛋白和糖脂的末端,具有多种生物学功能。由于其独特的生理和生化性质,N-乙酰神经氨酸在制药、化妆品和食品行业的应用越来越广泛,需求量不断增加。N-乙酰神经氨酸在大肠杆菌中的异源生物合成需要与中心碳代谢过程竞争前体物,因此,碳源利用效率,以及碳代谢流在细胞生长与N-乙酰神经氨酸合成中的分配,直接影响N-乙酰神经氨酸的合成效率。该研究从碳源利用调控角度,比较了葡萄糖、甘油,以及两者混合利用对N-乙酰神经氨酸合成的影响。在单一葡萄糖碳源条件下,菌株NEU5AC-2中pfkA的敲除减弱了中心碳代谢的强度,减少了副产物乙酸的积累,协调了前体物N-乙酰甘露糖胺与磷酸烯醇式丙酮酸的供应,5 L发酵罐分批补料发酵38 h产生23.8 g/L N-乙酰神经氨酸,获得了较高的发酵生产水平,具有较强的工业应用潜力。该研究可以为其他以糖酵解途径的中间代谢物为前体物的异源产物合成提供借鉴。

N-乙酰半胱氨酸对热胁迫香菇菌丝活性氧代谢及糖酵解的影响

为探究外源N-乙酰半胱氨酸(NAC)对热胁迫香菇(Lentinula edodes)菌丝活性氧代谢和糖酵解的影响,本研究以耐热性较弱菌株为供试菌株,设置不同浓度的外源NAC添加至培养基中,于37℃热胁迫处理下筛选出最佳添加浓度。采用此浓度,于37℃下进行热胁迫(胁迫0、6、12、24 h),以及热胁迫后恢复生长(胁迫24 h后于25℃下恢复培养6 h)处理,测定菌丝活性氧代谢和糖酵解相关指标。结果表明,0.1 mmol·L^(-1)为最佳添加浓度。在热胁迫中,与未添加NAC(对照)相比,添加NAC处理超氧阴离子、过氧化氢、蛋白质羰基、硫代巴比妥酸反应物含量的峰值分别显著降低40.94%、41.97%、53.21%、47.62%;超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、抗坏血酸过氧化物酶、己糖激酶、丙酮酸激酶活性和还原型谷胱甘肽含量的峰值分别显著提高19.21%、43.98%、12.36%、21.95%、25.42%、54.41%、31.93%。同时,在热胁迫恢复生长中,添加NAC处理的菌丝活性氧物质和氧化损伤产物含量仍显著低于对照,而超氧化物歧化酶、过氧化物酶、抗坏血酸过氧化物酶、己糖激酶、丙酮酸激酶活性以及还原型谷胱甘肽含量仍显著高于对照。NAC有效维持了胁迫中菌丝活性氧稳态,使抗氧化酶活性和还原型谷胱甘肽含量保持在较高水平,并减缓氧化损伤程度和进程,加快菌丝糖酵解途径。多因素方差分析表明,NAC主要对还原型谷胱甘肽、硫代巴比妥酸反应物、超氧阴离子含量和己糖激酶、过氧化氢酶、抗坏血酸过氧化物酶活性等指标具有显著效应。本研究结果为外源NAC在热胁迫环境下食用菌中的应用推广提供了新思路。

吲哚胺2,3-双加氧酶1介导色氨酸代谢增强促进食管鳞癌放射抵抗

目的 探究食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)发生放射抵抗的生物学机制,寻找有效增敏靶点。方法 从MSigDB数据库获取186条信号通路及通路相关基因信息。利用癌症基因图谱计划(the Cancer Genome Atlas, TCGA)和基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)获得ESCC患者的RNA转录组数据。收集2013—2020年西安交通大学第一附属医院97例ESCC患者的临床病理特征及组织样本。使用基因集变异分析(gene set variation analysis, GSVA)计算KEGG信号通路评分,通过随机森林算法筛选放疗抵抗相关信号通路,利用DESeq2筛选通路中关键基因,基于支持向量机-递归特征消除(support vector machine-recursive feature elimination, SVM-RFE)构建放疗疗效预测模型;并通过蛋白印迹、克隆形成等实验进行验证。结果 基于KEGG信号通路的GSVA富集评分,随机森林分析显示,在TCGA队列及GSE45670队列中,色氨酸代谢通路富集值对ESCC放射抵抗的贡献程度显著优于其他通路。DESeq2分析发现,色氨酸代谢通路中关键分子吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)、ALDH1B1、AOC1、INMT、AFMID和ALDH7A1在ESCC抵抗组及敏感组中表达存在显著差异,利用上述差异基因基于SVM-RFE算法构建预测模型的曲线下面积为0.77,可较准确预测ESCC放疗疗效。蛋白印迹实验表明,IDO1在ESCC细胞中高表达,且IDO1抑制剂处理显著抑制KYSE-410细胞的存活及放射敏感性。入组患者中,免疫组化结果显示,IDO1在ESCC放疗抵抗组中高表达,且与ESCC患者的放疗不良预后相关;此外,进一步检测发现,IDO1在患者样本中的表达与其PD-L1表达正相关,且与CD3/CD8免疫细胞浸润比例负相关。结论 色氨酸分解代谢与ESCC放射抵抗相关,色氨酸代谢关键酶IDO1可作为ESCC放射增敏的治疗靶点。

纳米微针导入氨甲环酸联合口服维生素C治疗黄褐斑的疗效评价

目的:探究纳米微针导入氨甲环酸、口服维生素C治疗黄褐斑的疗效及美学效果。方法:选取笔者医院2018年10月-2020年10月笔者医院收治的138例黄褐斑患者,采用随机数字列表法将其分为对照组(n=69)和观察组(n=69),两组均给予维生素C口服,对照组涂抹5%氨甲环酸精华液,观察组则进行纳米晶体辅助5%氨甲环酸精华液透皮给药,连续治疗3个月,比较两组黄褐斑面积和严重指数(MASI)评分、临床疗效、黑色素指数、美学满意度、不良反应。结果:治疗前,两组MASI评分、黑色素指数差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组MASI评分、黑色素指数均较治疗前降低(P<0.05),观察组MASI评分、黑色素指数的减小程度大于对照组(P<0.05);观察组总有效率显著高于对照组(P<0.05);观察组治疗后的美学满意度显著优于对照组(P<0.05);两组均未发生红斑、水肿、感染、局部色素沉着等不良反应。结论:纳米微针皮透氨甲环酸、维生素C联合治疗黄褐斑的疗效及美学效果较好,建议推广。